Roche VENTANA PD-L1 (SP263) Assay IVD W Manuel utilisateur

Guide d’interprétation du
VENTANA PD‑L1 (SP263) Assay
pour le cancer bronchique non à
petites cellules
2 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Sommaire
Introduction5
Utilisation prévue
6
Utilisation prévue du produit
6
Objectif du guide d’interprétation
6
Évaluation7
Évaluation des profils et des intensités de coloration des cellules tumorales
7
Critères d’acceptabilité de la morphologie et du bruit de fond
14
Tissu de contrôle positif
15
Critères d’évaluation
16
Atlas de l’expression de PD-L1 dans le NSCLC
18
Galerie de photos
18
Caractéristiques complexes
38
Impact des conditions préanalytiques sur la coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay 54
Références56
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 3
4 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Introduction
Le cancer du poumon, ou cancer bronchique, est l’un des cancers
La protéine PD-L1 est exprimée dans une grande variété de cancers,
les plus fréquents dans le monde et demeure une cause majeure de
comme le cancer du poumon, le mélanome, le cancer urothélial, le
mortalité liée au cancer dans le monde. Bien que des progrès aient
cancer de l’ovaire et le cancer colorectal. La fréquence de l’expression
été réalisés en matière de diagnostic et de traitement, le pronostic
de PD-L1 dans les cancers varie de 12 à 100 % selon le type de tumeur
demeure défavorable avec de faibles taux de survie à long terme, quel
et le clone d’anticorps anti-PD-L1 et le seuil de positivité utilisés.7
que soit le stade, ce qui indique un besoin médical non satisfait.
Le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay est un test immunohistochimique
Le cancer bronchique non à petites cellules (NSCLC), l’un des deux
(IHC) qui utilise un anticorps primaire monoclonal de lapin
principaux types de cancer du poumon, représente près de 85 % de
anti-PD-L1 (VENTANA PD-L1 (SP263)) pour reconnaître la protéine
tous les cas de cancer du poumon. Chez plus de la moitié des patients
PD-L1 (programmed death ligand 1).
1
chez qui le NSCLC a nouvellement été diagnostiqué, la maladie s’est
déjà métastasée, ce qui réduit nettement la probabilité de survie. Le
taux de survie relatif à 5 ans chez les patients atteints d’un NSCLC
avec métastases est de 4.7 %.1 La majorité des patients atteints de
NSCLC présentent une maladie inopérable de stade localement avancé
(stade IIIB) ou une maladie métastatique (stade IV) pour laquelle
il n’existe actuellement aucun traitement curatif. En moyenne, ces
patients meurent dans l’année qui suit le diagnostic. L’amélioration
des résultats cliniques du cancer du poumon pourra certainement
être possible grâce à une meilleure compréhension des événements
moléculaires à la base de sa pathogenèse en identifiant de nouveaux
biomarqueurs cibles et en développant de nouvelles options de
traitement.
PD-L1 est une protéine transmembranaire qui diminue les réponses
immunitaires en se liant à ses deux récepteurs inhibiteurs programmed
death-1 (PD-1) et B7.1.2 PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé sur
les lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette activation
perdurant dans des conditions de stimulation chronique comme
chez les patients présentant une infection chronique ou un cancer.3
La liaison de PD-L1 à PD-1 inhibe la prolifération des lymphocytes T,
la production de cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne
l’inactivation fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T. B7.1
est une molécule exprimée sur les cellules présentatrices d’antigène
et sur les lymphocytes T activés. La liaison de la protéine PD-L1 au
récepteur B7.1 sur les lymphocytes T et les cellules présentatrices
d’antigène peut entraîner une diminution des réponses immunitaires,
y compris une inhibition de l’activation des lymphocytes T et de la
production des cytokines.4 L’expression de PD-L1 sur les cellules
immunitaires et tumorales a été observée.5,6 Il a été suggéré qu’une
expression aberrante de PD-L1 sur les cellules tumorales pourrait
entraver l’immunité antitumorale et permettre ainsi à ces cellules
d’échapper à la réponse immunitaire.3,6 L’interruption de la voie PD-L1/
PD-1 représente donc une stratégie intéressante pour redynamiser
l’immunité des lymphocytes T spécifique de la tumeur supprimée
par l’expression de PD-L1 dans le microenvironnement tumoral.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 5
Utilisation prévue
Utilisation prévue du produit
Consulter la fiche technique du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour une
description détaillée de l’utilisation prévue de ce produit.
