Roche Staining Colorectal Tissue for VENTANA MMR IHC Panel (OUS) Manuel utilisateur
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VENTANA MMR IHC Panel Guide d’interprétation de la coloration de tissu colorectal VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody Table des matières Introduction ........................................................................................................................................................................................4 Cancer colorectal et syndrome de Lynch .................................................................................................................................................. 4 Stratification pour le syndrome de Lynch dans le cancer colorectal ................................................................................................ 4 VENTANA MMR IHC Panel ...........................................................................................................................................................5 Utilisation du VENTANA MMR IHC Panel pour l’identification du statut MMR et du syndrome probable de Lynch .................................................................................................................................................................. 5 VENTANA MMR IHC Panel ...........................................................................................................................................................6 Utilisation prévue du VENTANA MMR IHC Panel ................................................................................................................................... 6 VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody ............................................................................................. 6 VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody ........................................................................................ 6 VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody .............................................................................. 7 VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody .......................................................................................... 7 VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody................................................................................ 7 Objectif du Guide d’interprétation................................................................................................................................................................ 9 Flux d’échantillon pour la coloration avec le VENTANA MMR IHC Panel ..................................................................................... 10 Évaluation clinique des MMR IHC Assays ............................................................................................................................. 11 Évaluation des profils et de l’intensité de coloration ............................................................................................................................ 11 Flux d’échantillon des MMR IHC Assays ................................................................................................................................................. 13 Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond......................................................................................................................... 14 Contrôle au niveau du système ................................................................................................................................................................... 14 Contrôles positifs internes ............................................................................................................................................................................ 16 Critères de cas de cancer colorectal pour l’évaluation clinique ....................................................................................................... 17 Algorithme de score des MMR IHC Assays ............................................................................................................................................ 18 Arbre décisionnel des MMR IHC Assays ................................................................................................................................................. 19 Cas avec statut MMR Intact ....................................................................................................................................................... 20 Cas de cancer colorectal avec expression de protéines MMR Intacte .......................................................................................... 20 Cas avec statut MMR de Perte.................................................................................................................................................. 24 Cas de cancer colorectal avec perte de l’expression de protéines MMR...................................................................................... 24 Cas difficiles.................................................................................................................................................................................... 28 Coloration de fond non spécifique............................................................................................................................................................. 29 Coloration focale.............................................................................................................................................................................................. 31 Coloration punctiforme .................................................................................................................................................................................. 32 Évaluation clinique de VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ...................................................................................... 33 Évaluation des profils et de l’intensité de coloration ............................................................................................................................ 33 Flux d’échantillons pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ............................................................................................... 34 Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond......................................................................................................................... 35 Contrôle au niveau du système ................................................................................................................................................................... 