VENTANA PD-L1 (SP142) Assay Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du cancer bronchique non à petites cellules avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥10 % ii VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Table des matières Introduction 1 Utilisation prévue Utilisation prévue du produit Objectif du guide d’interprétation 2 2 2 Évaluation clinique Présentation de la coloration Algorithme d’évaluation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour le NSCLC Déroulement du traitement des échantillons Contrôles Caractéristiques de la coloration — NSCLC Différentiation de la coloration des TC et de la coloration des IC : Méthode d’évaluation Évaluation de la coloration de PD-L1 d’agrégats d’IC : Évaluation de la coloration de PD-L1 dans les IC présentes sous forme de cellules isolées : Méthodes d’évaluation : difficultés et écueils 3 3 16 17 Images de référence Expression des TC Expression des IC — Agrégats Expression des IC — Diffusion sous forme de cellules isolées Exemples de cas : < 50 % de TC et IC < 10 % Exemples de cas : ≥ 50 % de TC Exemples de cas : IC ≥ 10 % Cas difficiles 20 20 21 22 23 27 29 32 Artefacts de coloration 36 4 6 7 8 12 14 15 Impact des conditions pré-analytiques sur le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay 39 Conditions de fixation acceptables pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay 39 Stabilité de l’antigène sur des coupes de tissu 40 Références VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 41 iii Introduction VENTANA PD-L1 (SP142) Assay est un test immunohistochimique qui utilise un anticorps primaire monoclonal de lapin anti-PD-L1 pour reconnaître la protéine-ligand de mort programmée 1 (PD-L1). Ce test a été mis au point conjointement par Roche/Ventana Medical Systems, Inc. (Ventana) et Roche/Genentech afin d’identifier les patients les plus susceptibles de réagir positivement à un traitement par TECENTRIQ® (atezolizumab). Le cancer du poumon, ou cancer bronchique, est le cancer le plus fréquent dans le monde depuis plusieurs décennies et demeure la cause majeure de mortalité liée au cancer dans le monde. On estime qu’il représente 12,9 % de tous les nouveaux cas de cancer et qu’il est responsable de près de 1,59 million de décès chaque année dans le monde, soit environ un décès sur cinq liés au cancer.1 Rien qu’au sein de l’Union européenne, on estime à environ 274 000 le nombre de décès liés au cancer du poumon en 2016.2 Bien que des progrès aient été faits en matière de diagnostic et de traitement, le pronostic demeure mauvais avec de faibles taux de survie à long terme, quel que soit le stade. Au cours des trois dernières décennies, le cancer du poumon a connu l’une des plus faibles améliorations du taux de survie parmi l’ensemble des cancers.3 Le cancer bronchique non à petites cellules (NSCLC), l’un des deux principaux types de cancer du poumon, représente près de 85 % de tous les cas de cancer du poumon.4 Chez près de la moitié des patients chez qui le NSCLC a nouvellement été diagnostiqué, la maladie ss’est déjà métastasée, réduisant ainsi nettement la probabilité de survie. Le taux de survie relatif à cinq ans chez les patients atteints d’un NSCLC avec métastases est de 4,7 %4. La majorité des patients atteints de NSCLC présentent une maladie inopérable de stade localement avancé (stade IIIB) ou une maladie métastatique (stade IV), pour laquelle il n’existe actuellement aucun traitement curatif. En moyenne, ces patients meurent dans l’année qui suit le diagnostic. L’amélioration des résultats cliniques du cancer du poumon pourra certainement être possible grâce à une meilleure compréhension des événements moléculaires à la base de sa pathogenèse, en identifiant de nouveaux biomarqueurs cibles et en développant de nouvelles options de traitement. La PD-L1 est une protéine transmembranaire qui réduit les réponses immunitaires en se liant à ses deux récepteurs, programmed death-1 (PD-1) et B7.1 (Figure 1). La PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé sur les lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette activation perdurant en état de stimulation chronique comme dans les cas d’infection chronique ou de cancer5. La liaison de PD-L1 et de PD-1 empêche la prolifération des lymphocytes T, la production des cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne l’inactivation fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T. B7.1 est une molécule exprimée sur les cellules présentatrices d’antigène et sur les lymphocytes T activés. La 1 Figure 1 : Voie PD-1/PD-L1. liaison de la protéine PD-L1 et du récepteur B7.1 sur les lymphocytes T et les cellules présentatrices d’antigène peut entraîner une diminution des réponses immunitaires, y compris l’inhibition de l’activation des lymphocytes T et la production des cytokines.6 L’expression de PD-L1 sur les cellules immunitaires et tumorales a été observée. L’expression aberrante de PD-L1 sur les cellules tumorales (TC) semblerait entraver l’immunité anti-tumorale, résultant en une évasion immunitaire.5, 7 L’interruption de la voie PD-L1/PD-1 représente donc une stratégie attrayante pour redynamiser l’immunité des lymphocytes T spécifiques de la tumeur supprimée par l’expression de PD-L1 dans le microenvironnement tumoral. Une corrélation entre l’expression de PD‑L1 dans les TC ou dans les cellules immunitaires infiltrant les tumeurs (IC) et le bénéfice clinique obtenu avec les inhibiteurs de la voie PD‑L1/PD-1 a été décrite dans plusieurs types de cancers.7-10 L’Atezolizumab est un anticorps monoclonal humanisé présentant une région Fc qui se lie au PD-L1 et bloque les interactions avec les récepteurs PD-1 et B7.1. L’atezolizumab est une immunoglobuline kappa IgG1 non glycosylée dont la masse moléculaire calculée est de 145 kD. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Utilisation prévue Utilisation prévue du produit Objectif du guide d’interprétation Consulter la notice du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour une description détaillée de l’utilisation prévue de ce produit. Le guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay est destiné à aider les anatomopathologistes à interpréter et à évaluer les tissus de NSCLC colorés avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Remarque : L’utilisation de ce diagnostic avec les traitements indiqués peut ne pas être autorisée dans tous les pays. Consultez votre représentant local Roche pour les autorisations locales. • Les photographies incluses dans ce guide de formation illustrent les profils de coloration, ainsi que la portée de l’expression de PD-L1, qui peuvent être présents dans les tissus tumoraux NSCLC colorés avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. • Le critère de coloration décrit dans ce guide d’interprétation définit le système d’évaluation des échantillons de tissu tumoral NSCLC colorés par le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay grâce à une approche par étapes avec paliers de ≥ 50 % de TC ou ≥ 10 % pour les IC. • L’utilisation des amygdales comme tissu de contrôle dans le contexte de l’évaluation de PD-L1, ainsi que les caractéristiques et performances de coloration correspondantes sont traitées. • Les cas difficiles, les artéfacts de coloration et l’impact des conditions pré-analytiques sur le test sont également abordés. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 2 Évaluation clinique Présentation de la coloration Le test de coloration immunohistochimique (IHC) VENTANA PD-L1 (SP142) Assay génère une coloration dans les cellules tumorales (TC, Figure 2) ainsi que dans les cellules immunitaires infiltrant les tumeurs (IC, Figure 3). Les caractéristiques détaillées de la coloration sont décrites à la section « Caractéristiques de la coloration ». H&E 20X PD-L1 20x Figure 2 : Tissu de NSCLC présentant une coloration membranaire circonférentielle modérée à forte des TC. H&E 20X PD-L1 20X Figure 3 : Tissu de NSCLC présentant une coloration punctiforme et linéaire marron foncé des IC. 3 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Algorithme d’évaluation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour le NSCLC Le tissu tumoral NSCLC coloré avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay sera évalué selon une approche par étapes, conformément aux critères indiqués dans le Tableau 1. Les cellules tumorales (TC) sont évaluées en fonction du pourcentage des cellules tumorales viables présentant une coloration membranaire visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. Les cellules immunitaires infiltrant la tumeur (IC) sont évaluées en fonction du pourcentage de la zone tumorale occupée par des IC présentant une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. L’expression de PD-L1 est considérée élevée lorsque le niveau d’expression de PD-L1 est de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 %. Les lames colorées avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay seront d’abord utilisées pour évaluer la coloration des TC (étape 1 dans le Tableau 1). Si l’échantillon présente une coloration membranaire visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans ≥ 50 % de TC, le cas se verra attribuer un niveau d’expression de PD-L1 de ≥ 50 % de TC. Si l’échantillon contient < 50 % de TC colorées, la lame sera alors utilisée pour évaluer la coloration des IC (étape 2 du Tableau 1). Si l’échantillon présente une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans une quantité d’IC occupant ≥ 10 % de la zone tumorale, le cas se verra attribuer un niveau d’expression de PD-L1 de IC ≥ 10 % (IC PD-L1 positives dans ≥ 10 % de la zone tumorale). Si l’échantillon présente une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans une quantité d’IC couvrant < 10 % de la zone tumorale, le cas se verra attribuer un niveau d'expression de PD-L1 de < 50 % de TC et de IC < 10 %. Le processus d’évaluation par étapes est illustré à la Figure 4. Les échantillons de tissu tumoral NSCLC obtenus au moyen d’une biopsie par résection, d’une biopsie par excision, d’une biopsie au trocart et de toute autre procédure de biopsie effectuée sur des sites primaires et métastatiques sont acceptables. Ce test n’a pas été validé pour une utilisation avec des échantillons de cytologie ou des échantillons d’os décalcifiés. Un tissu est considéré adéquat pour une interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay s’il contient au moins 50 cellules tumorales viables. Le stroma tumoral associé n’est pas nécessaire pour l’évaluation des TC. La présence du stroma tumoral est essentielle pour l’évaluation des IC. La coloration nécessite trois coupes de chaque cas, une première coupe de tissu sériée pour la coloration H&E (hématoxyline et éosine), une deuxième pour la coloration avec le réactif de contrôle négatif et une troisième pour la coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Un échantillon de tissu amygdalien bénin préqualifié doit être utilisé comme tissu de contrôle positif et négatif pour chaque cycle de coloration. Des instructions détaillées concernant les critères de qualification et l’acceptabilité du tissu de contrôle sont fournies dans le Tableau 3. Le tissu du patient doit être coloré avec un réactif de contrôle négatif afin d’évaluer la coloration de fond non spécifique. Tableau 1 : Algorithme d’évaluation par étapes du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour le NSCLC Étape 1 : Évaluation de la coloration des cellules tumorales (TC) Expression de PD-L1 Présence d’une coloration membranaire visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité dans ≥ 50 % des cellules tumorales. ≥ 50 % de TC Absence de coloration visible de PD-L1 (OU) Présence d’une coloration membranaire visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans < 50 % des cellules tumorales. Passer à l’étape 2 Étape 2 : Évaluation de la coloration des cellules immunitaires infiltrant la tumeur (IC) Expression de PD-L1 Présence d’une coloration visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans les cellules immunitaires infiltrant les tumeurs couvrant ≥ 10 % de la zone tumorale occupée par des cellules tumorales, du stroma intratumoral associé et du stroma péritumoral contigu. IC ≥ 10 % Absence de coloration visible de PD-L1 (OU) Présence d’une coloration visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans une quantité de cellules immunitaires infiltrant la tumeur couvrant < 10 % de la zone tumorale occupée par des cellules tumorales, du stroma intratumoral associé et du stroma péritumoral contigu. < 50 % de TC et IC < 10 % VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 4 ÉTAPE 1 L’échantillon de tissu de NSCLC présente-t-il une expression de PD‑L1 dans ≥ 50 % de TC ? Oui Non ÉTAPE 2 Oui L’échantillon de tissu de NSCLC présente-t-il une expression de PD‑L1 dans ≥ 10 % IC ? Non ≥ 50 % de TC IC ≥ 10 % < 50 % de TC et IC < 10 % Figure 4 : Processus d’évaluation par étapes du VENTANA PD-L1 (SP142) Assay sur des tissus de NSCLC (images grossies 10x). 5 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Déroulement du traitement des échantillons Un échantillon de tissu tumoral NSCLC est fixé dans du formol neutre tamponné à 10 % pendant 6 à 72 heures, traité, puis inclus en paraffine conformément aux procédures de laboratoire standard. Les coupes de 4 μm d’épaisseur sont placées sur des lames de verre chargées positivement. (Trois coupes sériées sont nécessaires) Adéquation de l’échantillon : au moins 50 cellules tumorales viables* La coloration H&E est effectuée. La lame H&E estelle acceptable ? NSCLC, H&E Non Oui Une coupe est colorée avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Une coupe est colorée avec l’anticorps Rabbit Monoclonal Negative Control Ig (Negative Reagent Control, NRC). Un échantillon de tissu amygdalien est utilisé comme tissu de contrôle positif et négatif. Répéter la coloration** Répéter la coloration** Non La lame de contrôle portant l’échantillon de tissu amygdalien est-elle acceptable ? Tissu amygdalien, IHC Oui Répéter la coloration** Non La lame NRC estelle acceptable ? NSCLC, NRC Oui Répéter la coloration** Non La lame IHC PD-L1 est-elle acceptable ? * Le stroma tumoral n’est pas nécessaire pour l’évaluation des TC. La présence du stroma tumoral est essentielle pour l’évaluation des IC. ** La répétition peut être effectuée sur le même tissu ou sur un autre échantillon de tissu du patient, selon le cas. (Toutes les images du tissu tumoral NSCLC sont obtenues avec un agrandissement 1x. Les images du tissu amygdalien sont obtenues avec un agrandissement 4x.) Oui NSCLC, IHC Statut de PD-L1 relevé par un anatomopathologiste expérimenté VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 6 Contrôles Les tissus de contrôle doivent être utilisés uniquement pour vérifier que les performances des tissus traités, des réactifs de test et des instruments sont correctes, et non comme une aide à la formulation d’un diagnostic spécifique sur des échantillons de patients. Pour chaque cycle de coloration, il est recommandé d’utiliser un tissu de contrôle par ensemble de conditions de test (les contrôles sur lame sont acceptables). Le tissu amygdalien humain bénin est un tissu de contrôle idéal car il contient des cellules immunitaires et épithéliales à coloration positive et négative et peut servir de tissu de contrôle positif et négatif pour VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Le tissu amygdalien coloré avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay affiche une coloration des lymphocytes et des macrophages situés dans les centres germinaux, avec des cellules immunitaires colorées pour PD-L1 dispersées parmi les cellules PD-L1-négatives situées dans les régions interfolliculaires. En outre, une coloration diffuse est observée dans les cellules épithéliales cryptiques réticulées, avec une absence de coloration des cellules épithéliales pavimenteuses superficielles. Le tissu amygdalien fixé dans du NBF à 10 % et traité de la même manière que les tissus du patient doit être qualifié et utilisé comme tissu de contrôle. Le tissu amygdalien de contrôle doit présenter une coloration acceptable pour qu’un essai soit jugé concluant. Si le tissu amygdalien ne présente pas une coloration acceptable, le test est considéré comme non valide et doit être répété en incluant des échantillons du patient. Les critères de qualification et d’acceptabilité applicables aux tissus amygdaliens de contrôle sont indiqués dans le Tableau 2. Tableau 2 : Critères de qualification et d’acceptabilité des tissus amygdaliens Acceptable Inacceptable Éléments tissulaires négatifs : cellules immunitaires négatives pour PD-L1 dans les régions interfolliculaires avec épithélium pavimenteux superficiel négatif. Coloration de fond non spécifique excessive gênant l’identification des cellules positives pour PD-L1. Éléments tissulaires positifs : coloration modérée à forte de PD-L1 observée dans les lymphocytes et les macrophages situés dans les centres germinaux, avec coloration diffuse dans les cellules d’épithélium réticulé des cryptes. Coloration inexistante à faible de PD-L1 observée dans les lymphocytes et dans les macrophages situés dans les centres germinaux ainsi que dans les cellules d’épithélium réticulé des cryptes. Épithélium pavimenteux superficiel PD-L1 4X PD-L1 20X Coloration de fond non spécifique PD-L1 20x PD-L1 20X Épithélium