Objectif du guide d’interprétation
Le guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay est destiné à aider
les anatomopathologistes à interpréter et à évaluer les tissus de NSCLC colorés
avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
• Les photographies incluses dans ce guide d’interprétation illustrent
les profils de coloration, ainsi que la plage des niveaux d’expression de
PD‑L1, qui peuvent être présents dans les tissus de NSCLC colorés avec le
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
• Les critères de coloration décrits dans ce guide d’interprétation définissent
le système d’évaluation des échantillons de tissu de NSCLC colorés avec le
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
• L’utilisation du placenta comme tissu de contrôle dans le contexte de
l’évaluation de PD-L1 ainsi que les caractéristiques et les performances de la
coloration correspondantes sont traitées.
• Les cas difficiles, les artefacts de coloration et l’impact des conditions
préanalytiques sur le test sont également abordés.
6 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Évaluation
Évaluation des profils et des intensités de coloration des cellules tumorales
Les cellules néoplasiques de NSCLC marquées avec le
La coloration cytoplasmique est généralement diffuse, certains cas
VENTANA PD‑L1 (SP263) Assay sont évaluées afin de déterminer
présentant une qualité finement granuleuse. De rares cas ont présenté
le pourcentage de cellules tumorales positives, à savoir de cellules
une coloration punctiforme périnucléaire d’une intensité variable. Le
tumorales présentant une coloration de la membrane quelle que
pourcentage total de cellules tumorales présentant un signal membranaire
soit l’intensité du signal de la diaminobenzidine (DAB). La coloration
d’une intensité adéquate est estimé visuellement et utilisé pour générer le
immunohistochimique dans le NSCLC est membranaire
niveau d’expression de PD-L1. La coloration cytoplasmique des cellules
et/ou cytoplasmique et peut être présente de façon homogène ou
tumorales n’est pas prise en compte pour déterminer l’expression de
hétérogène dans tout le néoplasme. La coloration de la membrane
PD‑L1. Un anticorps de contrôle isotypique négatif est utilisé pour évaluer
peut avoir un profil discontinu, circonférentiel ou basolatéral.
la présence d’un bruit de fond dans les échantillons testés et pour établir
une intensité de coloration de référence.
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : divers cas illustrant la gamme de colorations membranaires et cytoplasmiques dans les
cellules tumorales (20x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 7
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : cellules tumorales avec profil de coloration membranaire basolatéral. (20x)
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : cas inhabituel avec coloration punctiforme périnucléaire dans les cellules tumorales. (40x)
8 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : dans les cas présentant des cellules avec un profil de coloration membranaire basolatéral,
seules les cellules dont la nature tumorale est évidente doivent être incluses dans l’estimation du pourcentage (la flèche rouge indique des cellules
tumorales avec une coloration des faces basale et latérales de la membrane cytoplasmique). Les zones où la coloration pourrait être attribuée à
des cellules immunitaires, à des éléments stromaux ou à la membrane basale, et non à des cellules dont la nature tumorale est certaine, doivent
être ignorées (la flèche bleue indique des cellules tumorales avec une coloration le long de la face basale des cellules sans coloration des faces
latérales). (20x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 9
Profils de coloration des cellules immunitaires
Les cellules immunitaires présentent la gamme d’intensité de
Des images représentatives de cellules immunitaires colorées avec
coloration suivante : négatives, faible signal cytoplasmique diffus
le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay sont fournies ci-dessous à titre
et/ou signal membranaire faible à fort. Un profil de coloration
de référence pour aider l’anatomopathologiste à différencier la
punctiforme peut être observé en association avec des lymphocytes.
coloration des cellules tumorales de celle des cellules immunitaires.
