Guide d’interprétation du VENTANA PD‑L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 2 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Sommaire Introduction5 Utilisation prévue 6 Utilisation prévue du produit 6 Objectif du guide d’interprétation 6 Évaluation7 Évaluation des profils et des intensités de coloration des cellules tumorales 7 Critères d’acceptabilité de la morphologie et du bruit de fond 14 Tissu de contrôle positif 15 Critères d’évaluation 16 Atlas de l’expression de PD-L1 dans le NSCLC 18 Galerie de photos 18 Caractéristiques complexes 38 Impact des conditions préanalytiques sur la coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay 54 Références56 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 3 4 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Introduction Le cancer du poumon, ou cancer bronchique, est l’un des cancers La protéine PD-L1 est exprimée dans une grande variété de cancers, les plus fréquents dans le monde et demeure une cause majeure de comme le cancer du poumon, le mélanome, le cancer urothélial, le mortalité liée au cancer dans le monde. Bien que des progrès aient cancer de l’ovaire et le cancer colorectal. La fréquence de l’expression été réalisés en matière de diagnostic et de traitement, le pronostic de PD-L1 dans les cancers varie de 12 à 100 % selon le type de tumeur demeure défavorable avec de faibles taux de survie à long terme, quel et le clone d’anticorps anti-PD-L1 et le seuil de positivité utilisés.7 que soit le stade, ce qui indique un besoin médical non satisfait. Le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay est un test immunohistochimique Le cancer bronchique non à petites cellules (NSCLC), l’un des deux (IHC) qui utilise un anticorps primaire monoclonal de lapin principaux types de cancer du poumon, représente près de 85 % de anti-PD-L1 (VENTANA PD-L1 (SP263)) pour reconnaître la protéine tous les cas de cancer du poumon. Chez plus de la moitié des patients PD-L1 (programmed death ligand 1). 1 chez qui le NSCLC a nouvellement été diagnostiqué, la maladie s’est déjà métastasée, ce qui réduit nettement la probabilité de survie. Le taux de survie relatif à 5 ans chez les patients atteints d’un NSCLC avec métastases est de 4.7 %.1 La majorité des patients atteints de NSCLC présentent une maladie inopérable de stade localement avancé (stade IIIB) ou une maladie métastatique (stade IV) pour laquelle il n’existe actuellement aucun traitement curatif. En moyenne, ces patients meurent dans l’année qui suit le diagnostic. L’amélioration des résultats cliniques du cancer du poumon pourra certainement être possible grâce à une meilleure compréhension des événements moléculaires à la base de sa pathogenèse en identifiant de nouveaux biomarqueurs cibles et en développant de nouvelles options de traitement. PD-L1 est une protéine transmembranaire qui diminue les réponses immunitaires en se liant à ses deux récepteurs inhibiteurs programmed death-1 (PD-1) et B7.1.2 PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé sur les lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette activation perdurant dans des conditions de stimulation chronique comme chez les patients présentant une infection chronique ou un cancer.3 La liaison de PD-L1 à PD-1 inhibe la prolifération des lymphocytes T, la production de cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne l’inactivation fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T. B7.1 est une molécule exprimée sur les cellules présentatrices d’antigène et sur les lymphocytes T activés. La liaison de la protéine PD-L1 au récepteur B7.1 sur les lymphocytes T et les cellules présentatrices d’antigène peut entraîner une diminution des réponses immunitaires, y compris une inhibition de l’activation des lymphocytes T et de la production des cytokines.4 L’expression de PD-L1 sur les cellules immunitaires et tumorales a été observée.5,6 Il a été suggéré qu’une expression aberrante de PD-L1 sur les cellules tumorales pourrait entraver l’immunité antitumorale et permettre ainsi à ces cellules d’échapper à la réponse immunitaire.3,6 L’interruption de la voie PD-L1/ PD-1 représente donc une stratégie intéressante pour redynamiser l’immunité des lymphocytes T spécifique de la tumeur supprimée par l’expression de PD-L1 dans le microenvironnement tumoral. Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 5 Utilisation prévue Utilisation prévue du produit Consulter la fiche technique du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour une description détaillée de l’utilisation prévue de ce produit. Objectif du guide d’interprétation Le guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay est destiné à aider les anatomopathologistes à interpréter et à évaluer les tissus de NSCLC colorés avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. • Les photographies incluses dans ce guide d’interprétation illustrent les profils de coloration, ainsi que la plage des niveaux d’expression de PD‑L1, qui peuvent être présents dans les tissus de NSCLC colorés avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. • Les critères de coloration décrits dans ce guide d’interprétation définissent le système d’évaluation des échantillons de tissu de NSCLC colorés avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. • L’utilisation du placenta comme tissu de contrôle dans le contexte de l’évaluation de PD-L1 ainsi que les caractéristiques et les performances de la coloration correspondantes sont traitées. • Les cas difficiles, les artefacts de coloration et l’impact des conditions préanalytiques sur le test sont également abordés. 6 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Évaluation Évaluation des profils et des intensités de coloration des cellules tumorales Les cellules néoplasiques de NSCLC marquées avec le La coloration cytoplasmique est généralement diffuse, certains cas VENTANA PD‑L1 (SP263) Assay sont évaluées afin de déterminer présentant une qualité finement granuleuse. De rares cas ont présenté le pourcentage de cellules tumorales positives, à savoir de cellules une coloration punctiforme périnucléaire d’une intensité variable. Le tumorales présentant une coloration de la membrane quelle que pourcentage total de cellules tumorales présentant un signal membranaire soit l’intensité du signal de la diaminobenzidine (DAB). La coloration d’une intensité adéquate est estimé visuellement et utilisé pour générer le immunohistochimique dans le NSCLC est membranaire niveau d’expression de PD-L1. La coloration cytoplasmique des cellules et/ou cytoplasmique et peut être présente de façon homogène ou tumorales n’est pas prise en compte pour déterminer l’expression de hétérogène dans tout le néoplasme. La coloration de la membrane PD‑L1. Un anticorps de contrôle isotypique négatif est utilisé pour évaluer peut avoir un profil discontinu, circonférentiel ou basolatéral. la présence d’un bruit de fond dans les échantillons testés et pour établir une intensité de coloration de référence. NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : divers cas illustrant la gamme de colorations membranaires et cytoplasmiques dans les cellules tumorales (20x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 7 NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : cellules tumorales avec profil de coloration membranaire basolatéral. (20x) NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : cas inhabituel avec coloration punctiforme périnucléaire dans les cellules tumorales. (40x) 8 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : dans les cas présentant des cellules avec un profil de coloration membranaire basolatéral, seules les cellules dont la nature tumorale est évidente doivent être incluses dans l’estimation du pourcentage (la flèche rouge indique des cellules tumorales avec une coloration des faces basale et latérales de la membrane cytoplasmique). Les zones où la coloration pourrait être attribuée à des cellules immunitaires, à des éléments stromaux ou à la membrane basale, et non à des cellules dont la nature tumorale est certaine, doivent être ignorées (la flèche bleue indique des cellules tumorales avec une coloration le long de la face basale des cellules sans coloration des faces latérales). (20x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 9 Profils de coloration des cellules immunitaires Les cellules immunitaires présentent la gamme d’intensité de Des images représentatives de cellules immunitaires colorées avec coloration suivante : négatives, faible signal cytoplasmique diffus le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay sont fournies ci-dessous à titre et/ou signal membranaire faible à fort. Un profil de coloration de référence pour aider l’anatomopathologiste à différencier la punctiforme peut être observé en association avec des lymphocytes. coloration des cellules tumorales de celle des cellules immunitaires. L’expression de PD-L1 a été observée dans les lymphocytes, les REMARQUE : les cellules immunitaires ne sont pas incluses dans macrophages, les histiocytes, les plasmocytes et les neutrophiles. l’évaluation du statut de PD-L1. NSCLC, H&E : cellules tumorales avec macrophages alvéolaires NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : coloration positive de (flèche). (20x) macrophages alvéolaires avec