Roche VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, Lung 1% cutoff, CE IVD, Predictive, NSCLC Manuel utilisateur
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Test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Guide d’interprétation 2 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Table des matières Introduction 5 Utilisation prévue Notice d’utilisation du produit Objectif du Guide d’interprétation 6 6 6 Évaluation Évaluation des profils et de l’intensité de coloration des cellules tumorales Profils de coloration des cellules immunitaires 7 7 10 Exigences concernant les tissus Critères d’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond 14 14 Tissu de contrôle positif 15 Critères de notation Tableau de notation PD-L1 16 16 Évaluation de la coloration membranaire en pourcentage 17 Atlas d’expression de la PD-L1 dans le NSCLC Galerie de photos 18 18 Cas difficiles 32 Influence des conditions préanalytiques sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Stabilité des lames Références Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 40 40 41 41 42 3 4 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Introduction Le cancer du poumon, ou cancer bronchique, est le cancer le plus fréquent dans le monde depuis plusieurs décennies et demeure la cause majeure de mortalité liée au cancer dans le monde. On estime qu’il représente 12,9 % de tous les nouveaux cas de cancer et qu’il est responsable de près de 1,59 million de décès chaque année dans le monde, soit environ un décès sur cinq liés au cancer1. Bien que des progrès aient été faits en matière de diagnostic et de traitement, le pronostic demeure mauvais avec de faibles taux de survie à long terme, quel que soit le stade. Au cours des trois dernières décennies, le cancer du poumon a connu l’une des plus faibles améliorations du taux de survie parmi l’ensemble des cancers2. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay utilise un rabbit monoclonal primary antibody (anticorps primaire monoclonal de lapin) dirigé contre le programmed death-ligand 1 (ligand 1 de mort cellulaire programmée) PD-L1, l’homologue 1 du B7 (CD274). Il reconnaît une glycoprotéine transmembranaire d’un poids moléculaire de 45 à 55 kDa. L’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a été développé par Spring BioScience. Ce produit est un anticorps prédilué destiné à être utilisé sur des instruments BenchMark IHC/ISH avec le kit de détection OptiView DAB IHC, et utilise le Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules. Le cancer du poumon non à petites cellules (NSCLC), l’un des deux principaux types de cancer du poumon, représente près de 85 % de tous les cas de cancer du poumon3. Chez près de la moitié des patients dont le NSCLC a été nouvellement diagnostiqué, la maladie a déjà métastasé, réduisant ainsi nettement la probabilité de survie. Le taux de survie relatif à 5 ans chez les patients diagnostiqués comme présentant un NSCLC avec présence de métastases est de 4,7 %3. La majorité des patients atteints de NSCLC présentent une maladie inopérable de stade localement avancé (stade IIIB) ou une maladie métastatique (stade IV), pour laquelle il n’existe actuellement aucun traitement curatif. En moyenne, ces patients meurent dans l’année qui suit le diagnostic. L’amélioration des résultats cliniques du cancer du poumon pourra certainement être possible grâce à une meilleure compréhension des événements moléculaires à la base de sa pathogenèse, en identifiant de nouveaux biomarqueurs cibles et en développant de nouvelles options de traitement. La PD-L1 est une protéine transmembranaire qui diminue les réponses immunitaires en se liant à deux de ses récepteurs inhibiteurs, programmed death-1 (PD-1) et B7-1 (CD80)4. PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé sur les lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette activation perdurant en état de stimulation chronique comme dans les cas d’infection chronique ou de cancer5. La liaison de PD-L1 et de PD-1 empêche la prolifération des lymphocytes T, la production des cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne l’inactivation fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T. CD80 est une molécule exprimée sur les cellules présentatrices d’antigène et sur les lymphocytes T activés. La liaison de la protéine PD-L1 et du récepteur CD80 sur les lymphocytes T et les cellules présentatrices d’antigène peut entraîner une diminution des réponses immunitaires, y compris l’inhibition de l’activation des lymphocytes T et la production des cytokines6. L’expression de PD-L1 sur les cellules immunitaires et tumorales a été observée7,8. L’expression aberrante de PD-L1 sur les cellules tumorales semblerait entraver l’immunité antitumorale, résultant en une évasion immunitaire5,8. L’interruption de la voie PD-L1/PD-1 représente donc une stratégie intéressante pour redynamiser l’immunité des lymphocytes T spécifiques de la tumeur supprimée par l’expression de PD-L1 dans le microenvironnement tumoral. La PD-L1 est exprimée dans un grand nombre de cancers, dont le cancer des poumons, le mélanome, le cancer urothélial, le cancer de l’ovaire et le cancer colorectal. La prévalence de l’expression de la PD-L1 est comprise entre 12 et 100 % en fonction du type de tumeur, du clone anti PD-L1 et du seuil de positivité9. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 5 Utilisation prévue Notice d’utilisation du produit Consulter la notice du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay correspondant pour une description détaillée de l’utilisation prévue pour ce produit. Remarque : L’utilisation de ce diagnostic avec les traitements indiqués peut ne pas être autorisée dans tous les pays. Consulter votre représentant local Roche pour obtenir les approbations locales. Objectif du Guide d’interprétation Le présent guide a pour objectif de fournir aux pathologistes un outil facilitant l’évaluation clinique de coupes de tissu de NSCLC fixées au formol et incluses en paraffine colorées avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay en utilisant l’algorithme de notation VENTANA PD-L1 (SP263), conformément à la notice du produit. Plus précisément, ce guide : • Contient des clichés photographiques qui illustrent les profils et l’intensité de coloration pouvant résulter de la coloration des tissus de NSCLC avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. • Donne des exemples de cas difficiles à déterminer. • Présente d’autres contrôles susceptibles d’être utilisés avec le test mais qui ne sont pas fournis par Ventana. 6 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Évaluation Évaluation des profils et de l’intensité de coloration des cellules tumorales Les cellules néoplasiques de NSCLC marquées avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay sont évaluées afin de déterminer le pourcentage de positivité des cellules tumorales avec coloration membranaire, quelle que soit l’intensité du signal DAB (diaminobenzidine). La coloration immunohistochimique des tissus de NSCLC est membranaire et/ou cytoplasmique, et peut être exprimée de manière homogène ou hétérogène dans tout le néoplasme. La coloration membranaire peut être discontinue, périphérique ou basolatérale. La coloration cytoplasmique est généralement diffuse bien que certains cas soient finement granulaires. De rares cas ont présenté une coloration punctiforme périnucléaire d’intensité variable. Le pourcentage total d’intensités de signal provenant de la membrane tumorale est estimé visuellement et utilisé pour déterminer le niveau d’expression de la PD-L1. La coloration cytoplasmique des cellules tumorales n’est pas prise en compte pour la détermination de l’expression de la PD-L1. Un anticorps de contrôle négatif correspondant à l’isotype est utilisé pour évaluer la présence d’une coloration de fond dans les échantillons testés et établir une intensité de coloration de référence. NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Divers profils de coloration membranaire et cytoplasmique dans les cellules tumorales (20X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 7 NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cellules tumorales avec coloration membranaire de type basolatéral (20X) NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cas inhabituel de coloration punctiforme périnucléaire au sein des cellules tumorales (40X) 8 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Dans les cas présentant un profil globalement basolatéral de coloration membranaire des cellules tumorales, seules les cellules avec une expression cellulaire tumorale certaine (la flèche rouge indique les cellules tumorales avec coloration membranaire latérale) doivent être incluses dans l’estimation du pourcentage. Les zones où la coloration peut être attribuée à des cellules immunitaires, à des éléments du stroma ou à la membrane basale, et non avec certitude à une coloration tumorale ne doivent pas être prises en compte (la flèche bleue désigne la coloration sous les cellules tumorales sans coloration latérale) (20X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 9 Profils de coloration des cellules immunitaires Les cellules immunitaires présentent toute une gamme d’intensités de coloration : négative, cytoplasmique diffuse faible ou signal membranaire faible à fort. Une coloration punctiforme peut être observée en association avec des lymphocytes. L’expression de la PD-L1 a été constatée dans des lymphocytes, des macrophages, des histiocytes, des cellules plasmatiques et des neutrophiles. Des images représentatives des cellules immunitaires colorées avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay sont fournies ci-dessous pour référence afin d’aider le pathologiste à différencier la coloration des cellules tumorales de celle des cellules immunitaires. Lors de la détermination du niveau d’expression de la PD-L1, la coloration des cellules immunitaires