35 Algorithme de score pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ............................................................................................ 36 Arbre décisionnel ............................................................................................................................................................................................ 37 Le cas est Négatif pour BRAF V600E ...................................................................................................................................... 38 Cas de cancer colorectal avec statut Négatif pour BRAF V600E ..................................................................................................... 38 Les cas sont Positifs pour BRAF V600E .................................................................................................................................. 40 Cas de cancer colorectal avec statut Positif pour BRAF V600E........................................................................................................ 40 Cas difficiles.................................................................................................................................................................................... 44 1016703FR Guide d’interprétation 2019 2 Coloration de fond non spécifique............................................................................................................................................................. 45 Coloration de fond élevée non spécifique ............................................................................................................................................... 46 Coloration nucléaire ....................................................................................................................................................................................... 47 Coloration focale.............................................................................................................................................................................................. 49 Exemples de cas du VENTANA MMR IHC Panel ................................................................................................................. 50 Stabilité des lames ........................................................................................................................................................................ 54 Références....................................................................................................................................................................................... 55 1016703FR Guide d’interprétation 2019 3 Introduction Cancer colorectal et syndrome de Lynch Le cancer colorectal (CCR) est le troisième cancer le plus fréquent chez les hommes et le deuxième chez les femmes, avec environ 1,4 million de nouveaux cas et 694 000 décès dans le monde en 2012. Les taux d’incidence varient considérablement selon le lieu : on estime que les taux les plus élevés se produisent en Australie/Nouvelle-Zélande, en Europe et en Amérique du Nord.1 Aux États-Unis seuls, les CCR représentent 8,0 % de tous les nouveaux cas de cancer et on estime qu’en 2012, 1,2 million de personnes sont atteintes des cancers du rectum et du côlon.2 Le risque de développer le cancer colorectal est influencé par des facteurs environnementaux (p. ex. des facteurs alimentaires, l’obésité, le tabagisme et la consommation d’alcool) et par des facteurs génétiques. Bien que la majorité des cas de CCR sont de nature sporadique, 5 à 10 % des cas sont dus à des mutations héréditaires autosomiques dominantes.3 Le sous-type le plus courant de CCR héréditaire est le syndrome de Lynch, qui représente 3 % de tous les diagnostics de CCR.4 Le syndrome de Lynch (cancer du côlon héréditaire non polyphasique, HNPCC) a été décrit dans les années 1960 et un lien a été fait entre la perte de la fonction de réparation des mésappariements de l’ADN (MMR) et le cancer.5 La perte de toute protéine MMR (MLH1, PMS2, MSH2 ou MSH6) peut entraîner une instabilité des microsatellites et un risque accru non seulement de cancer colorectal mais aussi de cancer de l’estomac, du cerveau, de la peau, de l’endomètre et des ovaires. Les patients atteints du syndrome de Lynch ont un risque à vie de 40 à 60 % de développer le cancer colorectal.6 Stratification pour le syndrome de Lynch dans le cancer colorectal En utilisant des dosages IHC pour MLH1, PMS2, MSH2 et MSH6, le statut MMR de la tumeur peut être déterminé. La détection des quatre protéines dans la tumeur indique un état de réparation de mésappariement normal ou compétent (pMMR). La perte de l’expression de MLH1 s’accompagne presque toujours de la perte de son partenaire hétérodimère, PMS2. Dans les occurrences sporadiques de CCR, l’expression du gène MLH1 peut être supprimée par la méthylation de son promoteur. Si le résultat indique une perte de la protéine MLH1, un test pour voir si la mutation BRAF V600E est présente stratifiera la tumeur comme sporadique ou comme un syndrome de Lynch probable et indiquera la nécessité d’un test supplémentaire de l’état de méthylation du promoteur MLH1. La présence de la mutation BRAF V600E avec perte de la protéine MLH1 indique que la tumeur est le résultat d’un événement sporadique et fait du syndrome de Lynch une cause sous-jacente de la tumeur maligne très peu probable.5 Si la mutation BRAF V600E et la méthylation du promoteur 1016703FR Guide d’interprétation 2019 4 MLH1 sont négatives, le statut de réparation de mésappariement d’ADN déficient (dMMR) est compatible avec le syndrome de Lynch et justifie un test génétique pour obtenir un diagnostic de confirmation.5 L’utilisation de l’IHC pour la détection des protéines PMS2, MSH2 et MSH6 est un indicateur plus direct du statut mutationnel de la lignée germinale. La perte de PMS2 en présence de l’expression MLH1 ou la perte des expressions MSH2 ou MSH6 indique que la tumeur est dMMR et est compatible avec le syndrome de Lynch. Toutes les personnes atteintes du syndrome présumé de Lynch doivent être orientées vers un conseil génétique et d’autres tests génétiques pour confirmer la présence de la mutation présumée. VENTANA MMR IHC Panel Utilisation du VENTANA MMR IHC Panel pour l’identification du statut MMR et du syndrome probable de Lynch Le VENTANA MMR IHC Panel (VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody) permet l’identification des patients atteints d’une carence en MMR et la stratification du cancer colorectal (CCR) en forme sporadique ou syndrome de Lynch probable. Ceci est résumé à la Figure 1. Figure 1 : Utilisation du VENTANA MMR IHC Panel 1016703FR Guide d’interprétation 2019 5 VENTANA MMR IHC Panel Utilisation prévue du VENTANA MMR IHC Panel VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody Le VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1)) est conçu pour la détection qualitative de la protéine MLH1 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine. L’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX avec le OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires. L’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du syndrome de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin de différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine MLH1. Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés. Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV). VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody Le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-PMS2 (A16-4)) est conçu pour la détection qualitative de la protéine PMS2 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine. L’anticorps VENTANA anti-PMS2 (A16-4) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit, l’Optiview Amplification Kit et les réactifs accessoires. L’anticorps VENTANA anti-PMS2 (A16-4) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA antiMLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du syndrome de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin de différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine MLH1. Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés. Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV). 1016703FR Guide d’interprétation 2019 6 VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody Le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-MSH2 (G2191129)) est conçu pour la détection qualitative de la protéine MSH2 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine. L’anticorps VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires. L’anticorps VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du syndrome de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin de différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine MLH1. Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés. Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV). VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody Le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-MSH6 (SP93)) est conçu pour la détection qualitative de la protéine MSH6 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine. L’anticorps VENTANA anti-MSH6 (SP93) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires. L’anticorps VENTANA anti-MSH6 (SP93) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA antiMLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du syndrome de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin de différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine MLH1. Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés. Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV). VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody Le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)) est conçu pour la détection qualitative de la protéine BRAF V600E dans des coupes de tissu fixé au formol et 1016703FR Guide d’interprétation 2019 7 inclus en paraffine. L’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires. L’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA antiMLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en protéine de réparation de mésappariement en tant que test pour l’identification des individus à risque de syndrome de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR) et, avec le statut BRAF V600E, comme aide à la différenciation entre le CCR sporadique et un syndrome de Lynch probable en l’absence de l’expression de la protéine MLH1. Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés. Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV). 1016703FR Guide d’interprétation 2019 8 Objectif du Guide d’interprétation Ce guide vise à aider les pathologistes lors de l’évaluation clinique des coupes de tissu de carcinome colorectal fixées au formol, incluses en paraffine (FFPE) et colorées avec les dosages qui comprennent le VENTANA MMR IHC Panel conformément à l’étiquetage prévu du produit. Plus précisément, ce guide : · Contient des clichés photographiques qui illustrent les profils et intensités de coloration susceptibles de résulter de la coloration des tissus de carcinome avec les dosages qui comprennent le VENTANA MMR IHC Panel. · Fournit une référence pour associer des profils et intensités de coloration à des scores cliniques spécifiques de biomarqueur MMR. · Donne des exemples de cas difficiles à déterminer. · Discute d’autres contrôles susceptibles d’être utilisés avec le dosage mais qui ne sont pas fournis par Ventana. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 9 Flux d’échantillon pour la coloration avec le VENTANA MMR IHC Panel Tissue sample of colorectal carcinoma is taken from the patient, fixed in 10% neutral buffered formalin for 6-48 hours according to standard lab practices and embedded in paraffin. Sections 4-5 microns in thickness are mounted on positively charged slides. One section is stained with H&E. Repeat Staining NO Is the H&E slide acceptable? (≥ 50 viable tumor cells) YES For each assay in the VENTANA MMR IHC Panel: (1) One section is stained with a one of the following: VENTANA anti-MLH1(M1) VENTANA anti-PMS2(A16-4) VENTANA anti MSH2 (G219-1129) VENTANA anti-MSH6 (SP93) VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) (2) One section is stained with a negative reagent control antibody (corresponding to the species of the respective VENTANA MMR IHC Panel assay) in the same staining run. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 10 Évaluation clinique des MMR IHC Assays Évaluation des profils et de l’intensité de coloration Les cellules marquées avec les dosages IHC pour les quatre protéines MMR (MLH1, PMS2, MSH2 et MSH6) sont évaluées pour détecter la présence ou la perte des signaux diaminobenzidine (DAB). Dans le carcinome colorectal, la coloration immunohistochimique des quatre protéines MMR suit un profil de coloration nucléaire. Dans les cas de CCR avec syndrome de Lynch ou mutations somatiques, la perte de l’une des quatre protéines MMR détectée par les MMR IHC Assays est observée dans les noyaux des cellules tumorales. Le signal est catégorisé comme Intact ou comme Perte en fonction de la localisation nucléaire uniquement. · Un signal positif (Intact) est caractérisé par des cellules tumorales qui présentent une coloration nucléaire univoque d’une quelconque intensité au-dessus du fond. · Une intensité de signal négative (Perte) est caractérisée par l’absence de signal détectable ou par une décoloration gris pâle ou beige du noyau des cellules tumorales. Le signal DAB peut être réparti de manière homogène, avec un niveau uniforme d’intensité dans toutes les parties néoplasiques de