tumeur adjacente négative pour PD-L1 ; coloration de 0 %. (20x) NSCLC, H&E : cellules tumorales avec des lymphocytes et des NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : coloration punctiforme plasmocytes. (20x) (flèche bleue) et diffuse (flèche noire) de cellules immunitaires avec une tumeur adjacente négative pour PD-L1, coloration de 0 %. (20x) 10 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : à un grossissement de 4x (panneaux supérieurs), le profil de coloration semble comprendre une coloration significative de la membrane cytoplasmique des cellules tumorales. L’examen à un grossissement plus fort (20x, en bas) révèle que la tumeur est essentiellement négative pour PD-L1, avec une coloration membranaire (flèche noire) et punctiforme (flèche bleue) des cellules immunitaires. Une coloration de cellules dendritiques est également observée (flèche rouge). Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 11 NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : plasmocytes présentant une coloration cytoplasmique diffuse faible à modérée. Les cellules tumorales environnantes ne présentent pas de coloration. (20x) 12 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : les neutrophiles identifiés sur la lame colorée à l’H&E présentent une expression de PD-L1 (flèche bleue). Le cas présente également une coloration de la membrane cytoplasmique de cellules tumorales (flèche noire). (40x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 13 Tissus requis Le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay nécessite une coupe de tissu Si l’évaluation de la lame colorée à l’H&E indique que l’échantillon sériée pour la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E), une du patient n’est pas adéquat, un nouvel échantillon doit alors être deuxième coupe de tissu sériée pour la coloration avec l’anticorps prélevé. La coloration d’un échantillon doit être répétée sur des lames de contrôle négatif et une troisième coupe de tissu sériée pour la qui n’ont pas encore été colorées si (1) la lame de tissu de contrôle du coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. De plus, du tissu cycle ne présente pas une coloration acceptable, (2) la lame du cas de placenta humain normal à terme peut être utilisé comme contrôle de contrôle négatif ne présente pas de coloration acceptable ou (3) la pour le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu placentaire présente lame du cas colorée avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay (la lame une coloration membranaire uniforme d’intensité modérée à forte et colorée pour la détection de PD-L1) n’est pas évaluable. Si la dernière une coloration cytoplasmique uniforme d’intensité faible à forte des de ces lames n’est pas interprétable en raison d’artefacts, d’effets cellules de la lignée trophoblastique. La vascularisation et le tissu de bord, de nécrose, d’un manque de tissu ou de toute autre raison, stromal du placenta peuvent être utilisés pour évaluer le bruit de fond la lame ne peut pas être utilisée pour une évaluation clinique. Si les de coloration. contrôles sont acceptables et que la lame colorée avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay est évaluable, la lame peut être évaluée par un anatomopathologiste dûment formé comme décrit dans les critères d’évaluation. Critères d’acceptabilité de la morphologie et du bruit de fond L’acceptabilité de la morphologie des tissus et l’acceptabilité du bruit de fond sont évaluées pour chaque tissu de patient selon les critères décrits dans les tableaux 1 et 2. Tableau 1 : critères d’acceptabilité de la morphologie Interprétation Observation au microscope Acceptable Les éléments cellulaires d’intérêt sont suffisamment visibles pour permettre l’interprétation de la coloration. Inacceptable Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont pas visibles ; l’interprétation de la coloration est impossible. Tableau 2 : critères d’acceptabilité du bruit de fond Interprétation Description de la coloration Acceptable Coloration non spécifique qui ne gêne pas l’interprétation de la coloration spécifique. Inacceptable Coloration non spécifique qui gêne l’interprétation de la coloration spécifique. 