n’est pas prise en compte. REMARQUE : Les cellules immunitaires ne constituent pas un contrôle interne positif fiable. NSCLC, H&E : Cellules tumorales avec macrophages alvéolaires (flèche) (20X) NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration positive des macrophages alvéolaires (flèche) avec tumeur négative à la PD-L1 adjacente, zéro pourcent de coloration (20X) NSCLC, H&E : Cellules tumorales avec cellules immunitaires lymphocytaires et plasmatiques (20X) NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration punctiforme des cellules immunitaires (flèche bleue) et diffuse (flèche noire) avec tumeur négative à la PD-L1 adjacente, zéro pourcent de coloration (20X) 10 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Avec un grossissement de 4X (images du haut), il semble que le profil de coloration soit une coloration de la membrane tumorale significative. L’examen avec un grossissement supérieur (20X, en bas) révèle que la tumeur est globalement négative à la PD-L1, avec une coloration des cellules immunitaires membranaire (flèche noire) et punctiforme (flèche bleue). Une coloration des cellules dendritiques est également observée (flèche rouge). Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 11 NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cellules plasmatiques avec coloration cytoplasmique faible diffuse à modérée. Les cellules tumorales adjacentes ne présentent pas de coloration (20X) 12 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Les neutrophiles colorés à l’aide de H&E expriment la PD-L1 (flèche bleue). Le cas présente également une coloration membranaire des cellules tumorales modérée (flèche noire) (40X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 13 Exigences concernant les tissus Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay nécessite une coupe de tissu en série pour la coloration H&E (hématoxyline et éosine), une deuxième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps de contrôle négatif et une troisième coupe de tissu en série pour la coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. En outre, le tissu placentaire humain sain à terme peut être utilisé comme contrôle pour le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Ce tissu présente une coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une coloration uniforme faible à forte du cytoplasme dans les cellules de la lignée trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma placentaire peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration de fond. Si l’évaluation H&E indique que l’échantillon patient n’est pas adéquat, un nouvel échantillon doit être prélevé. La coloration d’un échantillon doit être répétée sur des lames non colorées si (1) la lame de contrôle du tissu ne présente pas de coloration acceptable ; (2) la lame de contrôle négatif ne présente pas de coloration acceptable ; ou (3) la lame à tester (la lame d’IHC PD-L1) colorée à l’aide du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay ne peut pas être évaluée. Si la dernière de ces lames ne peut pas être interprétée en raison d’artéfacts, d’artéfacts de bordure, d’une nécrose, d’un manque de tissu, ou pour toute autre raison, alors la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique. Si les contrôles sont acceptables et si la lame colorée à l’aide du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay peut être évaluée, la lame peut être évaluée par un pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères de notation. Critères d’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond L’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond des tissus peut être évaluée pour chaque cas de patient en utilisant les critères décrits dans les Tableaux 2 et 3. Tableau 2 : Critères d’acceptabilité de la morphologie Interprétation Observation au microscope Acceptable Les éléments cellulaires d’intérêt sont visualisés, ce qui permet une interprétation de la coloration. Inacceptable Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont pas visualisés, ce qui compromet l’interprétation de la coloration. Tableau 3 : Critères d’acceptabilité de la coloration de fond Interprétation Description de la coloration Acceptable Coloration non spécifique non intrusive à l’interprétation de la coloration spécifique. Inacceptable Coloration non spécifique intrusive à l’interprétation de la coloration spécifique. 