cryptique Faible coloration dans les lymphocytes, les macrophages et les cellules épithéliales Région interfolliculaire Centre germinal 7 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Caractéristiques de la coloration — NSCLC La coloration de PD-L1 avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay de tissus tumoraux NSCLC génère une coloration des TC (Figures 5 à 7) ainsi que des IC (Figures 8 à 12). Les images de ce guide d’interprétation sont des clichés de lames numérisées. L’agrandissement utilisé est indiqué pour chaque image. Coloration des TC : H&E 20X PD-L1 20x Forte coloration des TC Figure 5 : Les TC présentent souvent une coloration membranaire circonférentielle partielle ou complète, modérée à forte, avec ou sans composante cytoplasmique. H&E 20X PD-L1 20X Faible coloration des TC Figure 6 : Une faible coloration membranaire est parfois observée et doit être confirmée par un examen sous fort grossissement. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 8 H&E 40X PD-L1 40X Coloration basolatérale des TC Figure 7 : Une coloration basolatérale de la membrane peut être observée dans les adénocarcinomes. Coloration des IC : Les IC sont les cellules immunitaires présentes dans le stroma intratumoral et dans le stroma péritumoral contigu. La coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay met en évidence une population hétérogène de cellules immunitaires. La majorité de ces cellules est morphologiquement similaire aux lymphocytes, aux macrophages, aux cellules dendritiques et aux granulocytes. H&E 20X PD-L1 20X Agrégat d’IC dans le stroma péritumoral Agrégat d’IC dans le stroma intratumoral Figure 8 : Les IC présentent souvent une coloration punctiforme ou linéaire marron foncé qui constitue le profil de coloration des IC prédominant dans la majorité des tissus. La coloration des IC est souvent observée sous forme d’agrégats présents soit dans le stroma intratumoral, soit dans le stroma péritumoral (interface tumeur-stroma), soit aux deux emplacements. 9 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % H&E 40X PD-L1 40X IC isolées dispersées parmi les cellules tumorales Figure 9 : Une coloration des IC peut parfois également être observée sous forme de cellules isolées à répartition focale ou diffuse ou de petits agrégats dispersés (diffusion de cellules isolées) parmi les cellules tumorales. Ce profil peut être observé en association avec des agrégats dans le stroma tumoral. La coloration des IC correspond aux cellules immunitaires situées parmi les cellules tumorales dans l’image H&E. H&E 40X PD-L1 40X Coloration circonférentielle des IC H&E 40X PD-L1 40X Coloration réticulaire des IC Figure 10 : Un profil de coloration réticulaire ou membranaire circonférentielle de PD-L1 peut être observé, respectivement, dans les IC comportant des macrophages et/ou des cellules dendritiques. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 10 H&E 40X PD-L1 40X Neutrophiles Figure 11 : Dans de rares cas, une coloration des IC peut être observée dans les neutrophiles sous forme de coloration punctiforme fine couplée à une coloration granulaire diffuse. La coloration des neutrophiles peut être dispersée parmi les cellules tumorales, dans le stroma intratumoral ou péritumoral, ou sous forme d’agrégats. H&E 40X PD-L1 40X Macrophages alvéolaires Figure 12 : Les macrophages alvéolaires peuvent présenter une coloration membranaire circonférentielle d’une intensité modérée à forte. Un examen des lames H&E correspondantes peut aider à distinguer ce phénomène de la coloration des TC. 11 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Différentiation de la coloration des TC et de la coloration des IC : Une coloration des TC peut être observée en association avec une coloration des IC. Un examen de la lame H&E correspondante aidera à distinguer les IC des TC. Associé à un examen sous fort agrandissement de la lame colorée pour PD-L1, cet examen peut aider à distinguer la coloration des TC de la coloration des IC. Les images suivantes représentent différents profils couramment observés dans la pratique clinique, lorsque la coloration des TC et la coloration des IC sont observées simultanément (Figures 13 à 15). H&E 40X IC rares voire inexistantes parmi les TC sur la lame H&E PD-L1 40X Forte coloration des IC Agrégat d’IC dans le stroma Figure 13 : Les TC présentent une forte coloration membranaire, avec de rares IC parmi les cellules tumorales identifiées sur la lame H&E. H&E 20X Nombreuses IC parmi les TC sur la lame H&E PD-L1 20X Coloration des IC dispersées parmi les cellules tumorales Faible coloration des TC Figure 14 : Les TC présentent une coloration membranaire faible à modérée, avec de nombreuses IC parmi les TC identifiées sur la lame H&E. Noter la présence d’une forte coloration punctiforme des IC présentes parmi les TC. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 12 H&E 40X PD-L1 40x IC rares voire inexistantes parmi les TC sur la lame H&E Coloration perlée des TC IC rares voire inexistantes parmi les TC sur la lame H&E H&E 20X Coloration perlée des TC PD-L1 20X Figure 15 : Si la lame H&E ne présente que peu d’IC identifiables et qu’un profil de coloration granulaire ou perlé est observé parmi les TC, alors cette coloration doit être attribuée aux TC plutôt qu’aux IC. 13 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Méthode d’évaluation Les tissus tumoraux NSCLC colorés avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay serviront à évaluer la coloration des TC et la coloration des IC selon une approche par étapes décrite dans le Tableau 2. • Évaluation des TC : la coloration des TC est évaluée en fonction du pourcentage de cellules tumorales viables présentant une coloration membranaire, quelle qu’en soit l’intensité. La coloration membranaire doit être visible