Test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Guide d’interprétation 2 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Table des matières Introduction4 Utilisation prévue du produit 4 Objectif du Guide d’interprétation 4 Évaluation clinique Évaluation des profils et de l’intensité de coloration Exigences relatives aux tissus Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond Tissu de contrôle positif Algorithme d’évaluation VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le tissu de carcinome urothélial Présentation de l’algorithme d’évaluation VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le carcinome urothélial Évaluation de la coloration des cellules immunitaires 5 5 10 10 11 12 14 16 Atlas d’expression de la PD-L1 dans le carcinome urothélial Cas de cellules tumorales Cas de cellules immunitaires 25 25 31 Cas difficiles 39 Cas difficiles : faible coloration membranaire des cellules tumorales par rapport à faible coloration cytoplasmique40 Cas difficiles : chevauchement d’une forte coloration des cellules immunitaires et de la coloration des cellules tumorales 42 Cas difficiles : cas avec de multiples fragments de tissus 44 Cas difficiles : état limite de la PD-L1 45 Cas difficiles : Matériel endogène gênant48 Répercussion des conditions préanalytiques sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par le test Stabilité des lames 50 50 51 51 Références51 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 3 Introduction Le carcinome urothélial (aussi appelé carcinome à cellules transitionnelles de la vessie ou cancer urothélial de la vessie) est le type de cancer de l’appareil urinaire le plus fréquent au monde. La plupart des tumeurs urothéliales se développent dans la vessie. Dans le reste des cas, elles apparaissent dans le bassinet du rein, dans l’urètre ou dans l’uretère. Le carcinome à cellules transitionnelles (CCT) est le sous-type histologique associé au cancer de la vessie le plus fréquent et représente plus de 90 % des cas de carcinome urothélial dans les pays industrialisés. Les sous-types non urothéliaux (p. ex., carcinome épidermoïde, adénocarcinome, carcinome à petites cellules) sont plus fréquents dans d’autres régions du monde.1 À l’échelle mondiale, on estimait à 429 793 le nombre de nouveaux cas de cancer de la vessie et à 165 084 le nombre de décès en 2012. 2 Rien qu’en Europe, en 2012, il y a eu environ 151 297 nouveaux cas de cancer de la vessie et 52 411 décès. En 2015, on a estimé qu’il y aurait 74 000 nouveaux cas de cancer de la vessie et 16 000 décès aux États-Unis.3 Le carcinome urothélial se présente comme une maladie non musculo-invasive, musculo-invasive ou métastatique. Le taux de survie globale de cinq ans pour le carcinome urothélial métastatique (CUm) est d’environ 5,4 %.4 La PD-L1 est une protéine transmembranaire qui diminue les réponses immunitaires en se liant à deux de ses récepteurs, PD-1 (mort cellulaire programmée 1) et B7-1 (CD80).5 PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé sur les lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette activation perdurant en état de stimulation chronique comme dans les cas d’infection chronique ou de cancer.6 La liaison de la PD-L1 et de la PD-1 empêche la prolifération des lymphocytes T, la production des cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne l’inactivation fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T. CD80 est une molécule exprimée sur les cellules présentatrices d’antigène et les lymphocytes T activés. La liaison de la protéine PD-L1 et du récepteur CD80 sur les lymphocytes T et les cellules présentatrices d’antigène peut entraîner une diminution des réponses immunitaires, y compris l’inhibition de l’activation des lymphocytes T et la production des cytokines.7 L’expression de la PD-L1 sur les cellules immunitaires et tumorales a été observée.8,9 L’expression aberrante de la PD-L1 sur les cellules tumorales ou les cellules immunitaires associées à la tumeur semblerait entraver l’immunité antitumorale, résultant en une évasion immunitaire.6,9 L’interruption de la voie PD-L1/PD-1 représente donc une stratégie intéressante pour redynamiser l’immunité des lymphocytes T spécifiques de la tumeur supprimée par l’expression de la PD-L1 dans le microenvironnement tumoral. La PD-L1 est exprimée dans un large éventail de cancers, dont le cancer du poumon, le mélanome, le cancer urothélial, le cancer de l’ovaire et le cancer colorectal. Une prévalence de l’expression de la PD-L1 de 12 % à 100 % a été rapportée, selon le type de tumeur, le clone anti-PD-L1 et le seuil de positivité.10 Utilisation prévue du produit Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay est un test d’immunohistochimie utilisant le clone anti-PD-L1 monoclonal de lapin SP263 pour la détection qualitative de la protéine PD-L1 4 dans des tissus de carcinome urothélial fixés au formol, inclus en paraffine (FFPE) et colorés avec le kit de détection OptiView DAB IHC Detection Kit sur les appareils BenchMark IHC/ISH. L’état de la PD-L1 est déterminé par le pourcentage de cellules tumorales présentant toute coloration membranaire au-delà de la coloration de fond ou par le pourcentage de cellules immunitaires associées à la tumeur présentant une coloration (IC +), quelle que soit l’intensité au-delà de la coloration de fond. Le pourcentage de la zone tumorale occupé par les cellules immunitaires associées à la tumeur (cellules immunitaires présentes, ICP) est utilisé pour déterminer IC +, c’est-à-dire le pourcentage de la zone d’ICP présentant une coloration des cellules immunitaires positive à la PD-L1. L’état de la PD-L1 est considéré comme élevé si l’un des critères suivants est rempli : • ≥ 25 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire ; ou, • ICP > 1 % et IC + ≥ 25 % ; ou, • ICP = 1 % et IC + = 100 %. L’état élevé de la PD-L1, déterminé par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, a été associé à une augmentation du taux de réponse objective (ORR) lors d’une étude à un seul bras d’IMFINZI™ (durvalumab). Ce produit est conçu pour être utilisé en diagnostic in vitro (DIV). Objectif du Guide d’interprétation Le présent guide vise à aider les pathologistes lors de l’évaluation clinique des coupes de tissu de carcinome urothélial fixées au formol, incluses en paraffine (FFPE) et colorées avec le test en utilisant les algorithmes d’évaluation, conformément à l’étiquetage proposé du produit. Plus précisément, ce guide : • Fournit aux pathologistes un outil pour faciliter l’évaluation des coupes de tissu de carcinome urothélial fixées au formol, incluses en paraffine (FFPE) et colorées avec le test en utilisant les algorithmes d’évaluation, conformément à l’étiquetage proposé du produit. • Contient des clichés photographiques qui illustrent les profils et l’intensité de coloration résultant de la coloration d’échantillons de tissus de carcinome urothélial avec le test. • Fournit des indications pour l’utilisation de tissu placentaire en tant que tissu de contrôle lorsqu’il est coloré avec le test. • Fournit des clichés photographiques de contrôles internes. • Fournit une référence pour associer des profils de coloration à des scores spécifiques de PD-L1. • Fournit des exemples d’images illustrant les cas difficiles afin de faciliter leur évaluation. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Évaluation clinique Évaluation des profils et de l’intensité de coloration Les cas de carcinome urothélial colorés avec le test sont évalués pour déterminer le pourcentage de cellules tumorales avec coloration membranaire et le pourcentage de cellules immunitaires associées à la tumeur avec coloration membranaire, cytoplasmique ou punctiforme. Coloration des cellules tumorales : Les cellules tumorales de carcinome urothélial marquées avec le test sont évaluées afin de déterminer le pourcentage de cellules tumorales avec coloration membranaire, quelle que soit l’intensité du signal DAB (diaminobenzidine). La coloration immunohistochimique des tissus de carcinome urothélial est membranaire ou cytoplasmique, et peut être exprimée de manière homogène ou hétérogène dans tout le néoplasme. La coloration membranaire peut avoir un profil circonférentiel total ou partiel. La coloration cytoplasmique est généralement diffuse bien que certains cas soient finement granulaires. La coloration cytoplasmique des cellules tumorales n’est pas évaluée pour déterminer l’expression de la PD-L1. Le pourcentage total d’intensités de signal membranaire est estimé visuellement et utilisé pour générer le niveau d’expression de la PD-L1. Un anticorps de contrôle négatif correspondant à l’isotype est utilisé pour évaluer la présence d’une coloration de fond dans les échantillons testés et établir une intensité de coloration de référence. Carcinome urothélial, H&E et test : divers cas présentant la plage de coloration membranaire et cytoplasmique dans les cellules tumorales (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 5 Carcinome urothélial, H&E et test : cellules tumorales avec profil de coloration membranaire circonférentielle (flèche noire) et partielle (flèche bleue) (20X) Carcinome urothélial, H&E et test : cellules tumorales avec profil de coloration membranaire faible (flèche bleue) (20X) Carcinome urothélial, H&E et test : cellules tumorales présentant une coloration membranaire et cytoplasmique granulaire faible (40X) 6 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Coloration des cellules immunitaires associées à la tumeur : Les cellules immunitaires présentent toute une gamme d’intensités et de profils de coloration : de négative à cytoplasmique diffuse faible, ou signal membranaire faible à fort. Un profil de coloration punctiforme peut être observé en association avec des lymphocytes. L’expression de la PD-L1 a été constatée dans des lymphocytes, des macrophages, des histiocytes, des cellules plasmatiques et des neutrophiles. Le pourcentage de cellules immunitaires associées à la tumeur colorées dans les cas de carcinome urothélial est évalué en plus de la coloration des cellules tumorales. La coloration des cellules immunitaires est évaluée en examinant d’abord toute la zone tumorale et en déterminant le pourcentage de la zone tumorale occupé par les cellules immunitaires (ICP). Ensuite, le pourcentage de cellules immunitaires présentant tout profil d’expression de la PD-L1 dans la zone tumorale est estimé visuellement (IC +). Carcinome urothélial, H&E et test : plusieurs cas illustrant la plage et les profils de coloration des cellules immunitaires (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 7 Carcinome urothélial, H&E et test : coloration positive des macrophages (contour bleu) avec tumeur adjacente négative à la PD-L1 (20X) Carcinome urothélial, H&E et test : coloration punctiforme (contour bleu) et membranaire (flèche noire) des cellules immunitaires avec tumeur adjacente négative à la PD-L1 (20X) Carcinome urothélial, H&E et test : cellules immunitaires éparses présentant une coloration punctiforme infiltrant la tumeur (exemple unique encerclé en bleu) (20X) 8 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial NSCLC, H&E et test : cas avec une rare infiltration par neutrophiles uniquement (flèche bleue) dans la tumeur présentant une coloration par PD-L1. Une coloration membranaire des cellules tumorales est également présente (flèche noire) (40X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 9 Exigences relatives aux tissus Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay nécessite une coupe de tissu en série pour la coloration H&E (hématoxyline et éosine), une deuxième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps de contrôle négatif et une troisième coupe de tissu en série pour la coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. En outre, le tissu placentaire humain sain à terme peut être utilisé comme tissu de contrôle pour le test PD-L1 (SP263) Assay. Ce tissu présente une coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une coloration uniforme faible à forte du cytoplasme des cellules de la lignée trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma placentaire peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration du fond. Si l’évaluation H&E indique que l’échantillon patient n’est pas adéquat, un nouvel échantillon doit alors être prélevé. La coloration d’un échantillon doit être répétée sur des lames non colorées si (1) la lame du tissu de contrôle ne présente pas de coloration acceptable ; (2) la lame du cas de contrôle négatif ne présente pas de coloration acceptable ; ou (3) la lame du cas colorée avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay (la lame PD-L1 IHC) ne peut pas être évaluée. Si la dernière de ces lames ne peut pas être interprétée en raison d’artefacts, d’effets de contour, d’une nécrose, d’un manque de tissu, ou pour toute autre raison, alors la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique. Si les contrôles sont acceptables et si la lame colorée à l’aide du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay peut être évaluée, la lame peut être évaluée par un pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères d’évaluation. Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond L’acceptabilité de la morphologie et du fond est évaluée pour chaque cas de patient à l’aide des critères décrits dans les tableaux 1 et 2. Tableau 1 : Critères d’acceptabilité de la morphologie Interprétation Observation au microscope Acceptable Les éléments cellulaires d’intérêt sont visualisés, ce qui permet une interprétation de la coloration. Inacceptable Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont pas visualisés, ce qui compromet l’interprétation de la coloration. Tableau 2 : Critères d’acceptabilité du fond 10 Interprétation Observation au microscope Acceptable Coloration non spécifique qui n’est pas gênante pour l’interprétation de la coloration spécifique. Inacceptable Coloration non spécifique gênante pour l’interprétation de la coloration spécifique. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Tissu de contrôle positif Un tissu de contrôle positif connu, fixé et traité de la même manière que les échantillons de patients, doit être testé pour chaque ensemble de conditions de test et lors de chaque procédure de coloration réalisée avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu de contrôle (un cas de référence) doit être un prélèvement récent d’autopsie, de biopsie ou de chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une manière identique aux échantillons de patients. Ces tissus peuvent être utilisés pour contrôler toutes les étapes de traitement et de coloration des échantillons. Une coupe de tissu fixée ou traitée différemment de l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non pour la fixation ou préparation des tissus. Un cas de carcinome urothélial positif avec coloration modérée est plus adapté au contrôle qualité qu’un cas qui présente une coloration forte, car il pourra être utilisé pour détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes hors spécifications pouvant être liés à l’appareil. La coloration positive de la membrane des cellules néoplasiques dans le tissu de contrôle sert à confirmer que l’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a été appliqué et que l’appareil fonctionne correctement. Le tissu de contrôle positif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances et non pour aider à établir un diagnostic clinique des échantillons de patients. De plus, le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay peut utiliser comme contrôle positif du tissu placentaire humain à terme, qui présente une coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une coloration uniforme faible à forte du cytoplasme des cellules de la lignée trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma placentaire peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration du fond. Veuillez vous reporter au tableau 3. Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : coloration membranaire uniforme forte et coloration cytoplasmique modérée des cellules de la lignée trophoblastique (10X) Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : stroma et vaisseaux des villosités ne présentant aucune coloration PD-L1 (20X) Tableau 3 : Critères d’évaluation du tissu placentaire de contrôle pour le test Ventana PD-L1 (SP263) Assay Acceptable Inacceptable Coloration membranaire uniforme modérée à forte des cellules de la lignée trophoblastique, et stroma et vaisseaux placentaires incolorés. Coloration membranaire uniforme inexistante à faible des cellules de la lignée trophoblastique ou coloration spécifique des tissus stromaux et vasculaires placentaires. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 11 Algorithme d’évaluation VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le tissu de carcinome urothélial L’état et le niveau d’expression de la PD-L1 sont attribués par un pathologiste qualifié en fonction de son évaluation du pourcentage de coloration spécifique des cellules tumorales et des cellules immunitaires associées à la tumeur. L’état de la PD-L1 est fondé sur le pourcentage total de cellules tumorales présentant une coloration membranaire ou le pourcentage total de cellules immunitaires associées à la tumeur présentant une coloration (IC +), quelle qu’en soit l’intensité. Plus précisément, ce guide met en évidence un niveau d’expression supérieur ou égal à 25 % des cellules tumorales avec coloration membranaire ou des cellules immunitaires associées à la tumeur avec coloration. Dans les cas où le pourcentage de cellules immunitaires associées à la tumeur dans la zone tumorale (ICP) est de 1 %, IC + est évalué à 0 %, < 100 % ou 100 % en raison des difficultés à estimer le pourcentage de coloration dans de petits volumes de cellules immunitaires en faible concentration. La faible quantité de coloration de la PD-L1 observée dans les cas avec < 100 % IC + doit être considérée comme une expression de la PD-L1 < 25 %. Veuillez vous reporter au tableau 4. L’interprétation des cas de carcinome urothélial colorés avec le test doit se base sur les critères mentionnés dans le tableau ci-après. Des images de profils de coloration à niveaux d’expression variés sont fournies dans les sections qui suivent. Veuillez vous reporter au tableau 4. Tableau 4 : Algorithme d’évaluation VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le carcinome urothélial Interprétation de la PD-L1 Description de la coloration L’état de la PD-L1 est déterminé par le pourcentage de cellules tumorales présentant toute coloration membranaire au-delà de la coloration de fond ou par le pourcentage de cellules immunitaires associées à la tumeur présentant une coloration (IC +), quelle que soit l’intensité au-delà de la coloration de fond. Le pourcentage de la zone tumorale occupé par les cellules immunitaires associées à la tumeur (ICP) est utilisé pour déterminer IC +, c’est-à-dire le pourcentage de la zone d’ICP présentant une coloration des cellules immunitaires positive à la PD-L1. Élevé L’état de la PD-L1 est considéré comme élevé si l’un des critères suivants est rempli : • ≥ 25 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire ; ou, • ICP > 1 % et IC + ≥ 25 % ; ou, • ICP = 1 % et IC + = 100 %. Faible/négatif L’état de la PD-L1 est considéré comme faible/négatif si : • aucun des critères indiquant un état élevé de la PD-L1 n’est rempli. ÉTAT FAIBLE/NÉGATIF DE LA PD-L1 : EXPRESSION DES CELLULES TUMORALES < 25 % 0% 12 5% 10 % Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial ÉTAT ÉLEVÉ DE LA PD-L1 : EXPRESSION DES CELLULES TUMORALES ≥ 25 % 25 % 50 % 100 % ÉTAT FAIBLE/NÉGATIF DE LA PD-L1 : EXPRESSION DES CELLULES IMMUNITAIRES ASSOCIÉES À LA TUMEUR < 25 % 0 % IC + 10 % IC + 20 % IC + ÉTAT ÉLEVÉ DE LA PD-L1 : EXPRESSION DES CELLULES IMMUNITAIRES ASSOCIÉES À LA TUMEUR ≥ 25 % 30 % IC + 60 % IC + Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 80 % IC + 13 Présentation de l’algorithme d’évaluation VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le carcinome urothélial 1. La lame H&E est examinée pour détecter une tumeur viable, les cellules immunitaires associées à la tumeur et la zone tumorale. a.La zone tumorale englobe le stroma desmoplastique et les cellules immunitaires, propres et associés à la tumeur, infiltrant la tumeur et contenues dans la desmoplasie. 2. Visuellement, les cellules immunitaires associées à la tumeur sont densément agrégées (sans stroma intervenant) dans la zone tumorale lors de l’estimation des cellules immunitaires présentes (ICP). a.Les cellules immunitaires associées à la tumeur incluent celles présentes dans le stroma réactif tumoral, entre les îlots tumoraux et celles qui envahissent la tumeur en ellemême. 3. Le pourcentage d’ICP est noté en matière de 0 %, 1 %, 5 %, et en déciles et quartiles (10, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90, 100). a. Si un pourcentage brut tombe entre un décile ou un quartile, l’arrondi mathématique habituel est utilisé pour noter le décile ou le quartile le plus proche. b.Pour faire la différence entre 1 % et 5 % d’ICP, une estimation brute en pourcentage de 2 % est arrondie à 1 % et une estimation de 3 % à 4 % est arrondie à 5 %. 4. La lame colorée par PD-L1 est examinée pour détecter la coloration de cellules tumorales et de cellules immunitaires. 5. Estimation du pourcentage de cellules tumorales présentant une coloration membranaire partielle ou totale, à n’importe quelle intensité. 6. Le pourcentage de cellules immunitaires (au sein des ICP) exprimant la PD-L1 (IC +) est estimé. a. Les cellules immunitaires présentant la moindre coloration (membranaire, cytoplasmique, ou punctiforme), à n’importe quelle intensité, sont regroupées visuellement au sein des ICP pour estimer l’IC +. b.L’IC + est noté en déciles et en quartiles (0, 10, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90, 100). 7. 14 Pour les cas avec une valeur d’ICP de 1 %, le pourcentage estimé pour IC + est indiqué comme étant égal à 0 %, < 100 % ou 100 %. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Présentation de l’algorithme d’évaluation VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le carcinome urothélial Évaluer H&E pour détecter une tumeur viable et la zone tumorale (rouge). Examiner la zone tumorale à la recherche de cellules immunitaires (noir) à 10X et regrouper visuellement les cellules immunitaires à 2X ou 4X pour déterminer le pourcentage d’ICP. Cellules tumorales Cellules immunitaires Examiner la lame colorée par PD-L1 à 10X ou 20X pour distinguer la coloration des cellules tumorales de celle des cellules immunitaires. Examiner les cellules tumorales à 10X ou 20X pour évaluer la coloration membranaire, quelle qu’en soit l’intensité. Déterminer le pourcentage de cellules tumorales avec coloration membranaire en examinant l’échantillon à 2X ou 4X, le cas échéant. Examiner les cellules immunitaires à 10X ou 20X pour détecter toute coloration, à n’importe quelle intensité. Regrouper visuellement les cellules immunitaires colorées (bleu) à 2X ou 4X et comparer à la valeur d’ICP pour déterminer IC +. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 15 Évaluation de la coloration des cellules immunitaires De nombreuses cellules immunitaires présentent une coloration avec le test. Celles-ci comprennent les lymphocytes, les macrophages, les histiocytes, les cellules dendritiques réticulaires, les cellules plasmatiques et les neutrophiles. La lame colorée par H&E est initialement examinée pour déterminer le pourcentage total de la zone tumorale (cellules tumorales et tout stroma desmoplastique) occupé par des cellules immunitaires sans stroma intervenant (ICP). Les zones non considérées comme faisant partie de la zone tumorale comprennent une tumeur non viable comme celles avec des artefacts de cautérisation ou d’écrasement, et une nécrose importante. Les tissus lymphoïdes normaux non envahis par le néoplasme, comme dans le cas de ganglions lymphatiques avec une tumeur métastatique, ne sont pas considérés comme faisant partie de la zone tumorale ou des cellules immunitaires concernant la tumeur. La lame PD-L1 IHC est ensuite notée par rapport au pourcentage de cellules immunitaires associées à la tumeur colorées par PD-L1 (IC +). Les colorations membranaire, cytoplasmique et punctiforme des cellules immunitaires par PD-L1 sont toutes incluses dans l’estimation. Dans les cas où des cellules immunitaires à coloration positive sont mélangées avec des cellules tumorales à coloration positive, il peut être difficile de quantifier la coloration pour chaque composant. Des exemples d’interprétation des cellules immunitaires sont présentés dans les séries de photos suivantes. Les étapes suivantes décrivent l’estimation du pourcentage de coloration des cellules immunitaires associées à la tumeur. Estimation du pourcentage de coloration des cellules immunitaires associées à la tumeur : 1.Examiner le cas H&E pour détecter une tumeur viable reliée à un stroma desmoplastique, contenant des cellules immunitaires associées à la tumeur. Les cellules immunitaires associées à la tumeur comprennent celles présentes dans le stroma réactif tumoral, entre les îlots tumoraux et celles qui envahissent la tumeur en elle-même. Les portions de tumeur situées dans les tissus lymphatiques ne sont pas incluses dans la zone tumorale. Évaluation des cellules immunitaires 1 : les cellules immunitaires associées à la tumeur (flèches noires) dans la zone tumorale (contour bleu) sont présentes au niveau du bord d’attaque de la tumeur et sont incluses dans l’estimation de l’ICP. Un agrégat séparé de lymphocytes n’est pas compris dans la zone tumorale (contour noir) (4X) 16 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 2.L’examen à un grossissement inférieur est recommandé pour estimer le pourcentage de cellules immunitaires à l’intérieur de et adjacentes à la région tumorale (ICP). Les cellules immunitaires situées à l’intérieur des vaisseaux sanguins et des tissus lymphatiques ne sont pas prises en compte. Évaluation des cellules immunitaires 2 : la zone tumorale contenant des cellules tumorales, du stroma desmoplastique et des cellules immunitaires associées à la tumeur est entourée en bleu et inclut les agrégats de cellules immunitaires identifiés par des flèches noires. Des cellules immunitaires à l’extérieur de la zone tumorale sont également présentes (contours noirs) (1X) 3.Exclure les zones non néoplasiques non atteintes par la tumeur, les zones contenant des portions de tumeur nécrosée, et celles contenant des artefacts de cautérisation et d’écrasement. Évaluation des cellules immunitaires 3 : la zone tumorale se compose uniquement de zones viables de tumeur et de desmoplasie (zones entourées en bleu). Tout artefact de cautérisation, artefact d’écrasement, nécrose ou grande surface de tissus non néoplasiques ne sont pas pris en compte (3X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 17 4.Si les îlots tumoraux sont séparés par du muscle ou du stroma, ils sont inclus dans la zone tumorale si la tumeur borde ces derniers des deux côtés dans un champ de 10X. NON incluse dans la zone tumorale 10X INCLUSE dans la zone tumorale 10X Évaluation des cellules immunitaires 4 : les zones entourées montrent de vastes zones de stroma fibromusculaire non envahi par la tumeur. Lorsqu’il est observé à un grossissement supérieur (10X), le stroma présentant la tumeur des deux côtés dans un seul champ de vision (bleu) est inclus dans la zone tumorale globale. Lorsque le grand faisceau de stroma fibromusculaire n’est pas bordé par la tumeur dans un seul champ 10X (noir), il n’est pas inclus dans la zone tumorale globale. (1X) 18 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 5.Pour le carcinome urothélial non invasif (carcinome papillaire), inclure les cellules immunitaires contenues dans les noyaux fibrovasculaires ainsi que dans la base immédiatement adjacente de la fronde/tige. A B A B Évaluation des cellules immunitaires 5 : la flèche à double sens (noire) montre la base de la tumeur papillaire et la zone tumorale pour ce carcinome urothélial non invasif est entourée (bleu). Les cellules immunitaires du noyau fibrovasculaire intratumoral (A) (10X) et de la base adjacente de la tige (B) (5X) sont incluses dans l’estimation de l’ICP (0,8X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 19 6.Estimer visuellement la zone occupée par les cellules immunitaires associées à la tumeur par rapport à la zone tumorale totale (ICP = pourcentage de zone tumorale occupé par les cellules immunitaires). Évaluation des cellules immunitaires 6 : les régions occupées par les cellules immunitaires dans la zone tumorale dans l’image du haut (contours bleus) sont identifiées dans l’image du bas (contours gris), puis densément agrégées (illustré par les petites zones noires) afin d’estimer le pourcentage de la zone tumorale occupé par des cellules immunitaires, ou ICP : dans cet exemple, 10 % (ensemble des zones noires par rapport à la zone tumorale) (5X). 