L’expression de PD-L1 a été observée dans les lymphocytes, les
REMARQUE : les cellules immunitaires ne sont pas incluses dans
macrophages, les histiocytes, les plasmocytes et les neutrophiles.
l’évaluation du statut de PD-L1.
NSCLC, H&E : cellules tumorales avec macrophages alvéolaires
NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : coloration positive de
(flèche). (20x)
macrophages alvéolaires avec tumeur adjacente négative pour PD-L1 ;
coloration de 0 %. (20x)
NSCLC, H&E : cellules tumorales avec des lymphocytes et des
NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : coloration punctiforme
plasmocytes. (20x)
(flèche bleue) et diffuse (flèche noire) de cellules immunitaires avec
une tumeur adjacente négative pour PD-L1, coloration de 0 %. (20x)
10 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : à un grossissement de 4x (panneaux supérieurs), le profil de coloration semble comprendre
une coloration significative de la membrane cytoplasmique des cellules tumorales. L’examen à un grossissement plus fort (20x, en bas) révèle que
la tumeur est essentiellement négative pour PD-L1, avec une coloration membranaire (flèche noire) et punctiforme (flèche bleue) des cellules
immunitaires. Une coloration de cellules dendritiques est également observée (flèche rouge).
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 11
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : plasmocytes présentant une coloration cytoplasmique diffuse faible à modérée. Les cellules
tumorales environnantes ne présentent pas de coloration. (20x)
12 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : les neutrophiles identifiés sur la lame colorée à l’H&E présentent une expression de PD-L1
(flèche bleue). Le cas présente également une coloration de la membrane cytoplasmique de cellules tumorales (flèche noire). (40x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 13
Tissus requis
Le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay nécessite une coupe de tissu
Si l’évaluation de la lame colorée à l’H&E indique que l’échantillon
sériée pour la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E), une
du patient n’est pas adéquat, un nouvel échantillon doit alors être
deuxième coupe de tissu sériée pour la coloration avec l’anticorps
prélevé. La coloration d’un échantillon doit être répétée sur des lames
de contrôle négatif et une troisième coupe de tissu sériée pour la
qui n’ont pas encore été colorées si (1) la lame de tissu de contrôle du
coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. De plus, du tissu
cycle ne présente pas une coloration acceptable, (2) la lame du cas
de placenta humain normal à terme peut être utilisé comme contrôle
de contrôle négatif ne présente pas de coloration acceptable ou (3) la
pour le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu placentaire présente
lame du cas colorée avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay (la lame
une coloration membranaire uniforme d’intensité modérée à forte et
colorée pour la détection de PD-L1) n’est pas évaluable. Si la dernière
une coloration cytoplasmique uniforme d’intensité faible à forte des
de ces lames n’est pas interprétable en raison d’artefacts, d’effets
cellules de la lignée trophoblastique. La vascularisation et le tissu
de bord, de nécrose, d’un manque de tissu ou de toute autre raison,
stromal du placenta peuvent être utilisés pour évaluer le bruit de fond
la lame ne peut pas être utilisée pour une évaluation clinique. Si les
de coloration.
contrôles sont acceptables et que la lame colorée avec le VENTANA
PD-L1 (SP263) Assay est évaluable, la lame peut être évaluée par un
anatomopathologiste dûment formé comme décrit dans les critères
d’évaluation.
Critères d’acceptabilité de la morphologie et du bruit de fond
L’acceptabilité de la morphologie des tissus et l’acceptabilité du bruit de fond sont évaluées pour chaque tissu de patient selon les critères décrits
dans les tableaux 1 et 2.