14 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Tissu de contrôle positif Un tissu de contrôle positif connu, fixé et préparé de la même manière que les échantillons des patients, doit être inclus pour chaque ensemble de conditions de tests et pour chaque procédure de coloration exécutée à l’aide du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu de contrôle (cas index) doit être un échantillon fraîchement prélevé lors d’une autopsie, d’une biopsie ou d’une intervention chirurgicale et préparé et fixé dès que possible après le prélèvement et de manière identique aux échantillons des patients. Ce tissu peut être utilisé pour contrôler toutes les étapes de préparation et de coloration des échantillons. Une coupe de tissu fixée ou préparée différemment de l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non pour la fixation ou la préparation des tissus. Un cas de NSCLC positif avec une coloration modérée est plus adapté à servir de contrôle qualité qu’un cas avec une forte coloration. Il peut être utilisé pour détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes hors spécifications qui pourraient être liés à l’appareil. Une coloration positive de la membrane des cellules néoplasiques dans le tissu de contrôle confirme que l’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a bien été appliqué et que l’appareil a fonctionné correctement. Le tissu de contrôle positif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances et non pour aider à établir un diagnostic clinique à partir des échantillons des patients. De plus, du tissu de placenta humain normal à terme peut être utilisé comme contrôle positif pour le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Ce tissu présente une coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une coloration uniforme faible à forte du cytoplasme des cellules de la lignée trophoblastique. La vascularisation et le tissu stromal du placenta peuvent être utilisés pour évaluer le bruit de fond de coloration. Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : forte coloration Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : le stroma et la uniforme de la membrane et coloration modérée du cytoplasme des vascularisation dans les villosités ne présentent aucune coloration cellules de la lignée trophoblastique (10x) pour PD-L1 (20x) Tableau 3 : critères d’évaluation du tissu placentaire de contrôle pour le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Interprétation Description de la coloration Acceptable Coloration uniforme modérée à forte de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique et aucune coloration du stroma et de la vascularisation placentaires. Inacceptable Aucune coloration à faible coloration uniforme de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique et/ou coloration spécifique dans le tissu stromal et la vascularisation placentaires. Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 15 Critères d’évaluation Un score d’évaluation de PD-L1 dans le NSCLC est attribué par un Les cas non évaluables comprennent, mais sans s’y limiter, les cas anatomopathologiste en fonction du pourcentage de cellules tumorales avec un nombre insuffisant de cellules tumorales viables, un bruit de (% de TC) présentant une coloration membranaire d’une intensité du fond gênant ou une décalcification. Les cas de NSCLC présentant supérieure à l’intensité du bruit de fond. Un niveau d’expression est un nombre suffisant de cellules tumorales viables (tel que déterminé attribué aux cas, comme décrit dans l’approche de l’évaluation de PD-L1. par l’anatomopathologiste chargé de l’évaluation) et sans bruit du fond gênant sur la lame colorée pour PD-L1 sont acceptables pour l’évaluation. Des images illustrant divers profils de coloration et niveaux d’expression sont présentées dans les sections suivantes. Approche de l’évaluation de PD-L1 Tableau 4 : Algorithme de notation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour les cellules tumorales Description de la coloration Évaluer le pourcentage de cellules tumorales présentant une coloration membranaire positive pour PD-L1 d’une intensité supérieure à l’intensité du bruit de fond de coloration observée sur la lame colorée avec l’anticorps de contrôle isotypique négatif. L’expression de PD-L1 est indiquée sous forme de nombre entier. 16 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Évaluation du pourcentage de cellules avec une coloration de la membrane Le guide illustré suivant illustre un spectre quantitatif du nombre de été illustrés afin de constituer une échelle représentative pour aider cellules tumorales présentant une coloration de la membrane sur l’anatomopathologiste lors de l’évaluation de la coloration pour PD‑L1. un champ d’échantillon de NSCLC contenant des cellules tumorales Il est à la discrétion de l’anatomopathologiste de déterminer si le viables à des fins d’illustration uniquement. Des niveaux d’expression nombre de cellules contenues dans l’échantillon est suffisant. de 0 à 100 % de cellules tumorales avec coloration de la membrane ont Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 