20 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Évaluation des cellules immunitaires 7 : les régions stromales occupées par des cellules immunitaires largement éparses (contours bleus) sont identifiées. Lorsque les cellules immunitaires sont densément agrégées (représenté par la zone noire) afin d’estimer le pourcentage de la zone tumorale occupé par des cellules immunitaires, l’ICP dans cet exemple est de 5 % (10X) Évaluation des cellules immunitaires 8 : les infiltrats de cellules immunitaires contenant des neutrophiles et des éosinophiles sont inclus dans l’estimation de l’ICP. Dans cet exemple, l’ICP est de 25 % (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 21 Évaluation des cellules immunitaires 9 : dans ce champ de vision, l’ICP pour la petite quantité de cellules immunitaires dans le coin supérieur droit est de 1 % (10X) Évaluation des cellules immunitaires 10 : l’ICP pour ce champ de vision lorsque les cellules immunitaires sont densément agrégées est de 5 % (10X) 22 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 7.Examiner la lame colorée par PD-L1 et évaluer le pourcentage de cellules immunitaires associées à la tumeur qui présentent une expression de la PD-L1 (IC +), y compris les colorations cytoplasmique diffuse, membranaire linéaire et punctiforme des cellules immunitaires. Évaluation des cellules immunitaires 11 : les cellules immunitaires qui composent l’ICP sont entourées en bleu (image du haut) et peuvent être observées sous forme d’agrégat dense dans l’image du bas. Les cellules immunitaires présentant une coloration par PD-L1 (IC +) sont surlignées en rouge (image du haut) et lorsqu’agrégées, elles représentent 25 % de l’ICP (image du bas) (5X). Veuillez vous référer à l’image H&E associée contenue dans ce guide, « Évaluation des cellules immunitaires 6 ». Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 23 8.Lors de l’évaluation des métastases au niveau des ganglions lymphatiques, le stroma réactif généré par la tumeur est inclus dans la zone tumorale pour déterminer l’ICP. Dans les cas où la tumeur ne génère pas de réponse stromale, la zone tumorale est limitée aux nids tumoraux et aux cellules immunitaires adjacentes en contact direct avec la tumeur uniquement. Toutes les cellules immunitaires faisant partie du tissu lymphoïde non impliqué sont ignorées pour l’estimation de l’ICP. Évaluation des cellules immunitaires 12 : dans cette tumeur métastatique dans un ganglion lymphatique, la zone tumorale contenant des cellules tumorales, du stroma desmoplastique et des cellules immunitaires est entourée en bleu (4X). Un grossissement supérieur montre des cellules immunitaires incluses dans l’ICP au sein du stroma réactif (encart A [20X]). Le long de la périphérie du nodule métastatique, seules les cellules immunitaires immédiatement adjacentes aux cellules tumorales entourées en bleu sont incluses dans l’ICP (encart B [20X]). 9.Seul dans les cas où l’ICP est égal à 1 %, l’IC + est uniquement exprimé comme égal à 0 %, < 100 % ou 100 % en raison de la difficulté de quantifier une si faible quantité de cellules. 10.Si la lame colorée par PD-L1 montre une coloration des cellules immunitaires supérieure à l’ICP estimé initialement à partir de la lame H&E, se reporter à la lame H&E et réviser le pourcentage ICP, le cas échéant. 24 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Atlas d’expression de la PD-L1 dans le carcinome urothélial Cas de cellules tumorales Cas de cellule tumorale 1 : cellules tumorales avec 0 % de coloration, cellules immunitaires avec 0 % de coloration. (IC +) (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 25 Cas de cellule tumorale 2 : cellules tumorales avec 0 % de coloration, cellules immunitaires avec 80 % de coloration. (IC +) (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) 26 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas de cellule tumorale 3 : cellules tumorales avec 10 % de coloration, cellules immunitaires avec 40 % de coloration (IC +) (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 27 Cas de cellule tumorale 4 : cellules tumorales avec 25 % de coloration, cellules immunitaires avec 10 % de coloration (IC +) (10X) 28 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas de cellule tumorale 5 : cellules tumorales avec 50 % de coloration, cellules immunitaires avec 20 % de coloration (IC +) (10X) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 29 Cas de cellule tumorale 6 : cellules tumorales avec 100 % de coloration, cellules immunitaires avec 20 % de coloration. (IC +) (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) 30 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas de cellules immunitaires Cas de cellules immunitaires 1 : cellules immunitaires avec 0 % de coloration (IC +), cellules tumorales avec 0 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 31 Cas de cellules immunitaires 2 : cellules immunitaires avec 10 % de coloration (IC +), cellules tumorales avec 80 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) 32 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas de cellules immunitaires 3 : cellules immunitaires avec 30 % de coloration (IC +), cellules tumorales avec 10 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 33 Cas de cellules immunitaires 4 : cellules immunitaires avec 25% de coloration (IC +), cellules tumorales avec 100% de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) 34 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas de cellules immunitaires 5 : cellules immunitaires avec 40 % de coloration (IC +), cellules tumorales avec 10 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 35 Cas de cellules immunitaires 6 : cellules immunitaires avec 50 % de coloration (IC +), cellules tumorales avec 100 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) 36 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas de cellules immunitaires 7 : cellules immunitaires avec 60 % de coloration (IC +), cellules tumorales avec 0 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 37 Cas de cellules immunitaires 8 : cellules immunitaires avec 90 % de coloration (IC +), cellules tumorales avec 100 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 20X. Rangée inférieure PD-L1 10X.) 38 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas difficiles Une note de PD-L1 est attribuée aux cas en fonction du pourcentage de cellules tumorales présentant une coloration membranaire et de cellules immunitaires associées à la tumeur. Divers profils de coloration et caractéristiques morphologiques peuvent rendre difficiles l’interprétation et la quantification de la coloration membranaire de la tumeur. Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des facteurs suivants : • Faible coloration membranaire des cellules tumorales par opposition à faible coloration cytoplasmique des cellules tumorales Certains échantillons peuvent présenter une faible coloration cytoplasmique des cellules tumorales qui peut être confondue, à faible grossissement, avec une faible coloration membranaire des cellules tumorales. Pour cette raison, lors de l’évaluation des lames colorées par PD-L1 IHC, une coloration faible doit être confirmée par l’examen à un grossissement supérieur afin de distinguer la coloration membranaire de la coloration cytoplasmique dans les cellules tumorales. • Chevauchement d’une forte coloration des cellules immunitaires et de la coloration des cellules tumorales Certaines tumeurs peuvent contenir un élément hautement inflammatoire à la fois autour de la tumeur et infiltrant celle-ci. Dans certains cas, lorsqu’une coloration forte est observée à la fois pour les cellules tumorales et les cellules immunitaires, il peut s’avérer difficile de différencier et de quantifier la coloration par PD-L1 IHC pour ces deux populations de cellules. La présence de cellules immunitaires infiltrant la tumeur doit être confirmée à l’aide d’une lame H&E. Le profil de coloration par PD-L1 ainsi que les caractéristiques nucléaires des cellules sont utilisés pour attribuer une expression aux cellules immunitaires (coloration punctiforme, petit noyau uniforme) et aux cellules tumorales (coloration membranaire linéaire, grand noyau irrégulier). • Cas avec de multiples fragments de tissus Les échantillons de carcinome urothélial résultant de résections transurétrales de la vessie (RTUV) peuvent se traduire par des cas difficiles, compliqués par de multiples fragments de tissu dispersés sur la lame avec des quantités variables de nécrose, d’artefacts de cautérisation/d’écrasement, ou de cellules tumorales ou immunitaires associées à la tumeur viables. Une approche d’examen fragment par fragment avec des estimations du pourcentage de coloration individuelle suivies d’une moyenne globale peut faciliter l’évaluation. • Matériel endogène gênant La présence de matériel endogène, tel qu’un pigment mélanique ou de l’hémosidérine, dans des échantillons de carcinome urothélial peut parfois obscurcir et gêner l’interprétation de la coloration par PD-L1 IHC des cellules tumorales et immunitaires. La comparaison de la lame de contrôle isotype négatif avec la lame colorée PD-L1 peut permettre de différencier la coloration des biomarqueurs du matériel endogène. Une coloration non spécifique peut également être observée sur la lame colorée PD-L1 dans des zones de nécrose. Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages suivantes. • État limite de la PD-L1 (SP263) Certains cas sont près du seuil de coupe entre un état élevé et faible/négatif de la PD-L1. Pour ces cas, il est particulièrement difficile d’estimer le pourcentage de cellules ciblées présentant une coloration. Il peut donc être utile d’examiner ces cas limites avec une amplification permettant d’évaluer l’intégralité de la tumeur. Il peut également être utile de consulter un collègue qualifié. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 39 Cas difficiles : faible coloration membranaire des cellules tumorales par rapport à faible coloration cytoplasmique Cas difficile 1 : la zone entourée en bleu (image 10X de la PD-L1, en haut à droite) contient une faible coloration des cellules tumorales qui est difficile à distinguer. L’examen à un grossissement supérieur (20X) montre qu’il y a une faible coloration membranaire des cellules tumorales éparses. Pour l’image à 10X : cellules tumorales avec 40 % de coloration, cellules immunitaires avec 80 % de coloration. (IC +) (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 10X. Rangée inférieure PD-L1 20X.) 40 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas difficile 2 : les cellules tumorales à coloration membranaire modérée ou supérieure sont facilement identifiées dans la moitié droite de ce champ. L’examen minutieux de la tumeur met en évidence des cellules avec une faible expression membranaire (contours bleus) qui devraient également être comptabilisées lors du calcul du pourcentage total de coloration membranaire. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 41 Cas difficiles : chevauchement d’une forte coloration des cellules immunitaires et de la coloration des cellules tumorales Cas difficile 3 : CT et CI se mélangent, car les deux expriment la PD-L1. Dans les zones à forte coloration des CT, les CI ne peuvent être évaluées que lorsque l’on peut distinguer leur coloration de celle des cellules tumorales. Les différents profils de coloration des CI (profil punctiforme) ainsi que la morphologie nucléaire peuvent être utilisés pour identifier l’expression de la PD-L1. Les contours bleus contiennent des zones avec une coloration des cellules immunitaires perceptible et la zone entourée de vert présente une coloration punctiforme des cellules immunitaires éparses. Cellules tumorales avec 100 % de coloration, cellules immunitaires avec 25 % de coloration (IC +) (Rangée supérieure H&E 10X, PD‑L1 10X. Rangée inférieure PD-L1 20X.) 42 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas difficile 4 : CT et CI mélangées, avec une coloration membranaire des CT plus distincte et des CI difficiles à évaluer et ne pouvant être évaluées que le long de la périphérie de la tumeur. Cellules tumorales avec 100 % de coloration. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 10X. Rangée inférieure PD-L1 20X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 43 Cas difficiles : cas avec de multiples fragments de tissus Cas difficile 5 : échantillon RTUV contenant plusieurs éléments avec artefact d’écrasement, caillot de sang et nécrose qui présente une coloration non spécifique sur la lame HIC (1X). 44 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas difficiles : état limite de la PD-L1 Cas difficile 6 : faible coloration des cellules tumorales observée à un grossissement de 10X, difficulté à distinguer la coloration membranaire de la coloration cytoplasmique. L’examen au grossissement supérieur (20X) met en évidence des cellules tumorales avec 20 % de coloration membraneuse faible et claire. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 45 Cas difficile 7 : expression limite de la PD-L1 des CT avec 25 % de coloration membranaire des cellules tumorales (10X) 46 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas difficile 8 : expression limite de la PD-L1 des CI avec un IC + de 20 % (20X). (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 10X. Rangée inférieure PD-L1 20X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 47 Cas difficiles : Matériel endogène gênant Cas difficile 9 : le cas contient du pigment anthracosique (flèche rouge) qui chevauche la coloration punctiforme des cellules immunitaires (flèche bleue) ainsi que la coloration membranaire des cellules tumorales (flèche noire) (20X). (Rangée supérieure H&E 10X, Rb Nég. 10X.) Rangée inférieure PD-L1 10X.) 48 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Cas difficile 10 : les grandes zones de nécrose peuvent avoir une coloration DAB non spécifique qui peut être confondue avec la coloration des cellules immunitaires. (Rangée supérieure H&E 10X, PD-L1 10X. Rangée inférieure PD-L1 20X.) Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 49 Répercussion des conditions préanalytiques sur la coloration par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Ventana recommande d’effectuer la fixation pendant 6 à 72 heures dans du NBF à 10 %. Les fixateurs acceptables et les temps de fixation sont encadrés en bleu. Coloration du tissu placentaire par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay selon les fixateurs et les temps de fixation Fixateur Point de mesure (h) NBF à 10 % Formol zinc Fixateur PREFER** AFA** Formol alcool** Éthanol à 95 %** 1* 6 12 24 48 72 REMARQUES *Un temps de fixation d’une heure n’est pas recommandé pour tous les types de fixateurs **L’utilisation du fixateur PREFER et d’éthanol à 95 % (coloration plus faible) ou de fixateurs à base d’alcool (coloration de fond élevée) n’est pas recommandée. Voir les images supplémentaires à un grossissement supérieur sur la droite. 50 Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par le test Références Ventana recommande une épaisseur de tissu de 4-5 microns pour une utilisation avec le test. 1. Chalasani V, Chin JL, Izawa JI. Histologic variants of urothelial bladder cancer and nonurothelial histology in bladder cancer. Can Urol Assoc J. 2009;3(6 Suppl 4):S193-198. 2. Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, et al. GLOBOCAN 2012 v1.0. Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11. http://globocan.iarc.fr. Published 2013-12-12. Updated 2014-01-09. Accessed 2014-02-02. 3. American Cancer Society. Cancer Facts & Figures 2015. Atlanta: American Cancer Society; 2015. 4. Howlader N, Noone AM, Krapcho M, et al. (eds). SEER Cancer Statistics Review (CSR),1975-2012. National Cancer Institute. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2012/. Published 2015-04-23. Updated 2015-11-18. Accessed 2016-04-19. 5. Keir ME, Butte MJ, Freeman GJ, et al. PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Annu Rev Immunol 2008;26:677-704. 6. Blank C, Mackensen A. Contribution of the PD-L1/PD-1 pathway to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic infections and tumor evasion. Cancer Immunol Immunother. 2007;56(5):739-745. 7. Butte MJ, Keir ME, Phamduy TB, et al. Programmed death-1 ligand 1 interacts specifically with the B7-1 costimulatory molecule to inhibit T cell responses. Immunity. 2007;27(1):111122. 8. Dong H, Zhu G, Tamada K, Chen L. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat Med. 1999;5(12):1365-1369. 9. Massard C, Gordon MS, Sharma S, et al. Safety and efficacy of durvalumab (MEDI4736), an anti-programmed cell death ligand-1 immune checkpoint inhibitor, in patients with advanced urothelial bladder cancer. J Clin Oncol. 2016; 34(26):3119-25. Stabilité des lames Des coupes d’environ 4-5 microns d’épaisseur doivent être prélevées et montées sur des lames de verre chargées positivement. Les lames doivent être colorées dans les six mois suivant la coupe. 10. Patel SP, Kurzrock R. PD-L1 Expression as a Predictive Biomarker in Cancer Immunotherapy. Mol Cancer Ther. 2015;14(4) 847-856. Guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour la coloration du carcinome urothélial 51 Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany www.ventana.com ©2017 Ventana Medical Systems, Inc. Tous droits réservés. VENTANA, BENCHMARK, OPTIVIEW et le logo VENTANA sont des marques commerciales de Roche. Toutes les autres marques commerciales appartiennent à leurs propriétaires respectifs. 1015882FR Rev A VENTANA Promouvoir | l’innovation ">
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