la tumeur ou distribué de manière hétérogène avec plus d’un niveau d’intensité. Un anticorps de contrôle négatif correspondant à l’espèce sert à évaluer la présence d’une coloration de fond dans les échantillons testés et établir une intensité de coloration de référence. Chaque dosage nécessite trois coupes de tissus en série de chaque échantillon de tissu, une coupe pour la coloration hématoxyline et éosine (H&E), une deuxième coupe pour la coloration avec l’anticorps de réactif de contrôle négatif et une troisième coupe pour la coloration avec un des anticorps MMR. Un tissu CCR pré-qualifié avec un statut MMR intact peut être utilisé comme un contrôle positif au niveau du système. Si l’évaluation H&E indique que l’échantillon du patient n’est pas adéquat (par exemple si moins de 50 cellules de tumeur viables sont présentes), un nouvel échantillon doit alors être prélevé. La coloration d’un échantillon pour un dosage spécifique IHC de MMR au sein du panel (par ex. l’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1)) doit être répétée sur des lames non colorées si 1) la lame de contrôle positif au niveau du système colorée par ce dosage ne présente pas de coloration acceptable ; 2) la lame du cas colorée avec un réactif de contrôle négatif adapté à ce dosage ne présente pas de coloration acceptable ou 3) la lame du cas colorée avec ce dosage spécifique IHC de MMR (par ex. l’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1)) ne peut pas être évaluée. Si la dernière de ces lames ne peut pas être interprétée en raison d’une absence de coloration dans les cellules de contrôle positif interne, d’artefacts, d’effets de contour, d’une nécrose, d’un manque de tissu, ou pour toute autre raison, alors la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique. Si les 1016703FR Guide d’interprétation 2019 11 contrôles sont acceptables et si la lame colorée à l’aide du dosage VENTANA MMR peut faire l’objet d’une évaluation, elle peut être évaluée par un pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères d’évaluation. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 12 Flux d’échantillon des MMR IHC Assays THE FOLLOWING SHOULD BE EVALUATED FOR EACH SLIDE STAINED WITH A MMR IHC ASSAY FROM THE VENTANA MMR IHC PANEL Repeat staining that specimen slide. NO Is the negative reagent control slide acceptable? YES Repeat staining for that specimen slide. NO Is the specific MMR assay stained slide acceptable? YES A trained pathologist determines the clinical status for the specific MMR assay (eg.VENTANA anti-MLH1 (M1)) according to the scoring algorithm for the MMR assays that are part of the VENTANA MMR IHC Panel 1016703FR Guide d’interprétation 2019 13 Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond L’acceptabilité de la morphologie et du fond est évaluée pour chaque cas de lame colorée avec un dosage IHC de MMR à l’aide des critères figurant ci-dessous au tableau 1. Tableau 1 : Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond Morphologie Présentation Acceptable Inacceptable Les éléments cellulaires d’intérêt sont Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont visualisés, ce qui permet une pas visualisés, ce qui compromet interprétation clinique de la coloration l’interprétation clinique de la coloration Le fond ne compromet pas Le fond compromet la capacité l’interprétation clinique de la d’interpréter la coloration coloration Contrôle au niveau du système Un tissu de contrôle positif connu, fixé et traité de la même manière que les échantillons de patients, doit être testé pour chaque ensemble de conditions de test et lors de chaque procédure de coloration réalisée avec l’anticorps IHC de MMR afin de servir de contrôle au niveau du système. Le tissu de contrôle doit être un prélèvement récent de biopsie ou de chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une manière identique aux échantillons de patients. Ce tissu sert à contrôler toutes les étapes de traitement et de coloration des échantillons. Une coupe de tissu fixée ou traitée différemment de l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non pour la fixation ou préparation des tissus. Un tissu positif avec coloration modérée est plus adapté au contrôle qualité qu’un cas qui présente une coloration forte car il pourra être utilisé pour détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes hors spécifications pouvant être liés à l’instrument. Le tissu de contrôle positif peut être sur la même lame que le cas du patient ou sur une lame séparée qui est colorée dans le même programme que le cas du patient. Un tissu CCR pré-qualifié avec un statut MMR clinique IHC Intact peut être utilisé comme un contrôle positif au niveau du système. En variante, un tissu d’un côlon normal pré-qualifié, fixé et traité de la même manière que le tissu du patient, peut également être utilisé comme contrôle positif au niveau du système. Une coloration acceptable avec un contrôle au niveau du système confirmera que tous les réactifs pour ce dosage IHC MMR particulier (par ex., VENTANA anti-MLH1 (M1) antibody) ont été appliqués et que l’instrument a fonctionné correctement. Le tissu de contrôle positif doit servir uniquement à vérifier que les performances des tissus traités, des réactifs de test et des instruments sont correctes, et non comme une aide à la formulation d’un diagnostic spécifique sur des échantillons de patients. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 14 Un tissu CCR pré-qualifié avec un statut MMR clinique IHC de Perte peut être utilisé comme un contrôle négatif au niveau du système. Puisque les protéines MLH1, PMS2, MSH2 et MSH6 sont exprimées dans tous les tissus, un contrôle normal de tissu négatif n’existe pas pour ces biomarqueurs. Le tissu de contrôle négatif doit servir uniquement à vérifier que les performances des tissus traités, des réactifs de test et des instruments sont correctes, et non comme une aide à la formulation d’un diagnostic spécifique sur des échantillons de patients. Tableau 2 : Critères de coloration pour un contrôle positif au niveau du système Profil de coloration intact Acceptable Une coloration nucléaire univoque dans des cellules tumorales viables, en présence de contrôles positifs internes (coloration nucléaire dans les lymphocytes, les fibroblastes ou l’épithélium normal à proximité de la tumeur) 1016703FR Guide d’interprétation 2019 Inacceptable Une perte univoque de la coloration nucléaire ou une coloration nucléaire focale de faible équivoque dans les cellules tumorales viables en présence de contrôles positifs internes 15 Contrôles positifs internes Dans les échantillons de carcinome colorectal, une coloration nucléaire univoque dans les lymphocytes, les fibroblastes ou l’épithélium normal à proximité de la tumeur servira de contrôles positifs internes. Des images représentatives du contrôle interne pour les dosages d’IHC de MMR sont illustrées ci-dessous dans la Figure 2. H&E 10x MLH1 10x Ctrl nég. 10x MSH2 10x Figure 2 : Contrôles positifs internes Une forte coloration des fibroblastes (indiquée par les flèches bleues) est illustrée dans un cas de statut de perte MLH1 et dans un cas de statut intact MSH2. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 16 Critères de cas de cancer colorectal pour l’évaluation clinique Le Tableau 3 résume les critères pour qu’une lame de tissu CCR soit évaluée pour le statut de MMR avec n’importe lequel des dosages d’IHC de MMR. Tableau 3 : Critères évaluables et non évaluables Interprétation clinique Profil de coloration 1) H&E comporte (≥ 50 cellules tumorales viables) 2) La lame de réactif de contrôle négatif est acceptable Évaluable (tous les éléments doivent être vrais) 3) La morphologie est acceptable 4) Le fond est acceptable 5) Le contrôle au niveau du système est acceptable 6) Les contrôles positifs internes ont une coloration nucléaire univoque 1) H&E comporte < 50 cellules tumorales viables 2) La lame de réactif de contrôle négatif est inacceptable Non évaluable (si un critère de cette section est vrai, la coloration de la lame doit être refaite) 3) La morphologie est inacceptable 4) Le fond est inacceptable 5) Le contrôle au niveau du système est inacceptable 6) Les contrôles positifs internes n’ont pas de coloration nucléaire univoque 7) L’interprétation n’est pas possible en raison d’une perte de tissu, d’une absence de tumeur, d’artéfacts et/ou de contours d’artéfacts. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 17 Algorithme de score des MMR IHC Assays Le statut clinique est attribué par un pathologiste qualifié en fonction de l’évaluation de la présence ou de l’absence de coloration spécifique avec les quatre dosages IHC de MMR du VENTANA MMR IHC Panel. Un statut clinique d’Intact est attribué aux cas avec présence de coloration nucléaire pour les quatre marqueurs et un statut clinique de Perte est attribué aux cas sans coloration nucléaire de marqueur. L’interprétation clinique des cas de carcinome colorectal colorés avec les dosages IHC de MMR doit se baser sur les critères figurant au Tableau 4 ci-dessous. Des images de divers profils de coloration Intact et de Perte sont fournies après le tableau. Tableau 4 : Critères d’interprétation clinique pour les MMR IHC Assays Expression de protéines Intacte Expression de protéines de Perte Une coloration nucléaire univoque dans des cellules tumorales viables, en présence de contrôles positifs internes acceptables (coloration nucléaire dans les lymphocytes, les fibroblastes ou l’épithélium normal à proximité de la tumeur) Une perte univoque de la coloration nucléaire ou une coloration nucléaire focale de faible équivoque dans les cellules tumorales viables en présence de contrôles positifs internes Si les témoins positifs internes ne présentent pas de coloration nucléaire univoque et/ou si la coloration de fond interfère avec l’interprétation, le test doit être considéré comme inacceptable et doit être refait. Une coloration nucléaire punctiforme de cellules tumorales doit être considérée comme un résultat négatif (perte). Dans les cas de coloration focale des cellules tumorales, l’intensité de la coloration nucléaire doit être au moins identique à celle des contrôles positifs internes ainsi qu’à la coloration confluente/continue des noyaux dans quelques glandes ou nids épithéliaux pour que le cas reçoive un statut clinique d’Intact. En l’absence de ces éléments, le cas doit recevoir un statut clinique de Perte. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 18 Arbre décisionnel des MMR IHC Assays Les lames colorées avec les dosages MMR IHC doivent être évaluées à l’aide des critères d’interprétation clinique (Tableau 4). L’approche à adopter est résumée dans l’arbre décisionnel ci-dessous. THE FOLLOWING SHOULD BE EVALUATED FOR EACH MMR ASSAY IN THE VENTANA MMR IHC PANEL Is the negative reagent control slide acceptable? NO Repeat Staining or request a new specimen. YES Is the marker from the VENTANA MMR IHC Panel slide evaluable? YES Case is Intact for that VENTANA MMR IHC Marker YES Does the tumor have unequivocal nuclear staining? No Case is Loss for that VENTANA MMR IHC Marker Is one marker in the VENTANA MMR IHC Panel Loss? Are all 4 markers in the VENTANA MMR IHC Panel Intact? NO YES YES Case is Intact for VENTANA MMR IHC Status Case is Loss for VENTANA MMR IHC Status 1016703FR Guide d’interprétation 2019 Case is Loss for VENTANA MMR IHC Status 19 Cas avec statut MMR Intact Cas de cancer colorectal avec expression de protéines MMR Intacte Un résultat de coloration de statut intact est caractérisé par la présence d’un signal nucléaire détectable en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. H&E 4x MLH1 4x Ctrl nég. 4x MLH1 10x Figure 3 : Le tissu au statut Intact MLH1 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. H&E 4x PMS2 4x Ctrl nég. 4x PMS2 10x Figure 4 : Le tissu avec statut Intact PMS2 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 21 H&E 4x MSH2 4x Ctrl nég. 4x MSH2 10x Figure 5 : Le tissu avec statut Intact MSH2 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 22 H&E 4x MSH6 4x Ctrl nég. 4x MSH6 10x Figure 6 : Le tissu avec statut Intact MSH6 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 23 Cas avec statut MMR de Perte Cas de cancer colorectal avec perte de l’expression de protéines MMR Un résultat de coloration de statut de perte est caractérisé par l’absence de signal nucléaire détectable en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. H&E 4x MLH1 4x Ctrl nég. 4x MLH1 10x Figure 7 : Le tissu avec statut de Perte MLH1 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 24 H&E 4x PMS2 4x Ctrl nég. 4x PMS2 10x Figure 8 : Le tissu avec statut de Perte PMS2 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de contrôles internes colorés de manière appropriée. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 25 H&E 4x MSH2 4x Ctrl nég. 4x MSH2 10x Figure 9 : Le tissu avec statut de Perte MSH2 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales mais présente une faible coloration cytoplasmique en présence de contrôles internes colorés comme il convient. Il convient de ne pas tenir compte d’une coloration cytoplasmique lors de l’interprétation du statut. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 26 H&E 4x MSH6 4x Ctrl nég. 4x MSH6 10x Figure 10 : Le tissu avec statut de Perte MSH6 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de contrôles internes colorés comme il convient. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 27 Cas difficiles Les cas de cancer colorectal sont catégorisés comme Intact ou Perte pour un dosage IHC de MMR en fonction de la présence ou de l’absence de coloration sur toute la surface de la tumeur. La coloration peut varier en intensité et cette intensité peut ne pas être uniforme dans toute la tumeur ; toutefois, cela n’a pas d’effet sur le statut MMR. Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des facteurs suivants : § Fond non spécifique Certains échantillons peuvent présenter une coloration de fond non spécifique pour des raisons qui ne sont pas bien comprises. Pour cette raison, l’évaluation d’une lame d’IHC de MMR doit inclure une comparaison de la lame avec la lame de contrôle de réactif négatif pour déterminer le niveau de coloration de fond non spécifique. Il convient de ne pas tenir compte d’une coloration cytoplasmique, le cas échéant, lors de l’interprétation de l’IHC de MMR. § Coloration focale Certains échantillons peuvent présenter une coloration focale dans les cellules tumorales ; l’intensité de la coloration peut varier de faible à forte. En fonction de l’algorithme de score IHC de MMR, une coloration nucléaire focale de faible équivoque dans les cellules tumorales viables en présence de contrôles positifs internes doit être classée comme Perte. § Coloration punctiforme Certains échantillons peuvent présenter une coloration discrète punctiforme au sein de quelques noyaux tumoraux ; l’intensité de la coloration peut varier de faible à forte. Il convient de ne pas tenir compte de ce profil de coloration et si un cas ne présente que ce type de profil de coloration, il doit recevoir un statut clinique de Perte. § Artéfact des tissus ou de la coloration Les artéfacts histologiques dus aux processus de traitement et de microtomie des échantillons peuvent également compliquer la détermination d’un score clinique IHC de MMR. Ces artéfacts peuvent comprendre sans s’y limiter : les gradients de fixation et les effets de contour, le piégeage DAB, la formation de bulles nucléaires, l’absence de coloration dans certaines régions des tissus, le déchirement ou le pliage des tissus et la perte de coupe tissulaire. Dans certains cas, il peut s’avérer nécessaire de répéter la coloration de nouvelles coupes ou d’obtenir un nouvel échantillon. Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages suivantes. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 28 Coloration de fond non spécifique H&E 4x MSH2 4x Ctrl nég. 4x MSH2 10x Figure 11 : Le tissu avec statut Intact MSH2 présente une forte coloration nucléaire en présence de contrôles internes colorés comme il convient ; on aperçoit une coloration de fond cytoplasmique dans les cellules tumorales dont il ne faut pas tenir compte. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 29 H&E 4x MSH2 4x Ctrl nég. 4x MSH2 10x Figure 12 : Le tissu avec statut de Perte MSH2 présente un fond cytoplasmique beige pâle des cellules tumorales ; toutefois, il n’y a pas de coloration nucléaire dans la tumeur en présence de contrôles internes positifs colorés comme il convient. Il convient de ne pas tenir compte d’une coloration cytoplasmique lors de l’interprétation du statut. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 30 Coloration focale H&E 4x MSH6 4x Ctrl nég. 4x MSH6 10x Figure 13 : Le tissu avec statut de Perte MSH6 présente une faible coloration nucléaire équivoque des cellules tumorales viables en présence de contrôles internes positifs colorés comme il convient. Notez également que l’intensité de la coloration nucléaire focale est inférieure à celle des contrôles positifs internes et non confluente autour de la glande. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 31 Coloration punctiforme H&E 10x MLH1 10x Ctrl nég. 10x MLH1 20x Figure 14 : La tumeur du tissu avec statut de Perte MLH1 présente une forte coloration punctiforme des noyaux de quelques cellules tumorales ; toutefois, il n’y a pas de cellules dans la tumeur qui présentent une coloration nucléaire univoque en présence de contrôles internes positifs colorés comme il convient. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 32 Évaluation clinique de VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay Évaluation des profils et de l’intensité de coloration Dans le carcinome colorectal, les cellules néoplasiques marquées avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) sont évaluées afin de détecter la présence ou l’absence du signal diaminobenzidine (DAB). La coloration immunohistochimique du carcinome colorectal suit un modèle de coloration cytoplasmique · Un signal positif est caractérisé par des cellules qui présentent une coloration cytoplasmique univoque ; l’intensité peut varier de faible à modérée. · Une intensité de signal négative est caractérisée par l’absence de tout signal détectable. Les cas négatifs peuvent encore présenter une décoloration cytoplasmique gris pâle ou beige. Le signal peut être réparti de manière homogène, avec un niveau uniforme d’intensité dans toutes les parties néoplasiques de la tumeur ou distribué de manière hétérogène avec plus d’un niveau d’intensité. Un anticorps de contrôle négatif correspondant à l’isotype est utilisé pour évaluer la présence d’une coloration de fond dans les échantillons testés et établir une intensité de coloration de référence. Le dosage anti-BRAF V600E (VE1) IHC nécessite une coupe de tissu en série pour la coloration hématoxyline et éosine (H&E), une deuxième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps de réactif de contrôle négatif et une troisième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Un cancer colorectal qui teste positif pour la mutation BRAF V600E à l’aide de l’IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) peut servir de contrôle au niveau du système. Si l’évaluation H&E indique que l’échantillon du patient n’est pas adéquat (par exemple si moins de 50 cellules de tumeur viables sont présentes), un nouvel échantillon doit alors être prélevé. La coloration d’un échantillon doit être répétée sur des lames non colorées si 1) la lame de contrôle positif au niveau du système ne présente pas de coloration acceptable ; 2) la lame du cas d’anticorps de réactif de contrôle négatif ne présente pas de coloration acceptable ou 3) la lame du cas colorée avec BRAF V600E ne peut pas être évaluée. Si la dernière de ces lames ne peut pas être interprétée en raison d’artefacts, d’effets de contour, d’une nécrose, d’un manque de tissu, ou pour toute autre raison, alors la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique. Si les contrôles sont acceptables et si la lame IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) peut faire l’objet d’une évaluation, elle peut être évaluée par un pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères d’évaluation. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 33 Flux d’échantillons pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay 1016703FR Guide d’interprétation 2019 34 Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond L’acceptabilité de la morphologie et du fond du tissu est évaluée pour chaque cas de patient à l’aide des critères figurant au Tableau 5. Tableau 5 : Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond Morphologie Présentation Acceptable Les éléments cellulaires d’intérêt sont visualisés, ce qui permet une interprétation clinique de la coloration Inacceptable Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont pas visualisés, ce qui compromet l’interprétation clinique de la coloration Le fond ne compromet pas l’interprétation clinique de la coloration Le fond compromet la capacité d’interpréter la coloration Contrôle au niveau du système Un tissu de contrôle au niveau du système connu, fixé et traité de la même manière que les échantillons de patients, doit être testé pour chaque protocole de coloration réalisé avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Le tissu de contrôle doit être un prélèvement récent de biopsie ou de chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une manière identique aux échantillons de patients. Ce tissu sert à contrôler toutes les étapes de traitement et de coloration des échantillons. Une coupe de tissu fixée ou traitée différemment de l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non pour la fixation ou préparation des tissus. Un tissu positif avec coloration modérée est plus adapté au contrôle qualité qu’un cas qui présente une coloration forte car il pourra être utilisé pour détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes hors spécifications pouvant être liés à l’instrument. Le tissu de contrôle au niveau du système peut être testé sur la même lame que le cas du patient ou sur une lame séparée qui est testée au même moment que le cas du patient. Un contrôle au niveau du système positif constituerait un cas préqualifié de CCR qui teste positif pour la mutation BRAF V600E par IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). La coloration d’un cas de tissu de cancer colorectal avec la mutation BRAF V600E confirmera que tous les réactifs ont été appliqués et que l’appareil fonctionne correctement. Le tissu de contrôle positif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances et non pour aider à établir un diagnostic clinique des échantillons de patients. Un contrôle au niveau du système négatif constituerait un cas préqualifié de CCR qui teste négatif pour le négatif IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Le tissu de contrôle négatif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances et non pour aider à établir un diagnostic clinique des échantillons de patients. Les tissus de contrôle sur chaque lame colorée par l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) seront jugés acceptables ou inacceptables par les pathologistes examinateurs selon les critères figurant au Tableau 6. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 35 Tableau 6 : Critères de coloration pour un contrôle positif au niveau du système Acceptable Inacceptable Tissus de cancer Coloration cytoplasmique univoque d’une Absence de coloration ou coloration colorectal quelconque intensité dans les cellules cytoplasmique équivoque dans des cellules tumorales viables au-dessus du fond. tumorales viables. Fibroblastes et Pas de coloration ou coloration cytoplasmique Coloration cytoplasmique univoque dans les lymphocytes dans équivoque dans les fibroblastes et fibroblastes et les lymphocytes dans un épithélium lymphocytes dans l’épithélium normal. l’épithélium normal. normal Algorithme de score pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay Le statut IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) est attribué par un pathologiste qualifié en fonction de son évaluation de l’intensité de la coloration spécifique pour le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) tel qu’illustré au Tableau 7 ci-dessous. Un statut positif est attribué aux cas avec coloration positive et un statut négatif aux cas sans coloration. L’interprétation clinique des cas de carcinome colorectal colorés avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) doit s’effectuer en fonction des critères figurant au Tableau 7. Les images de divers profils de coloration négatifs et positifs sont fournies après le Tableau 7. Tableau 7 : Critères d’interprétation clinique pour le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) IHC Assay Positif pour la mutation BRAF V600E. Coloration cytoplasmique univoque d’une quelconque intensité dans les cellules tumorales viables au-dessus du fond. Négatif pour la mutation BRAF V600E. Absence de coloration ou coloration cytoplasmique équivoque dans des cellules tumorales viables. Remarque : Une coloration nucléaire, une coloration faible à forte de cellules tumorales viables isolées ou de petits groupes de tumeurs doit être considérée comme négative. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 36 Arbre décisionnel 1016703FR Guide d’interprétation 2019 37 Le cas est Négatif pour BRAF V600E Cas de cancer colorectal avec statut Négatif pour BRAF V600E Un résultat négatif de coloration est caractérisé par l’absence de tout signal détectable. Les cas négatifs peuvent encore présenter une décoloration cytoplasmique gris pâle ou beige. H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 15 : Le tissu à statut négatif BRAF V600E ne présente aucune coloration cytoplasmique dans les cellules tumorales. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 38 H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 16 : Le tissu à statut Négatif BRAF V600E présente un blush cytoplasmique léger. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 39 Les cas sont Positifs pour BRAF V600E Cas de cancer colorectal avec statut Positif pour BRAF V600E Un résultat de coloration positive est caractérisé par des cellules qui présentent une coloration cytoplasmique univoque ; l’intensité peut varier de faible à modérée. H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 17 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une faible coloration cytoplasmique. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 40 H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 18 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une coloration cytoplasmique faible à modérée. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 41 H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 19 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une coloration cytoplasmique modérée. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 42 H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 20 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une forte coloration cytoplasmique. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 43 Cas difficiles Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des facteurs suivants : § Fond non spécifique Certains échantillons peuvent présenter une coloration de fond non spécifique pour des raisons qui ne sont pas bien comprises. Il a été démontré que l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) met parfois en évidence une coloration cytoplasmique parasite dans les muscles lisses et une coloration nucléaire dans les cellules épithéliales du côlon non cancéreuses, les entérocytes, les cellules de Leydig des testicules, les surrénales, l’hypophyse et certaines cellules tumorales. Ces cas ne doivent toutefois pas être considérés comme positifs pour la mutation BRAF V600E. Cet anticorps colore également les cils vibratiles du poumon. Pour cette raison, l’évaluation d’une lame colorée à l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) doit inclure une comparaison de la lame avec la lame de contrôle négative pour déterminer le niveau de coloration de fond non spécifique. § Coloration nucléaire Certains échantillons peuvent ne présenter qu’une coloration nucléaire. En fonction de l’algorithme de score IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1), ces cas doivent être considérés comme négatifs. § Artéfact des tissus ou de la coloration Les artéfacts histologiques dus aux processus de traitement et de microtomie des échantillons peuvent également compliquer la détermination du statut clinique IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Ces artéfacts peuvent comprendre sans s’y limiter : les gradients de fixation et les effets de contour, le piégeage DAB, la formation de bulles nucléaires, l’absence de coloration dans certaines régions des tissus, le déchirement ou le pliage des tissus et la perte de coupe tissulaire. Dans certains cas, il peut s’avérer nécessaire de répéter la coloration de nouvelles coupes ou d’obtenir un nouvel échantillon. § Coloration hétérogène Certains cas peuvent présenter seulement une coloration cytoplasmique focale, mais univoque. Ces cas sont difficiles et des tests supplémentaires peuvent être envisagés (Fig. 25). Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages suivantes. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 44 Coloration de fond non spécifique H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 21 : Le tissu à statut Négatif BRAF V600E présente un léger blush cytoplasmique dans toute la tumeur. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 45 Coloration de fond élevée non spécifique H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 22 : Le tissu à statut positif BRAF V600E présente un fond élevé non spécifique en dehors des cellules tumorales. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 46 Coloration nucléaire H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 23 : Le tissu à statut négatif BRAF V600E ne présente aucune coloration cytoplasmique dans les cellules tumorales. Une coloration nucléaire modérée est présente dans certaines cellules, cependant, en fonction des critères d’interprétation, seule la coloration cytoplasmique doit servir à déterminer le statut de BRAF V600E. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 47 H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 24 : Le tissu à statut positif BRAF V600E présente une forte coloration cytoplasmique univoque dans les cellules tumorales. Une coloration nucléaire modérée est présente dans certaines cellules, cependant, en fonction des critères d’interprétation, seule la coloration cytoplasmique doit servir à déterminer le statut de BRAF V600E. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 48 Coloration focale BRAF V600E 2x H&E 4x BRAF V600E 4x Ctrl nég. 4x BRAF V600E 10x Figure 25 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une intensité de coloration BRAF V600E hétérogène. Une faible coloration cytoplasmique équivoque est présente dans la majorité de la tumeur, avec coloration cytoplasmique focale univoque de modérée à forte. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 49 Exemples de cas du VENTANA MMR IHC Panel H&E 10x MLH1 10x MSH2 10x Ctrl nég. 10x PMS2 10x MSH6 10x Figure 26 : MMR CCR avec statut compétent Ce cas présente un statut compétent de réparation des mésappariements d’ADN (pMMR) pour les quatre marqueurs MMR du VENTANA MMR IHC Panel. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 50 H&E 10x Ctrl nég. 10x MLH1 10x PMS2 10x MSH2 10x MSH6 10x BRAF V600E 10x Figure 27 : Cariconome du côlon sporadique Ce cas présente un statut de réparation de mésappariement d’ADN déficient (dMMR) en raison de la perte des protéines MLH1 et de PMS2 avec MSH2 et MSH6 intactes. BRAF V600E est positif pour ce cas. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 51 H&E 10x MLH1 10x MSH2 10x Ctrl nég. 10x PMS2 10x MSH6 10x BRAF V600E 10x Figure 28 : Syndrome de Lynch probable Ce cas présente un statut de réparation de mésappariement d’ADN déficient (dMMR) en raison de la perte des protéines MSH2 et MSH6 avec MLH1 et PMS2 intactes. BRAF V600E est négatif pour ce cas. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 52 H&E 10x Ctrl nég. 10x MLH1 10x PMS2 10x MSH2 10x MSH6 10x BRAF V600E 10x Figure 29 : Syndrome de Lynch probable Ce cas présente un statut de réparation de mésappariement d’ADN déficient (dMMR) en raison de la perte des protéines MLH1 et PMS2 avec MSH2 et MSH6 intactes, BRAF V600E est négatif pour ce cas. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 53 Stabilité des lames Ventana préconise le prélèvement de coupes d’environ 4 μm d’épaisseur et leur montage sur des lames chargées positivement. Les lames doivent être colorées dans les huit semaines suivant la préparation. Jour 0 Semaine 4 Semaine 10 MLH1 Jour 0 Semaine 4 Semaine 8 PMS2 Jour 0 Semaine 4 Semaine 10 Jour 0 Semaine 4 Semaine 10 Jour 0 Semaine 4 Semaine 10 MSH2 MSH6 BRAF V600E Figure 30 : Coloration de stabilité de la lame de coupe. Ce panel présente des cas à statut intact pour MLH1, PMS2, MSH2 et MSH6 et statut positif pour BRAF V600E pour les points de mesure indiqués dans la figure. 1016703FR Guide d’interprétation 2019 54 Références 1. Ferlay J, S.I., Ervik M, Dikshit R, Eser S, Mathers C, Rebelo M, Parkin DM, Forman D, Bray, F., GLOBOCAN 2012 v1.0, Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11 [Internet]. 2012, Lyon, France : Centre international de Recherche sur le Cancer (CIRC) ; 2013. 2. Howlader N, N.A., Krapcho M, Garshell J, Miller D, Altekruse SF, Kosary CL, Yu M, Ruhl J, Tatalovich Z, Mariotto A, Lewis DR, Chen HS, Feuer EJ, Cronin KA (éds). SEER Cancer Statistics Review, 1975-2012.2015, National Cancer Institute. Bethesda, MD. 3. 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