17 Atlas de l’expression de PD-L1 dans le NSCLC Galerie de photos Une coloration positive est caractérisée par la présence de tout signal la membrane des cellules tumorales n’est pas facilement discernable détectable d’une intensité supérieure à l’intensité du bruit de fond de à faible grossissement et peut nécessiter un examen patient et coloration de la membrane des cellules néoplasiques observée sur méthodique de la lame colorée à un grossissement plus fort, en la lame colorée avec l’anticorps de contrôle isotypique négatif. Cet particulier dans les cas où une faible coloration cytoplasmique est atlas de l’expression de PD-L1 comprend des exemples de niveaux également présente. d’expression dans divers champs de vision. Une légère coloration de Cas 1 : coloration négative des cellules tumorales et des cellules immunitaires (0 %). (20x) Pour les cas présentant une expression de PD-L1 à l’extrémité PD-L1 de moins de 1 % et un niveau d’expression de PD-L1 de 1 % inférieure du spectre, toute coloration de la membrane d’histiocytes étant subtile, il est important que l’anatomopathologiste s’entraîne ou de macrophages alvéolaires doit être identifiée afin d’éviter de la à apprécier les expressions légères. En s’entraînant à estimer confondre avec une coloration des cellules tumorales. L’examen de la visuellement le nombre de cellules tumorales colorées et le nombre lame H&E peut permettre de différencier les cellules tumorales des total de cellules tumorales, il est possible de devenir apte à apprécier cellules immunitaires. La différence entre un niveau d’expression de de légères différences de niveau d’expression. 18 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas 2 : moins de 1 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 19 Cas 3 : 2 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x) 20 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Faible coloration de la membrane de TC Cas 4 : 3 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Une légère nébulosité cytoplasmique est également présente, ce qui ne compte pas dans l’estimation du score. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 21 Coloration d’IC Faible coloration de la membrane de TC Cas 5 : 4 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Des IC présentent également une coloration pour PD-L1. Assurez-vous que seules les TC avec une coloration de la membrane sont dénombrées pour l’estimation du score. (10x) 22 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas 6 : tumeur avec 5 % de cellules présentant une coloration de la membrane entourée en bleu. La zone tumorale (constituée d’une tumeur viable et du tissu desmoplasique et du tissu enflammé environnants) contient des zones focales avec des cellules immunitaires présentant une expression de PD-L1. (4x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 23 Coloration de la membrane de TC Coloration de la membrane de TC Cas 7 : 7 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x) 24 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas 8 : 9 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Une coloration foncée est plus facile à repérer à faible grossissement, mais il est nécessaire d’utiliser des objectifs de plus fort grossissement pour s’assurer de ne manquer aucune cellule avec une faible coloration de la membrane. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 25 TC avec une coloration de la membrane faible TC avec coloration cytoplasmique Cas 9 : 12 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x). Examinez la lame à faible grossissement, puis utilisez des grossissements plus forts pour différencier la coloration cytoplasmique de la coloration de la membrane. 26 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas 10 : tumeur avec 15 % de cellules présentant une coloration de la membrane (contour bleu). Une coloration de cellules immunitaires associées à la tumeur est également observée. (2x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 27 Zone de nécrose Zone de nécrose Cas 11 : 20 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Prenez soin d’exclure les signaux associés à la nécrose et aux IC de l’estimation du score. (10x) 28 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas 12 : 25 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 29 Cas 13 : tumeur avec 35 % des cellules présentant une coloration de la membrane dans ce champ (contours bleus). La zone tumorale contient quelques cellules immunitaires exprimant PD-L1 (contours noirs). (4x) 30 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas 14 : 35 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. La majorité des TC présentent une nébulosité cytoplasmique avec environ un tiers des TC présentant une coloration de la membrane faible à modérée. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 31 Cas 15 : 40 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. Notez que la majorité des TC positives à la coloration pour PD‑L1 présentent une faible coloration de la membrane. (10x) 32 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Faible coloration de la membrane de TC Cas 16 : 50 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 33 Cas 17 : 75 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane faible à modérée. (10x) 34 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas 18 : 85 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 35 Cas 19 : 100 % des cellules tumorales présentent une forte coloration de la membrane. (10x) 36 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Planche 20 : coloration de la membrane de 100 % des cellules tumorales (4x) Cas 21 : coloration positive de la membrane des cellules tumorales (100 %) sans coloration des cellules immunitaires associées à la tumeur. (20x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 37 Caractéristiques complexes • Hétérogénéité Divers profils de coloration et diverses caractéristiques morphologiques peuvent rendre difficiles l’interprétation et la Lorsqu’une distribution hétérogène de l’expression est observée, quantification de la coloration des cellules tumorales avec coloration de la membrane. Certains cas peuvent être particulièrement difficiles à évaluer en raison des problèmes suivants : l’estimation du pourcentage total de cellules tumorales présentant une coloration de la membrane peut être difficile. Une approche systématique consistant à diviser la tumeur en surfaces plus petites, mais égales, de tumeur viable, à ensuite évaluer ces surfaces pour • Faible coloration cytoplasmique déterminer le pourcentage de cellules tumorales avec une coloration Certains échantillons peuvent présenter une faible coloration de la membrane et à calculer la moyenne des pourcentages de cytoplasmique des cellules tumorales, qui peut être confondue à faible grossissement avec une faible coloration de la membrane des cellules tumorales. Pour cette raison, lors de l’évaluation de lames chacune des surfaces, peut être utile. Quelques exemples de cas difficiles sont présentés dans les pages colorées avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, une coloration faible doit être confirmée par un examen à plus forts grossissements suivantes. pour différencier la coloration de la membrane de la coloration du cytoplasme des cellules tumorales. • Chevauchement d’une forte coloration de cellules immunitaires avec la coloration de cellules tumorales Certaines tumeurs peuvent contenir une importante composante inflammatoire entourant et infiltrant la tumeur. Dans les cas où une forte coloration est observée pour les cellules tumorales et immunitaires, il peut être difficile de différencier et de quantifier le niveau d’expression de PD-L1 pour les cellules tumorales. La présence de cellules immunitaires infiltrant la tumeur doit être confirmée à l’aide de la lame H&E. Le profil de coloration pour PD-L1 et les caractéristiques nucléaires cellulaires sont utilisés pour attribuer l’expression aux cellules immunitaires (coloration punctiforme) et aux cellules tumorales (coloration linéaire de la membrane). • Occultation par des substances endogènes et exogènes Parfois, dans les échantillons de NSCLC, des substances endogènes et/ou exogènes, tels que le pigment anthracosique, la mélanine ou l’hémosidérine, peuvent occulter la coloration des cellules tumorales et immunitaires réalisée avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay et gêner l’interprétation. La comparaison de la lame colorée avec l’anticorps de contrôle isotypique négatif avec la lame colorée pour PD-L1 peut permettre de différencier la coloration spécifique au biomarqueur de la substance endogène ou exogène. Dans les tumeurs de NSCLC avec une formation importante de kératine, une réponse histiocytaire sous la forme de cellules géantes à corps étranger peut être déclenchée. En cas d’un tel type de réponse immunitaire, la coloration de la membrane des cellules géantes peut être confondue avec la coloration des cellules tumorales. 