sous forme de coloration curvilinéaire le long de la membrane de la cellule tumorale même si elle est associée à une qualité granulaire ou perlée. Une coloration cytoplasmique peut être observée avec une coloration de la membrane, mais elle n’est pas incluse pour l’évaluation des cellules tumorales. • Évaluation des IC : les IC sont évaluées en fonction du pourcentage de la zone tumorale occupé par des cellules immunitaires présentant une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. Toute coloration des IC, quel que soit le type de cellules ou leur emplacement, est incluse. -Zone tumorale : la zone tumorale pour l’interprétation du test PD-L1 (SP142) est définie comme la surface occupée par des cellules tumorales viables, le stroma intratumoral associé et le stroma péritumoral contigu (Figures 16A à 16C). Les tumeurs nécrotiques sont exclues de cette définition de la zone tumorale (Figure 16D). -Dans les échantillons de tissu fragmentés, y compris les biopsies, où la distinction entre le stroma intratumoral et le stroma péritumoral est difficile, seul le stroma contigu aux différents foyers tumoraux est inclus dans la définition de la zone tumorale. Le stroma faisant partie du fragment de tissu, mais non contigu à une tumeur viable est exclu (Figure 16B). A H&E 4X B H&E 1X Stroma péritumoral Zone tumorale Zone tumorale Cellules tumorales C H&E 1X Stroma intratumoral Zone tumorale D H&E 2X X XX X X XX Figure 16 : A Zone tumorale ; B Zone tumorale dans un échantillon prélevé par résection ; C Zone tumorale dans un échantillon de biopsie ; et D Zone tumorale dans un échantillon présentant une nécrose. Exclure la nécrose de la zone tumorale VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 14 Évaluation de la coloration de PD-L1 d’agrégats d’IC : H&E 1X Examen de la lame colorée par H&E afin d’y déceler la présence d’une tumeur, d’une nécrose, détermination de l’adéquation de l’échantillon (au moins 50 cellules tumorales viables*), et évaluation de la zone tumorale. Zone tumorale PD-L1 10X Seule une coloration des IC est observée Examiner la lame colorée pour PDL1 sous un agrandissement de 10x ou 20x et confirmer que le profil de coloration global correspond aux IC, aux TC ou aux deux. Zone tumorale PD-L1 4X Entourer visuellement les agrégats d’IC aussi précisément que possible sous un agrandissement de 2x ou 4x. Agrégats d’IC Combiner la coloration des agrégats et estimer le pourcentage de la zone tumorale occupé par les agrégats d’IC en utilisant un agrandissement de 2x ou 4x. L’expression de PD-L1 pour ce cas est IC ≥ 10 %. La section Images de référence doit être utilisée comme aide à l’évaluation. PD-L1 4X * Le stroma tumoral n’est pas nécessaire pour l’évaluation des TC. La présence du stroma tumoral est essentielle pour l’évaluation des IC. 15 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Évaluation de la coloration de PD-L1 dans les IC présentes sous forme de cellules isolées : PD-L1 10X Densité cellulaire en cas de diffusion sous forme de cellules isolées IC < 1 % PD-L1 10X Densité cellulaire en cas de diffusion sous forme de cellules isolées IC ≥ 10 % Les IC présentes sous forme de cellules isolées sont évaluées en fonction de la densité de la diffusion sous forme de cellules isolées, en utilisant les images de référence fournies dans ce guide. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 16 Méthodes d’évaluation : difficultés et écueils 1. Coloration dans les débris nécrotiques et dans les débris glandulaires intraluminaux : les débris nécrotiques ou les cellules immunitaires situées en périphérie des régions nécrotiques ou apoptotiques peuvent présenter une coloration de PD-L1. Cette coloration peut être granulaire et être confondue avec la coloration des IC. Cette coloration ainsi que la coloration des neutrophiles observée sous forme d’agrégats doivent être exclues de l’évaluation (Figures 17 et 18). H&E 10X PD-L1 10X Coloration sur les débris nécrotiques Figure 17 : Débris nécrotiques présentant une coloration de PD-L1. La coloration des débris nécrotiques ne doit pas être incluse dans l’évaluation. H&E 20X PD-L1 20X Coloration des cellules tumorales en bordure Coloration des débris intraluminaux Figure 18 : Débris intraluminaux présentant une coloration de PD-L1. Ils ne doivent pas être inclus dans l’évaluation. Quelques cellules tumorales viables en bordure de la coloration de PD-L1 qui doivent être incluses dans l’évaluation des TC. 17 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 2. Métastase au niveau d’un ganglion lymphatique : le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay peut être utilisé pour tester des échantillons primaires et des échantillons métastatiques. Les échantillons métastatiques peuvent provenir de différents organes, parmi lesquels les ganglions lymphatiques, le foie, la glande surrénale, les os et les tissus mous. Les métastases osseuses ne conviennent pas pour la coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Les métastases des ganglions lymphatiques méritent une attention particulière, compte tenu de la présence de cellules immunitaires natives qui présentent une coloration de PD-L1. Dans les tumeurs qui se sont métastasées dans les ganglions lymphatiques, seule la coloration des infiltrats de cellules immunitaires contiguë aux cellules tumorales doit être prise en compte pour déterminer le pourcentage d’IC présentant une coloration de PD-L1 (Figure 19). H&E 4X PD-L1 4x Tissu normal du ganglion lymphatique situé en dehors de la zone tumorale - exclu de l’évaluation Zone tumorale Figure 19 : Coloration de PD-L1 dans un NSCLC métastasé dans un ganglion lymphatique 3. Coloration des macrophages alvéolaires : coloration de PD-L1 dans les macrophages alvéolaires (Figure 20). La coloration de PD-L1 dans les macrophages alvéolaires ne peut être prise en compte pour la détermination du pourcentage d’IC présentant une coloration de PD-L1 que si les macrophages sont piégés dans la masse tumorale et contigus aux cellules tumorales. Une forte coloration des macrophages alvéolaires peut être confondue avec une coloration des TC et doit être confirmée par un examen de la lame H&E correspondante. H&E 10X PD-L1 10X Macrophages alvéolaires Macrophages alvéolaires Figure 20 : Coloration de PD-L1 dans les macrophages alvéolaires situés en bordure de la tumeur. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 18 4. Cellules immunitaires intravasculaires : le système vasculaire du stroma tumoral peut présenter des cellules immunitaires positives pour PD-L1 (Figure 21). Elles ne doivent pas être prises en compte pour l’évaluation des IC. H&E 40X PD-L1 40x Figure 21 : Les cellules immunitaires intravasculaires (des neutrophiles dans le cas présent) ne sont pas prises en compte pour l’évaluation des IC. 5. Pigments anthracosiques et d’hémosidérine : les pigments anthracosiques et/ou les pigments d’hémosidérine peuvent interférer avec l’évaluation des IC. Un examen des lames colorées avec le réactif de contrôle négatif ainsi qu’un examen sous fort grossissement peuvent s’avérer nécessaire dans ces situations. Cela est illustré à la Figure 22. PD-L1 20X NRC 20X H&E 20X Pigment d’hémosidérine Pigment anthracosique Pigment d’hémosidérine Coloration des IC Pigment anthracosique Figure 22 : Coloration de PD-L1 dans les IC adjacentes à du pigment anthracosique et coupe de tissu correspondante colorée avec un réactif de contrôle négatif et par H&E. 19 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Images de référence Expression des TC < 50 % de TC ≥ 50 % de TC Toutes les images sont grossies 10x VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 20 Expression des IC — Agrégats IC < 10 % IC ≥ 10 % Toutes les images sont grossies 10x 21 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Expression des IC — Diffusion sous forme de cellules isolées IC < 10 % IC ≥ 10 % Toutes les images sont grossies 10x VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 22 Exemples de cas : < 50 % de TC et IC < 10 % H&E 1X PD-L1 1X A A A H&E 4X Pigment anthracosique A PD-L1 4X Pigment anthracosique B B A NRC 4X B PD-L1 20X Pigment anthracosique Cas 1 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC et de IC < 10 %. Scores : TC : 0 % ; IC : < 1 %. Ce cas présente une coloration des débris intraluminaux qui doit être exclue de l’évaluation des IC. À noter également la présence de pigment anthracosique. 23 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % PD-L1 1X H&E 1X A A B B A H&E 4X A PD-L1 4X B H&E 4X B PD-L1 4X Cas 2 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC et de IC < 10 %. Scores : TC : 0 % et IC : 2 %. Ce cas est une métastase située dans un ganglion lymphatique qui présente une coloration interfaciale à répartition focale des cellules immunitaires. À noter que la tumeur est clairement séparée du tissu du ganglion lymphatique, ce qui permet de délimiter plus facilement les contours de la tumeur. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 24 H&E 1X PD-L1 1X A A A H&E 10X A PD-L1 10X A H&E 20X A PD-L1 20X Cas 3 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC et de IC < 10 %. Scores : TC : 15 % et IC : 1 %. À noter la présence d’une faible coloration des TC. 25 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % H&E 1X PD-L1 1X B B A A A H&E 4X A PD-L1 4X B H&E 10X B PD-L1 10X Cas 4 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC et de IC < 10 %. Scores : TC : 0 % et IC : 5 %. Ce cas présente une diffusion sous forme de cellules isolées relativement uniforme. L’estimation du pourcentage d’IC doit être effectuée à l’aide des images de référence Expression des IC — Diffusion sous forme de cellules isolées. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 26 Exemples de cas : ≥ 50 % de TC H&E 1X PD-L1 1X C B B A A C A H&E 4X A PD-L1 4X B PD-L1 4X C PD-L1 10X Cas 5 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de ≥ 50 % de TC. Scores : TC : 80 % et IC : 2 %. Ce cas illustre une coloration d’intensité variable des TC associée à une coloration des IC. Dans les régions présentant une forte coloration des TC, il convient de porter une attention particulière au stroma intratumoral. Dans les régions présentant une coloration faible à modérée des TC, il est relativement facile d’évaluer les IC. Un examen de la lame H&E correspondante aide à distinguer la coloration des TC de la coloration des IC. À noter également que la nécrose géographique n’est pas incluse dans l’estimation du pourcentage d’IC. 27 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % H&E 1X PD-L1 1X A A A H&E 10X A PD-L1 10X B B PD-L1 20X Cas 6 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de ≥ 50 % de TC. Scores : TC : 60 % ; IC : 5 %. Ce cas montre une combinaison de coloration des TC et de coloration des IC qui nécessite un examen sous fort grossissement et une étude de la lame H&E correspondante pour distinguer la coloration des TC de la coloration des IC. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 28 Exemples de cas : IC ≥ 10 % H&E 1X PD-L1 1X A A A H&E 10X A PD-L1 10X Cas 7 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC, mais de IC ≥ 10 %. Scores : TC : 0 % et IC : 10 %. À noter la concentration d’IC exprimant PD-L1 le long des bords de la tumeur dans le stroma. 29 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % H&E 1X PD-L1 1X A A A H&E 4X A PD-L1 4X A H&E 20X A PD-L1 20X Cas 8 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC, mais de IC ≥ 10 %. Scores : TC : 0 % ; IC : 20 %. À noter la présence d’IC intraluminales viables (macrophages) présentant une coloration de PD-L1 contiguës aux TC. Elles peuvent être confondues avec une coloration des TC et nécessitent l’examen de la lame H&E correspondante. Elles sont incluses dans le calcul du pourcentage d’IC. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 30 H&E 2X PD-L1 2X A A B B C C A PD-L1 4X B C PD-L1 4X Cas 9 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC, mais de IC ≥ 10 %. Scores : TC : 0 % ; IC : 10 %. Trois régions représentatives de la coloration des IC sont illustrées dans ce cas, avec différentes densités d’IC colorées pour PD-L1 dans chacune. Globalement, les IC du cas couvrent 10 % de la zone. À noter la présence d’une nécrose géographique qui doit être exclue de la définition de la zone tumorale lors de l’évaluation des IC. 31 PD-L1 4X VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Cas difficiles H&E 2X PD-L1 2X A A C B B A PD-L1 10X C H&E 10X B PD-L1 10X Cas 10 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC et de IC < 10 %. Scores : TC : 20 % ; IC : 5 %. Ce cas comporte une nécrose géographique qui doit être exclue de la définition de la zone tumorale. Des images sous fort grossissement des régions A et B montrent des agrégats d’IC au milieu de précipités de pigment anthracosique et à proximité de TC colorées. Lorsque la région nécrotique est exclue, ce cas comporte 5 % d’IC. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 32 H&E 1X PD-L1 1X B B A A A PD-L1 10X B PD-L1 4X C IC discrètes sous faible agrandissement C H&E 20X C PD-L1 20X Cas 11 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC et de IC < 10 %. Scores : TC : 0 % ; IC : 5 %. Ce tissu illustre une coloration focale des IC et la présence d’une coloration des macrophages, qui peuvent souvent être confondus avec des TC compte tenu de la coloration circonférentielle (Région B). À noter également la présence d’une légère coloration des IC qui n’est pas visible sous faible agrandissement. Ce cas illustre l’importance de l’examen du tissu coloré de PD-L1 sous fort grossissement pour distinguer la coloration des macrophages de la coloration des TC en utilisant la lame H&E correspondante (Région C). 33 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % H&E 1X PD-L1 1X A A B B A C C H&E 10X C B Agrégat d’IC PD-L1 20X PD-L1 10X Coloration punctiforme des IC Coloration des TC Cas 12 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC, mais de IC ≥ 10 %. Scores : TC : 10 % ; IC : 15 %. Sous fort grossissement, noter la faible coloration membranaire des cellules tumorales (Région B) et la forte coloration punctiforme des IC présentes parmi les cellules tumorales (Région C). Ce cas illustre l’importance du recours à un fort grossissement pour distinguer la coloration des IC de la coloration des TC. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 34 H&E 1X PD-L1 1X A A B B A H&E 20X A PD-L1 20X B H&E 20X B PD-L1 20X Cas 13 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de < 50 % de TC, mais de IC ≥ 10 %. Scores : TC : 40 % ; IC : 50 %. À noter la présence de TC avec une coloration membranaire plus linéaire (Région A) et d’IC avec une coloration granulaire (Région B). Ce cas présente une forte coloration des TC et des IC avec un infiltrat immunitaire dense sur la lame H&E. Ce scénario exige un examen minutieux sous fort grossissement pour attribuer un score aux TC et aux IC. Les régions présentées ici aident à distinguer la coloration des TC de la coloration des IC. 35 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Artefacts de coloration Les artéfacts signalés dans cette section peuvent être observés sur les lames colorées avec le Negative Reagent Control et sur les lames colorées avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. La présence de ces artéfacts peut nécessiter la répétition de la coloration s’ils interfèrent avec l’interprétation de la coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Toujours examiner la lame Negative Reagent Control correspondante afin de vérifier que la coloration de fond non spécifique se situe dans les limites acceptables. PD-L1 2x PD-L1 2x Taches non colorées Taches non colorées : les taches non colorées sont des zones faiblement ou non colorées généralement circulaires dues à une bulle statique qui s’est formée pendant la procédure de coloration. L’image de gauche représente un exemple d’une tache non colorée comparée à la coloration appropriée représentée sur l’image de droite. Si la tache non colorée interfère avec l’interprétation de la lame colorée pour PD-L1, un nouveau cycle de coloration peut être nécessaire. NRC 20x Mouchetage PD-L1 20X Coloration spécifique de PD-L1 dans les IC Mouchetage : le mouchetage, représenté sur l’image de gauche, est une coloration non spécifique faible à modérée, qui apparaît sous la forme d’un précipité granulaire fin réparti uniformément et qui se forme le plus souvent dans le cytoplasme. Le mouchetage n’est pas conforme aux caractéristiques de coloration des IC ou des TC. Cet artéfact ne doit pas être confondu avec une coloration spécifique telle que représentée sur l’image de droite. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 36 PD-L1 20X PD-L1 20X Taches de DAB : les taches de DAB sont des taches circulaires qui peuvent se former en raison de DAB piégée sous la coupe tissulaire pendant la procédure de coloration. Si cet artéfact interfère avec l’interprétation de la lame colorée pour PD-L1, répéter la coloration avec des lames non colorées fraîches. Sur l’image de droite, la tache de DAB n’est pas présente sur la nouvelle coloration réalisée sur une coupe sériée. NRC 10X NRC 10X Débris luminaux : le tissu amygdalien coloré à l’aide du VENTANA PD-L1 (SP142) Assay peut servir à la fois de tissu de contrôle positif et négatif en raison de la présence d’éléments positifs et négatifs pour la coloration. Une coloration luminale due à une réactivité croisée avec un antigène inconnu peut être observée sur l’image de tissu amygdalien coloré avec le NRC à gauche. Un exemple approprié de tissu amygdalien coloré avec le NRC est représenté à droite. Si vous choisissez d’utiliser le NRC sur un tissu de contrôle amygdalien et que des débris luminaux sont observés, l’échantillon ne devrait pas être utilisé comme tissu de contrôle. 