Tableau 1 : critères d’acceptabilité de la morphologie
Interprétation
Observation au microscope
Acceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt sont suffisamment visibles pour permettre l’interprétation de la coloration.
Inacceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont pas visibles ; l’interprétation de la coloration est impossible.
Tableau 2 : critères d’acceptabilité du bruit de fond
Interprétation
Description de la coloration
Acceptable
Coloration non spécifique qui ne gêne pas l’interprétation de la coloration spécifique.
Inacceptable
Coloration non spécifique qui gêne l’interprétation de la coloration spécifique.
14 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Tissu de contrôle positif
Un tissu de contrôle positif connu, fixé et préparé de la même manière
que les échantillons des patients, doit être inclus pour chaque ensemble
de conditions de tests et pour chaque procédure de coloration exécutée
à l’aide du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu de contrôle (cas
index) doit être un échantillon fraîchement prélevé lors d’une autopsie,
d’une biopsie ou d’une intervention chirurgicale et préparé et fixé
dès que possible après le prélèvement et de manière identique aux
échantillons des patients. Ce tissu peut être utilisé pour contrôler toutes
les étapes de préparation et de coloration des échantillons. Une coupe
de tissu fixée ou préparée différemment de l’échantillon testé peut être
utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non pour
la fixation ou la préparation des tissus. Un cas de NSCLC positif avec
une coloration modérée est plus adapté à servir de contrôle qualité
qu’un cas avec une forte coloration. Il peut être utilisé pour détecter
des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes
hors spécifications qui pourraient être liés à l’appareil. Une coloration
positive de la membrane des cellules néoplasiques dans le tissu de
contrôle confirme que l’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a bien été
appliqué et que l’appareil a fonctionné correctement. Le tissu de contrôle
positif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances et non
pour aider à établir un diagnostic clinique à partir des échantillons des
patients. De plus, du tissu de placenta humain normal à terme peut
être utilisé comme contrôle positif pour le VENTANA PD-L1 (SP263)
Assay. Ce tissu présente une coloration uniforme modérée à forte de
la membrane et une coloration uniforme faible à forte du cytoplasme
des cellules de la lignée trophoblastique. La vascularisation et le tissu
stromal du placenta peuvent être utilisés pour évaluer le bruit de fond de
coloration.
Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : forte coloration
Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : le stroma et la
uniforme de la membrane et coloration modérée du cytoplasme des
vascularisation dans les villosités ne présentent aucune coloration
cellules de la lignée trophoblastique (10x)
pour PD-L1 (20x)
Tableau 3 : critères d’évaluation du tissu placentaire de contrôle pour le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Interprétation
Description de la coloration
Acceptable
Coloration uniforme modérée à forte de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique
et
aucune coloration du stroma et de la vascularisation placentaires.
Inacceptable
Aucune coloration à faible coloration uniforme de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique
et/ou
coloration spécifique dans le tissu stromal et la vascularisation placentaires.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 15
Critères d’évaluation
Un score d’évaluation de PD-L1 dans le NSCLC est attribué par un
Les cas non évaluables comprennent, mais sans s’y limiter, les cas
anatomopathologiste en fonction du pourcentage de cellules tumorales
avec un nombre insuffisant de cellules tumorales viables, un bruit de
(% de TC) présentant une coloration membranaire d’une intensité
du fond gênant ou une décalcification. Les cas de NSCLC présentant
supérieure à l’intensité du bruit de fond. Un niveau d’expression est
un nombre suffisant de cellules tumorales viables (tel que déterminé
attribué aux cas, comme décrit dans l’approche de l’évaluation de PD-L1.
par l’anatomopathologiste chargé de l’évaluation) et sans bruit du
fond gênant sur la lame colorée pour PD-L1 sont acceptables pour
l’évaluation.
Des images illustrant divers profils de coloration et niveaux
d’expression sont présentées dans les sections suivantes.