38 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas difficile 1 : la coloration du cas de NSCLC avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a produit une faible coloration du cytoplasme (flèche noire) et une faible coloration de la membrane (flèche verte) de cellules tumorales. Un examen à plus fort grossissement est nécessaire pour différencier une faible coloration cytoplasmique d’une faible coloration membranaire. Une coloration de macrophages alvéolaires est également observée (flèche rouge). Dans ce champ, 10 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (20x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 39 Cas difficile 2 : la coloration du cas de NSCLC avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a produit une faible coloration de la membrane de cellules tumorales (flèche noire). De nombreuses cellules tumorales présentent également une nébulosité cytoplasmique. Dans ce champ, 90 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (20x) 40 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas difficile 3 : la tumeur présente des cellules avec à la fois une faible coloration cytoplasmique et une faible coloration membranaire (flèche noire) et d’autres cellules avec seulement une faible coloration de la membrane (flèche bleue). Dans ce champ, 90 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (20x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 41 Nébulosité cytoplasmique Faible coloration membranaire Faible coloration membranaire Cas difficile 4 : une forte coloration membranaire est visible à faible grossissement. Il est nécessaire de vérifier que la faible coloration de la membrane n’est pas ignorée. Cela peut s’avérer particulièrement difficile en présence de nébulosité cytoplasmique. (10x) 42 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas difficile 5 : coloration des TC et des IC. Il peut être difficile de déterminer si le signal est attribuable à des TC ou des IC. Cet exemple présente également une nébulosité cytoplasmique dans un pourcentage significatif de TC. (10x). (Suite à la page suivante.) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 43 Cas difficile 5 (suite) : l’utilisation d’un fort grossissement et la comparaison avec la lame colorée à l’H&E sont nécessaires pour déterminer les caractéristiques de la coloration. Cet exemple présente une coloration de la membrane des TC (incluse dans l’évaluation), une coloration cytoplasmique des TC (non incluse) et une coloration des IC (non incluse). (20x) 44 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas difficile 6 : coloration des IC, principalement. Les IC présentant un signal pour PD-L1 ne sont pas prises en compte pour l’estimation du score. (10x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 45 Macrophages avec coloration de la membrane Macrophages avec coloration de la membrane Cas difficile 7 : coloration de macrophages. Les macrophages présentent parfois une coloration de la membrane modérée à forte qui n’est pas prise en compte pour l’estimation du score. (10x) 46 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas difficile 8 : un cas de NSCLC avec une inflammation mixte importante a été coloré avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Des cellules immunitaires avec une coloration membranaire (flèche noire) et des cellules immunitaires avec une coloration punctiforme (flèche bleue) sont observées mêlées à des cellules tumorales présentant une coloration linéaire partielle de la membrane (flèche rouge). Dans ce champ, 40 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. La lame colorée à l’H&E révèle que la tumeur est fortement enflammée. (40x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 47 Cas difficile 9 : cellules tumorales avec une coloration membranaire (flèche noire) mêlées à des cellules immunitaires avec une coloration diffuse (flèche bleue) et punctiforme (flèche rouge). Dans ce champ, 100 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane. (20x) 48 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas difficile 10 : le cas de NSCLC coloré avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay présente une anthracose (flèche noire) et une réaction de cellules géantes à corps étranger (flèche rouge) à exclure de l’interprétation du cas (rangée supérieure, 20x). Une zone différente du cas contient du pigment anthracosique (flèche noire) chevauchant des cellules immunitaires avec une coloration punctiforme (flèche verte) ainsi que des cellules tumorales avec une coloration membranaire (flèche bleue en bas). Dans ce champ, 80 % des cellules tumorales présentent une coloration de la membrane (bas). (20x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 49 Cas difficile 11 : l’anthracose sera également visible sur le NRC (partie supérieure). L’utilisation du NRC permet d’éliminer les pigments de l’estimation du score. (20x) 50 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Cas difficile 12 : l’utilisation de forts