37 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % NRC 10X PD-L1 10x Points de DAB Coloration spécifique de PD-L1 dans les IC Points de DAB : une coloration de fond punctiforme non spécifique peut être observée sur du tissu de n’importe quel échantillon. Il s’agit de petits artéfacts de colorations aléatoires générés par le processus d’amplification du système de détection. Par rapport à la coloration de PD-L1 des IC, les points de DAB sont plus petits et présentent une morphologie différente et plus nette que la coloration punctiforme des IC. La coloration attendue des cellules immunitaires est visible sur l’image de droite. NRC 4X PD-L1 4X Bruit de fond sérique Coloration spécifique de PD-L1 dans les IC Bruit de fond sérique : le bruit de fond sérique est une coloration non spécifique qui se produit dans les espaces vasculaires et dans les extravasations de sérum. Ce bruit de fond peut être observé en bas de chacune des images ci-dessus. Il ne doit pas être confondu avec une coloration spécifique de PD-L1 sur les IC comme illustrée sur l’image de droite. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 38 Impact des conditions pré-analytiques sur le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay Conditions de fixation acceptables pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay • Ventana recommande d’effectuer la fixation pendant 6 à 72 heures dans du NBF à 10 %. • Le formol zinc permet d’obtenir une coloration comparable à celle obtenue avec le NBF à 10 %. • La fixation pendant moins de 6 heures n’est pas recommandée. • Les échantillons fixés avec du Z-5 présentent une coloration non comparable à celle obtenue avec les échantillons fixés avec du NBF à 10 %. La fixation au Z-5 n’est pas recommandée. • Le PREFER (Anatech, Ltd.) et les fixateurs à l’alcool, y compris l’AFA (coloration plus faible) ne sont pas recommandés. Tableau 4 : Coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay d’un tissu amygdalien avec différents fixateurs et pendant différents temps de fixation Temps de fixation (en heures) Fixateur NBF à 10 % Formol zinc Z-5* PREFER* (Anatech, Ltd.) AFA* Alcool à 95 %* 1* 6 12 24 72 Recommandé * Non recommandé 39 (toutes les images sont agrandies 20x) VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % Stabilité de l’antigène sur des coupes de tissu Les coupes de tissu tumoral NSCLC (lames non colorées) et de tissu amygdalien humain doivent être colorées dans les deux mois qui suivent la coupe. Passé ce délai, les coupes de tissu (lames non colorées) conservées à température ambiante présentent une perte de coloration importante (Figure 23). A Jour 0 PD-L1 4X B PD-L1 4X Après 2 mois Figure 23 : Coupes sériées de tissu de NSCLC colorées lors du jour 0 (A) et après deux mois de conservation à température ambiante (B). VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 40 Références 1. Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, et al. GLOBOCAN 2012 v1.0. Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11. http://globocan.iarc.fr. Published 2013-12-12. Updated 2014-01-09. Accessed 2016-02-08. 2. Malvezzi M, Carioli G, Bertuccio P, et al. European cancer mortality predictions for the year 2016 with focus on leukaemias. Ann Oncol. 2016;27(4):725-31 3. Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer Statistics, 2013. CA Cancer J Clin. 2013;63(1):11-30. 4. Howlader N, Noone AM, Krapcho M, et al. (eds). SEER Cancer Statistics Review (CSR),1975-2012. National Cancer Institute. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2012/. Published 2015-04-23. Updated 2015-11-18. Accessed 2016-02-08. 5. Blank C, Mackensen A. Contribution of the PD-L1/PD-1 pathway to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic infections and tumor evasion. Cancer Immunol Immunother. 2007;56(5):739-745. 6. Butte MJ, Keir ME, Phamduy TB, et al. Programmed death-1 ligand 1 interacts specifically with the B7-1 costimulatory molecule to inhibit T cell responses. Immunity. 2007;27(1):111-122. 7. Herbst RS, Soria JC, Kowanetz M, et al. Predictive correlates of response to the anti-PD-L1 antibody MPDL3280A in cancer patients. Nature. 2014;515(7528):563-567. 8. Brahmer JR, Drake CG, Wollner I, et al. Phase I study of singleagent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates. J Clin Oncol. 2010;28(19):3167-3175. 9. Fehrenbacher L, Spira A, Ballinger M et al. Atezolizumab versus docetaxel for patients with previously treated non-small-cell lung cancer (POPLAR): a multicentre, open-label, phase 2 randomised controlled trial. Lancet. 2016;387(10030):1837-1846. 10. Topalian SL, Hodi FS, Brahmer JR, et al. Safety, activity, and immune correlates of anti-PD-1 antibody in cancer. N Engl J Med. 2012;366(26):2443-2454. 41 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % 42 Consulter la notice du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay correspondant pour connaître les coordonnées du fabricant. www.ventana.com © 2020 Ventana Medical Systems, Inc. et Roche Diagnostics International, Inc. Tous droits réservés. VENTANA et le logo VENTANA sont des marques commerciales de Roche. Toutes les autres marques de commerce appartiennent à leurs détenteurs respectifs. 1015703FR Rev C 2020-07-15 43 VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour l’algorithme d’évaluation par étapes du NSCLC avec paliers de ≥ 50 % de TC ou de IC ≥ 10 % ">
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