14 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Tissu de contrôle positif Un tissu de contrôle positif connu, fixé et traité de la même manière que les échantillons de patients, doit être testé pour chaque ensemble de conditions de test et lors de chaque procédure de coloration réalisée avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu de contrôle (un cas indice) doit être un prélèvement récent d’autopsie, de biopsie ou de chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une manière identique aux tissus de patients. Ces tissus peuvent être utilisés pour contrôler toutes les étapes de traitement et de coloration des échantillons. Une coupe de tissu fixée ou traitée différemment de l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non pour la fixation ou préparation des tissus. Un cas de NSCLC positif avec coloration modérée est plus adapté au contrôle qualité qu’un cas qui présente une coloration forte, car il pourra être Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration membranaire uniforme forte et coloration cytoplasmique modérée des cellules de la lignée trophoblastique (10X) utilisé pour détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes hors spécifications pouvant être liés à l’instrument. La coloration positive de la membrane des cellules néoplasiques dans le tissu de contrôle sert à confirmer que l’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a été appliqué et que l’instrument fonctionne correctement. Le tissu de contrôle positif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances et non pour aider à établir un diagnostic clinique des échantillons de patients. De plus, le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay peut utiliser le placenta humain à terme comme contrôle positif, qui présente une coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une coloration uniforme faible à forte du cytoplasme dans les cellules de la lignée trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma placentaire peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration de fond. Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Stroma et vaisseaux des villosités ne présentant aucune coloration PD-L1 (20X) Tableau 4 : Critères d’évaluation du tissu placentaire de contrôle pour le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Interprétation Description de la coloration Acceptable Coloration uniforme modérée à forte de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique, et coloration du stroma placentaire et des vaisseaux. Inacceptable Coloration uniforme inexistante à faible de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique et/ou coloration spécifique dans le tissu du stroma placentaire et le tissu vasculaire. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 15 Critères de notation Un pathologiste qualifié attribue le score d’IHC pour la PD-L1 en fonction de son évaluation de la fréquence de la coloration IHC membranaire PD-L1 spécifique dans les cellules tumorales. Un niveau d’expression est attribué aux cas comme décrit dans le Tableau de notation PD-L1. Les cas ne pouvant être évalués incluent notamment les cas présentant une quantité de tumeur viable insuffisante, une coloration de fond ou une décalcification. Les cas de NSCLC présentant une quantité suffisante de cellules tumorales viables (comme déterminée par le pathologiste chargé de la notation) et sans coloration de fond sur la lame IHC PD-L1 sont acceptables pour l’évaluation. Des images des divers profils de coloration et d’expression sont fournies dans les pages qui suivent. Tableau de notation PD-L1 Tableau 5 : Notation PD-L1 Évaluer et dénombrer le pourcentage de cellules tumorales dont la membrane est positive à PD-L1, quelle que soit l’intensité au-delà de la coloration de fond, tel que noté sur le contrôle isotype négatif correspondant. Le niveau d’expression de la PD-L1 est indiqué sous forme de nombre entier. 16 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Évaluation de la coloration membranaire en pourcentage La galerie d’images qui suit montre un spectre quantitatif de coloration membranaire des cellules tumorales sur un éventail d’échantillons de NSCLC contenant des cellules tumorales viables, à des fins d’illustration uniquement. Les niveaux d’expression de 0 % à 100 % des cellules tumorales avec coloration membranaire ont été représentés à titre d’exemple afin d’aider le pathologiste à évaluer la coloration PD-L1. La détermination de la quantité suffisante d’échantillon est laissée à la discrétion du pathologiste. 0% <1 % 1% 3% 5% 8% 10 % 20 % 25 % 35 % 50 % 100 % Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 17 Atlas d’expression de la PD-L1 dans le NSCLC Galerie de photos La coloration se caractérise par la présence de tout signal détectable au-delà de la coloration de fond, tel que noté sur le contrôle isotype négatif correspondant par la coloration membranaire des cellules néoplasiques. Cet atlas d’expression contient des exemples des niveaux d’expression dans divers champs visuels. La légère coloration membranaire des cellules tumorales n’est pas facile à discerner à faible grossissement et peut nécessiter un examen patient et méthodique de la lame colorée à un grossissement plus élevé, notamment dans les cas où elle s’accompagne d’une coloration cytoplasmique faible. Jeu de photos 1. Coloration négative des cellules tumorales et immunitaires (zéro pourcent) (20X) Pour les cas présentant une expression de la PD-L1 située en bas du spectre, toute coloration membranaire des histiocytes ou des macrophages alvéolaires doit être identifiée afin de ne pas l’interpréter par erreur comme une coloration des cellules tumorales. Se référer à la lame H&E peut aider à différencier les cellules tumorales des cellules immunitaires. La différence entre l’expression de la PD-L1 inférieure à 1 % et de 1 % étant très mince, la numération des cellules 18 (soit en comptant le nombre total de cellules tumorales présentant une coloration membranaire et en le comparant au nombre total de cellules tumorales viables, soit en comptant les groupes de cellules tumorales dont la membrane est colorée et en le ramenant à l’intégralité de la tumeur viable) peut aider le pathologiste à mieux distinguer ces niveaux d’expression si proches. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Jeu de photos 2. Moins de 1 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Cellules immunitaires éparses présentant une coloration membranaire, cytoplasmique et punctiforme (flèches noires) (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 19 Jeu de photos 3. Tumeur comportant 1 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Macrophages alvéolaires épars avec coloration membranaire faible présents dans les lumières (flèches noires) (10X) 20 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Jeu de photos 4. Tumeur comportant 3 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Cellules immunitaires éparses présentant une coloration principalement punctiforme (flèches et cercles noirs) (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 21 Jeu de photos 5. Tumeur comportant 5 % de cellules avec coloration membranaire entourées en bleu. La zone tumorale (comportant la tumeur viable, une desmoplasie adjacente et une inflammation) contient des zones focales avec des cellules immunitaires montrant l’expression de la PD-L1 (4X) 22 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Jeu de photos 6. Tumeur comportant 10 % de cellules avec coloration membranaire légère à modérée (entourées en bleu) dans ce champ visuel. Cellules immunitaires éparses présentant également une expression de la PD-L1 (entourées en noir) (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 23 Jeu de photos 7. Tumeur comportant 15 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu). Une coloration des cellules immunitaires associées à la tumeur est également observée (2X) 24 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Jeu de photos 8. Tumeur comportant 20 % de cellules avec coloration membranaire légère (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone tumorale contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir) (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 25 Jeu de photos 9. Tumeur comportant 25 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone tumorale contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir). Les zones de nécrose peuvent présenter une coloration et ne doivent pas être prises en compte (entourées en vert) (4X) 26 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Jeu de photos 10. Tumeur comportant 35 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone tumorale contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir) (4X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 27 Jeu de photos 11. Tumeur comportant 50 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone tumorale (comportant la tumeur viable, une desmoplasie adjacente et une inflammation) contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir). Les zones de nécrose colorées sont entourées en vert et ne doivent pas être prises en compte (4X) 28 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Les cas présentant plus de 50 % de cellules tumorales avec coloration membranaire peuvent être estimés de manière plus précise et plus reproductible en évaluant le pourcentage de cellules tumorales sans coloration membranaire puis en le soustrayant à 100 % afin d’obtenir le niveau d’expression de PD-L1 final. Jeu de photos 12. Tumeur comportant 70 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone tumorale contient des cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir). La coloration des zones de nécrose ne doit pas être prise en compte (entourées en vert) (4X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 29 Jeu de photos 13. Tumeur comportant 80 % de cellules avec coloration membranaire dans ce champ visuel. Une estimation des cellules tumorales sans coloration membranaire (entourées en rouge) suivie d’une soustraction à 100 % pour obtenir le pourcentage final de cellules tumorales avec coloration membranaire peut donner des résultats plus précis et reproductibles (10X) 30 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Jeu de photos 14. Coloration de la membrane des cellules tumorales à 100 % (4X) Jeu de photos 15. Coloration de la membrane des cellules tumorales positive (100 %) sans coloration de cellules immunitaires associées à la tumeur (20X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 31 Cas difficiles • Divers profils de coloration et caractéristiques morphologiques peuvent rendre difficiles l’interprétation et la quantification de la coloration membranaire de la tumeur. Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des facteurs suivants : • Coloration cytoplasmique faible Certains échantillons peuvent présenter une faible coloration cytoplasmique des cellules tumorales qui peut être confondue, à faible grossissement, avec une faible coloration membranaire des cellules tumorales. Pour cette raison, lors de l’évaluation des lames colorées à l’aide du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, une coloration faible doit être confirmée par l’examen à un grossissement supérieur afin de distinguer la coloration membranaire de la coloration cytoplasmique dans les cellules tumorales. • Hétérogénéité Lorsqu’une répartition hétérogène de l’expression est observée, l’estimation du pourcentage total de coloration membranaire des cellules tumorales peut s’avérer difficile. Une approche systématique peut être utile : la tumeur est divisée en quantités plus faibles mais égales de tumeur viable qui sont ensuite évaluées pour déterminer le pourcentage de cellules tumorales avec membrane, puis la moyenne est calculée. Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages suivantes. Chevauchement d’une forte coloration des cellules immunitaires et de la coloration des cellules tumorales Certaines tumeurs peuvent contenir un élément hautement inflammatoire à la fois autour de la tumeur et infiltrant celle-ci. Dans certains cas, lorsqu’une coloration forte est observée à la fois pour les cellules tumorales et les cellules immunitaires, il peut s’avérer difficile de différencier et de quantifier le niveau d’expression de la PD-L1 pour les cellules tumorales. La présence de cellules immunitaires infiltrant la tumeur doit être confirmée à l’aide d’une lame H&E. Le profil de coloration de la PD-L1 ainsi que les caractéristiques nucléaires des cellules sont utilisés pour attribuer l’expression aux cellules immunitaires (coloration punctiforme) et aux cellules tumorales (coloration membranaire linéaire). • Matériel endogène et exogène Il arrive que du matériel endogène et/ou exogène soit présent dans les échantillons de NSCLC, comme du pigment anthracosique, de la mélanine ou de l’hémosidérine, et qu’il obscurcisse et gêne l’interprétation de la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay des cellules tumorales et immunitaires. La comparaison de la lame de contrôle isotype négatif avec la lame colorée de PD-L1 peut permettre de différencier la coloration des biomarqueurs du matériel endogène ou exogène. Dans les tumeurs de NSCLC présentant une formation de kératine significative, une réponse histiocytaire sous la forme de cellules géantes de corps étranger peut être observée. Une telle réponse immunitaire peut avoir l’apparence d’une coloration de cellules tumorales avec une coloration membranaire des cellules géantes. 32 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Cas difficile 1. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC, avec une coloration cytoplasmique faible (flèche noire) et une coloration membranaire faible (flèche verte) de la cellule tumorale. L’examen à un grossissement supérieur est nécessaire pour différencier la coloration cytoplasmique faible de la coloration membranaire faible. Une coloration des macrophages alvéolaires est également observée (flèche rouge). Dans ce champ visuel, 10 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 33 Cas difficile 2. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC avec une coloration membranaire faible de la tumeur (flèche noire). De nombreuses cellules tumorales s’accompagnent d’un blush cytoplasmique. Dans ce champ visuel, 90 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X) 34 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Cas difficile 3. La tumeur montre des cellules présentant à la fois une coloration cytoplasmique faible et une coloration membranaire faible (flèche noire) et seulement une coloration membranaire faible (flèche bleue). Dans ce champ visuel, 90 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 35 Cas difficile 4. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC présentant une inflammation incluse significative. La coloration membranaire des cellules immunitaires (flèche noire) et la coloration punctiforme des cellules immunitaires (flèche bleue) sont enchevêtrées avec les cellules tumorales présentant une coloration membranaire linéaire partielle (flèche rouge). Dans ce champ visuel, 40 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire. La tumeur très enflammée est observée sur la lame H&E (40X) 36 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Cas difficile 5. Coloration membranaire des cellules tumorales (flèche noire) entremêlée avec une coloration des cellules immunitaires diffuse (flèche bleue) et punctiforme (flèche rouge). Dans ce champ visuel, 100 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 37 Cas difficile 6. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC présentant une anthracose (flèche noire) et une réaction à cellules géantes de corps étranger (flèche rouge) non associée à l’interprétation du cas (en haut, 20X). Une zone différente du cas contient du pigment anthracosique (flèche noire) chevauchant une coloration punctiforme de cellules immunitaires (flèche verte) ainsi qu’une coloration membranaire des cellules tumorales (en bas, flèche bleue). Dans ce champ visuel, 80 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (en bas, 20X) 38 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 50 % 90 % 35 % 25 % Les cellules tumorales avec coloration membranaire sont réparties de manière hétérogène dans l’intégralité de l’échantillon (entourées en bleu). La division d’une tumeur entière en coupes plus petites comportant des quantités égales de tumeur viable permet d’effectuer une estimation plus précise. Le pourcentage de cellules tumorales avec coloration membranaire dans chaque coupe est estimé et la moyenne des coupes est calculée pour déterminer le niveau d’expression global de la PD-L1. La coloration des zones de nécrose ne doit pas être prise en compte. Dans cet exemple, la moyenne des pourcentages de cellules tumorales viables avec expression membranaire provenant de chaque quadrant donne un niveau d’expression global de la PD-L1 de 50 % (0,6X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 39 Influence des conditions préanalytiques sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Ventana recommande d’effectuer la fixation pendant 6 à 72 heures dans du NBF à 10 %. Les fixateurs acceptables et les temps de fixation sont encadrés en bleu. Coloration du tissu placentaire par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay selon les fixateurs et les temps de fixation Fixateur Heure temporelle (heures) NBF à 10 % Formol zinc Fixateur PREFER** AFA** Formol alcool** Éthanol à 95 %** 1* 6 12 24 48 72 REMARQUES *Un temps de fixation d’une heure est recommandé pour tous les types de fixateurs. **L’utilisation du fixateur PREFER et d’éthanol à 95 % (coloration plus faible) ou de fixateurs à base d’alcool (coloration de fond élevée) n’est pas recommandée. Voir les images supplémentaires à un grossissement supérieur sur la droite. 40 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Ventana recommande une épaisseur de tissu de 4 à 5 μm avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Stabilité des lames Des coupes d’environ 4 à 5 μm d’épaisseur doivent être prélevées et montées sur des lames chargées positivement. Les lames doivent être colorées dès que possible après la coupe ; toutefois, des études sur la stabilité des lames conservées entre 2 et 8 °C et à 30 °C ont démontré que la coloration est adéquate dans les 12 mois suivant la préparation. 41 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules Références 1. Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, et al. GLOBOCAN 2012 v1.0. Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11. http://globocan.iarc.fr. Published 2013-12-12. Updated 2014-01-09. Accessed 2016-02-08. 2. Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer Statistics, 2013. CA Cancer J Clin. 2013;63(1):11-30. 3. Howlader N, Noone AM, Krapcho M, et al. (eds). SEER Cancer Statistics Review (CSR),1975-2012. National Cancer Institute. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2012/. Published 2015-04-23. Updated 2015-11-18. Accessed 2016-02-08. 4. Keir ME, Butte MJ, Freeman GJ, et al. PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Annu Rev Immunol 2008;26:677-704. 5. Blank C, Mackensen A. Contribution of the PD-L1/PD-1 pathway to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic infections and tumor evasion. Cancer Immunol Immunother. 2007;56(5):739-745. 6. Butte MJ, Keir ME, Phamduy TB, et al. Programmed death-1 ligand 1 interacts specifically with the B7-1 costimulatory molecule to inhibit T-cell responses. Immunity. 2007;27(1):111122. 7. Dong H, Zhu G, Tamada K, et al. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat Med. 1999;5(12):1365-1369. 8. Massard C, Gordon MS, Sharma S, et al. Safety and efficacy of durvalumab (MEDI4736), an anti-programmed cell death ligand-1 immune checkpoint inhibitor, in patients with advanced urothelial bladder cancer. J Clin Oncol. 2016;34(26):3119-3126. 9. Patel SP, Kurzrock R. PD-L1 expression as a predictive biomarker in cancer immunotherapy. Mol Cancer Ther. 2015;14(4) 847-856. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à petites cellules 42 Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany www.ventana.com © 2019 Ventana Medical Systems, Inc. Tous droits réservés. VENTANA, BENCHMARK, OPTIVIEW et le logo VENTANA sont des marques de commerce de la société Roche. Toutes les autres marques sont la propriété de leurs détenteurs respectifs. 1015317FR Rev E 2019-03-26