Approche de l’évaluation de PD-L1
Tableau 4 : Algorithme de notation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour les cellules tumorales
Description de la coloration
Évaluer le pourcentage de cellules tumorales présentant une coloration membranaire positive pour PD-L1 d’une intensité supérieure à
l’intensité du bruit de fond de coloration observée sur la lame colorée avec l’anticorps de contrôle isotypique négatif.
L’expression de PD-L1 est indiquée sous forme de nombre entier.
16 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Évaluation du pourcentage de cellules avec une coloration de la membrane
Le guide illustré suivant illustre un spectre quantitatif du nombre de
été illustrés afin de constituer une échelle représentative pour aider
cellules tumorales présentant une coloration de la membrane sur
l’anatomopathologiste lors de l’évaluation de la coloration pour PD‑L1.
un champ d’échantillon de NSCLC contenant des cellules tumorales
Il est à la discrétion de l’anatomopathologiste de déterminer si le
viables à des fins d’illustration uniquement. Des niveaux d’expression
nombre de cellules contenues dans l’échantillon est suffisant.
de 0 à 100 % de cellules tumorales avec coloration de la membrane ont
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 17
Atlas de l’expression de PD-L1 dans le NSCLC
Galerie de photos
Une coloration positive est caractérisée par la présence de tout signal
la membrane des cellules tumorales n’est pas facilement discernable
détectable d’une intensité supérieure à l’intensité du bruit de fond de
à faible grossissement et peut nécessiter un examen patient et
coloration de la membrane des cellules néoplasiques observée sur
méthodique de la lame colorée à un grossissement plus fort, en
la lame colorée avec l’anticorps de contrôle isotypique négatif. Cet
particulier dans les cas où une faible coloration cytoplasmique est
atlas de l’expression de PD-L1 comprend des exemples de niveaux
également présente.
d’expression dans divers champs de vision. Une légère coloration de
Cas 1 : coloration négative des cellules tumorales et des cellules immunitaires (0 %). (20x)
Pour les cas présentant une expression de PD-L1 à l’extrémité
PD-L1 de moins de 1 % et un niveau d’expression de PD-L1 de 1 %
inférieure du spectre, toute coloration de la membrane d’histiocytes
étant subtile, il est important que l’anatomopathologiste s’entraîne
ou de macrophages alvéolaires doit être identifiée afin d’éviter de la
à apprécier les expressions légères. En s’entraînant à estimer
confondre avec une coloration des cellules tumorales. L’examen de la
visuellement le nombre de cellules tumorales colorées et le nombre
lame H&E peut permettre de différencier les cellules tumorales des
total de cellules tumorales, il est possible de devenir apte à apprécier
cellules immunitaires. La différence entre un niveau d’expression de
de légères différences de niveau d’expression.
18 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas 2 : moins de 1 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 19
Cas 3 : 2 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x)
20 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Faible coloration
de la membrane
de TC
Cas 4 : 3 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Une légère nébulosité cytoplasmique est également présente, ce qui
ne compte pas dans l’estimation du score. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 21
Coloration d’IC
Faible coloration
de la membrane
de TC
Cas 5 : 4 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Des IC présentent également une coloration pour PD-L1.
Assurez-vous que seules les TC avec une coloration de la membrane sont dénombrées pour l’estimation du score. (10x)
22 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas 6 : tumeur avec 5 % de cellules présentant une coloration de la membrane entourée en bleu. La zone tumorale (constituée d’une tumeur
viable et du tissu desmoplasique et du tissu enflammé environnants) contient des zones focales avec des cellules immunitaires présentant une
expression de PD-L1. (4x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 23
Coloration de
la membrane
de TC
Coloration de
la membrane
de TC
Cas 7 : 7 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x)
24 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas 8 : 9 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Une coloration foncée est plus facile à repérer à faible grossissement,
mais il est nécessaire d’utiliser des objectifs de plus fort grossissement pour s’assurer de ne manquer aucune cellule avec une faible coloration de
la membrane. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 25
TC avec une
coloration de la
membrane faible
TC avec
coloration
cytoplasmique
Cas 9 : 12 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x). Examinez la lame à faible grossissement, puis utilisez des
grossissements plus forts pour différencier la coloration cytoplasmique de la coloration de la membrane.