grossissements permet de repérer les TC avec une faible coloration de la membrane. (20x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 51 Cas difficile 13 : les cellules avec une forte coloration de la membrane sont facilement repérables aux faibles grossissements. Utilisez des forts grossissements pour vous assurer de ne pas manquer les TC avec une faible coloration de la membrane, en particulier lorsqu’elles sont adjacentes à des cellules avec une forte coloration de la membrane. (20x) 52 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 50% 90% 35% 25% Cas difficile 14 : dans cet échantillon, les cellules tumorales présentant une coloration de la membrane sont réparties de façon hétérogène (contours bleus). La division de la surface totale de la tumeur en surfaces plus petites contenant un même nombre de cellules tumorales viables permet de réaliser une estimation plus précise. Le pourcentage de cellules tumorales avec une coloration membranaire dans chaque partie est estimé, la moyenne des pourcentages de chacune des parties est calculée pour déterminer le niveau d’expression global de PD-L1. Toute coloration dans les zones nécrotiques est exclue. Dans cet exemple, la moyenne des pourcentages de cellules tumorales viables présentant une expression membranaire de chacun des quadrants donne un niveau d’expression global de PD-L1 de 50 %. Une technique similaire peut être utilisée pour estimer le niveau d’expression global de PD-L1 dans les cellules immunitaires associées à la tumeur avec une coloration répartie de façon hétérogène. (0.6x) Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 53 Impact des conditions préanalytiques sur la coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Fixations recommandées pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Il est recommandé de fixer les tissus au NBF à 10 % pendant 6 à 72 heures. Les fixateurs acceptables et les temps de fixation sont indiqués en bleu. Coloration d’un tissu placentaire avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay obtenue avec différents fixateurs et temps de fixation Fixateur Temps (heures) NBF 10 % Formol-zinc Fixateur PREFER** AFA** Formol alcoolique** Éthanol 95 % 1* 6 12 24 48 72 REMARQUES *Un temps de fixation d’une heure n’est pas recommandé pour tous les types de fixateurs. **L’utilisation du fixateur PREFER et de l’éthanol à 95 % (coloration plus faible) ou des fixateurs alcooliques (fort bruit de fond) n’est pas recommandée. Voir d’autres images à plus fort grossissement à droite. 54 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Impact de l’épaisseur des tissus sur la coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Une épaisseur de tissu de 4 à 5 μm est recommandée pour une utilisation avec le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Stabilité des coupes sur lame Les coupes doivent avoir une épaisseur de 4 à 5 μm et être montées sur des lames positivement chargées. Les lames doivent être colorées dès que possible après la coupe ou séchées et conservées à température ambiante jusqu’à 45 jours. Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 55 Références 1. 2015-04-23 Updated 2015-11-18. Accessed 2016-02-08. 2. Keir ME, Butte MJ, Freeman GJ et al. PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Annu Rev Immunol 2008;26:677-704. 3. Blank C, Mackensen A. Contribution of the PD-L1/ PD-1 pathway to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic infections and tumor evasion. Cancer Immunol Immunother. 2007;56(5):739-745. 4. Butte MJ, Keir ME, Phamduy TB, et al. Programmed death-1 ligand 1 interacts specifically with the B7-1 costimulatory molecule to inhibit T-cell responses. Immunity. 2007;27(1):111-122. 5. Dong H, Zhu G, Tamada K, et al. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat Med. 1999;5(12):1365-1369. 6. Massard C, Gordon MS, Sharma S et al. Safety and efficacy of durvalumab (MEDI4736), an anti-programmed cell death ligand-1 immune checkpoint inhibitor, in patients with advanced urothelial bladder cancer. J Clin Oncol. 2016;34(26):3119-3126. 7. Patel SP, Kurzrock R. PD-L1 expression as a predictive biomarker in cancer immunotherapy. Mol Cancer Ther. 2015;14(4) 847-856. 56 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer bronchique non à petites cellules 57 Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) dialog.roche.com © 2021 Ventana Medical Systems, Inc. Tous droits réservés. VENTANA, BENCHMARK, OPTIVIEW et le logo VENTANA sont des marques commerciales de Roche. Toutes les autres marques commerciales appartiennent à leurs propriétaires respectifs. 1020535FR Rev A 2021-11-30 ">
公開リンクが更新されました
あなたのチャットの公開リンクが更新されました。