26 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas 10 : tumeur avec 15 % de cellules présentant une coloration de la membrane (contour bleu). Une coloration de cellules immunitaires
associées à la tumeur est également observée. (2x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 27
Zone de
nécrose
Zone de
nécrose
Cas 11 : 20 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Prenez soin d’exclure les signaux associés à la nécrose et aux IC
de l’estimation du score. (10x)
28 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas 12 : 25 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 29
Cas 13 : tumeur avec 35 % des cellules présentant une coloration de la membrane dans ce champ (contours bleus). La zone tumorale contient
quelques cellules immunitaires exprimant PD-L1 (contours noirs). (4x)
30 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas 14 : 35 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. La majorité des TC présentent une nébulosité cytoplasmique avec
environ un tiers des TC présentant une coloration de la membrane faible à modérée. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 31
Cas 15 : 40 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Notez que la majorité des TC positives à la coloration pour
PD‑L1 présentent une faible coloration de la membrane. (10x)
32 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Faible coloration de la
membrane de TC
Cas 16 : 50 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 33
Cas 17 : 75 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane faible à modérée. (10x)
34 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas 18 : 85 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 35
Cas 19 : 100 % des cellules tumorales présentent une forte coloration de la membrane. (10x)
36 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Planche 20 : coloration de la membrane de 100 % des cellules tumorales (4x)
Cas 21 : coloration positive de la membrane des cellules tumorales (100 %) sans coloration des cellules immunitaires associées à la tumeur. (20x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 37
Caractéristiques complexes
• Hétérogénéité
Divers profils de coloration et diverses caractéristiques
morphologiques peuvent rendre difficiles l’interprétation et la
Lorsqu’une distribution hétérogène de l’expression est observée,
quantification de la coloration des cellules tumorales avec coloration
de la membrane. Certains cas peuvent être particulièrement difficiles à
évaluer en raison des problèmes suivants :
l’estimation du pourcentage total de cellules tumorales présentant
une coloration de la membrane peut être difficile. Une approche
systématique consistant à diviser la tumeur en surfaces plus petites,
mais égales, de tumeur viable, à ensuite évaluer ces surfaces pour
• Faible coloration cytoplasmique
déterminer le pourcentage de cellules tumorales avec une coloration
Certains échantillons peuvent présenter une faible coloration
de la membrane et à calculer la moyenne des pourcentages de
cytoplasmique des cellules tumorales, qui peut être confondue à
faible grossissement avec une faible coloration de la membrane des
cellules tumorales. Pour cette raison, lors de l’évaluation de lames
chacune des surfaces, peut être utile.
Quelques exemples de cas difficiles sont présentés dans les pages
colorées avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, une coloration
faible doit être confirmée par un examen à plus forts grossissements
suivantes.
pour différencier la coloration de la membrane de la coloration du
cytoplasme des cellules tumorales.
• Chevauchement d’une forte coloration de cellules
immunitaires avec la coloration de cellules tumorales
Certaines tumeurs peuvent contenir une importante composante
inflammatoire entourant et infiltrant la tumeur. Dans les cas où
une forte coloration est observée pour les cellules tumorales et
immunitaires, il peut être difficile de différencier et de quantifier
le niveau d’expression de PD-L1 pour les cellules tumorales. La
présence de cellules immunitaires infiltrant la tumeur doit être
confirmée à l’aide de la lame H&E. Le profil de coloration pour
PD-L1 et les caractéristiques nucléaires cellulaires sont utilisés
pour attribuer l’expression aux cellules immunitaires (coloration
punctiforme) et aux cellules tumorales (coloration linéaire de la
membrane).
• Occultation par des substances endogènes et exogènes
Parfois, dans les échantillons de NSCLC, des substances endogènes
et/ou exogènes, tels que le pigment anthracosique, la mélanine ou
l’hémosidérine, peuvent occulter la coloration des cellules tumorales
et immunitaires réalisée avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
et gêner l’interprétation. La comparaison de la lame colorée avec
l’anticorps de contrôle isotypique négatif avec la lame colorée
pour PD-L1 peut permettre de différencier la coloration spécifique
au biomarqueur de la substance endogène ou exogène. Dans les
tumeurs de NSCLC avec une formation importante de kératine,
une réponse histiocytaire sous la forme de cellules géantes à corps
étranger peut être déclenchée. En cas d’un tel type de réponse
immunitaire, la coloration de la membrane des cellules géantes peut
être confondue avec la coloration des cellules tumorales.
38 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas difficile 1 : la coloration du cas de NSCLC avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a produit une faible coloration du cytoplasme
(flèche noire) et une faible coloration de la membrane (flèche verte) de cellules tumorales. Un examen à plus fort grossissement est nécessaire
pour différencier une faible coloration cytoplasmique d’une faible coloration membranaire. Une coloration de macrophages alvéolaires est
également observée (flèche rouge). Dans ce champ, 10 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (20x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 39
Cas difficile 2 : la coloration du cas de NSCLC avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a produit une faible coloration de la membrane de cellules
tumorales (flèche noire). De nombreuses cellules tumorales présentent également une nébulosité cytoplasmique. Dans ce champ, 90 % des
cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (20x)
40 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas difficile 3 : la tumeur présente des cellules avec à la fois une faible coloration cytoplasmique et une faible coloration membranaire
(flèche noire) et d’autres cellules avec seulement une faible coloration de la membrane (flèche bleue). Dans ce champ, 90 % des cellules
tumorales présentent une coloration de la membrane. (20x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 41
Nébulosité
cytoplasmique
Faible coloration
membranaire
Faible coloration
membranaire
Cas difficile 4 : une forte coloration membranaire est visible à faible grossissement. Il est nécessaire de vérifier que la faible coloration de la
membrane n’est pas ignorée. Cela peut s’avérer particulièrement difficile en présence de nébulosité cytoplasmique. (10x)
42 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas difficile 5 : coloration des TC et des IC. Il peut être difficile de déterminer si le signal est attribuable à des TC ou des IC. Cet exemple présente
également une nébulosité cytoplasmique dans un pourcentage significatif de TC. (10x). (Suite à la page suivante.)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 43
Cas difficile 5 (suite) : l’utilisation d’un fort grossissement et la comparaison avec la lame colorée à l’H&E sont nécessaires pour déterminer
les caractéristiques de la coloration. Cet exemple présente une coloration de la membrane des TC (incluse dans l’évaluation), une coloration
cytoplasmique des TC (non incluse) et une coloration des IC (non incluse). (20x)
44 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas difficile 6 : coloration des IC, principalement. Les IC présentant un signal pour PD-L1 ne sont pas prises en compte pour
l’estimation du score. (10x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 45
Macrophages
avec coloration
de la membrane
Macrophages
avec coloration
de la membrane
Cas difficile 7 : coloration de macrophages. Les macrophages présentent parfois une coloration de la membrane modérée à forte qui n’est pas
prise en compte pour l’estimation du score. (10x)
46 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas difficile 8 : un cas de NSCLC avec une inflammation mixte importante a été coloré avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Des cellules
immunitaires avec une coloration membranaire (flèche noire) et des cellules immunitaires avec une coloration punctiforme (flèche bleue) sont
observées mêlées à des cellules tumorales présentant une coloration linéaire partielle de la membrane (flèche rouge). Dans ce champ, 40 % des
cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. La lame colorée à l’H&E révèle que la tumeur est fortement enflammée. (40x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 47
Cas difficile 9 : cellules tumorales avec une coloration membranaire (flèche noire) mêlées à des cellules immunitaires avec une coloration
diffuse (flèche bleue) et punctiforme (flèche rouge). Dans ce champ, 100 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane.
(20x)
48 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas difficile 10 : le cas de NSCLC coloré avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay présente une anthracose (flèche noire) et une réaction de
cellules géantes à corps étranger (flèche rouge) à exclure de l’interprétation du cas (rangée supérieure, 20x). Une zone différente du cas contient
du pigment anthracosique (flèche noire) chevauchant des cellules immunitaires avec une coloration punctiforme (flèche verte) ainsi que des
cellules tumorales avec une coloration membranaire (flèche bleue en bas). Dans ce champ, 80 % des cellules tumorales présentent une coloration
de la membrane (bas). (20x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 49
Cas difficile 11 : l’anthracose sera également visible sur le NRC (partie supérieure). L’utilisation du NRC permet d’éliminer les pigments de
l’estimation du score. (20x)
50 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Cas difficile 12 : l’utilisation de forts grossissements permet de repérer les TC avec une faible coloration de la membrane. (20x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 51
Cas difficile 13 : les cellules avec une forte coloration de la membrane sont facilement repérables aux faibles grossissements. Utilisez des forts
grossissements pour vous assurer de ne pas manquer les TC avec une faible coloration de la membrane, en particulier lorsqu’elles sont adjacentes
à des cellules avec une forte coloration de la membrane. (20x)
52 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
50%
90%
35%
25%
Cas difficile 14 : dans cet échantillon, les cellules tumorales présentant une coloration de la membrane sont réparties de façon hétérogène
(contours bleus). La division de la surface totale de la tumeur en surfaces plus petites contenant un même nombre de cellules tumorales viables
permet de réaliser une estimation plus précise. Le pourcentage de cellules tumorales avec une coloration membranaire dans chaque partie
est estimé, la moyenne des pourcentages de chacune des parties est calculée pour déterminer le niveau d’expression global de PD-L1. Toute
coloration dans les zones nécrotiques est exclue. Dans cet exemple, la moyenne des pourcentages de cellules tumorales viables présentant une
expression membranaire de chacun des quadrants donne un niveau d’expression global de PD-L1 de 50 %. Une technique similaire peut être
utilisée pour estimer le niveau d’expression global de PD-L1 dans les cellules immunitaires associées à la tumeur avec une coloration répartie de
façon hétérogène. (0.6x)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 53
Impact des conditions préanalytiques sur la coloration avec le VENTANA PD-L1
(SP263) Assay
Fixations recommandées pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le VENTANA PD-L1
(SP263) Assay
Il est recommandé de fixer les tissus au NBF à 10 % pendant 6 à 72 heures. Les fixateurs acceptables et les temps de fixation sont indiqués en bleu.
Coloration d’un tissu placentaire avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay obtenue avec différents fixateurs et temps de fixation
Fixateur
Temps
(heures)
NBF 10 %
Formol-zinc
Fixateur PREFER**
AFA**
Formol alcoolique**
Éthanol 95 %
1*
6
12
24
48
72
REMARQUES
*Un temps de fixation d’une heure n’est pas recommandé pour tous
les types de fixateurs.
**L’utilisation du fixateur PREFER et de l’éthanol à 95 % (coloration
plus faible) ou des fixateurs alcooliques (fort bruit de fond) n’est
pas recommandée. Voir d’autres images à plus fort grossissement
à droite.
54 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Impact de l’épaisseur des tissus sur la coloration
avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Une épaisseur de tissu de 4 à 5 μm est recommandée pour une
utilisation avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
Stabilité des coupes sur lame
Les coupes doivent avoir une épaisseur de 4 à 5 μm et être montées sur
des lames positivement chargées. Les lames doivent être colorées dès
que possible après la coupe ou séchées et conservées à température
ambiante jusqu’à 45 jours.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 55
Références
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56 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 57
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2021-11-30
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