6. Dépannage
Pour toute question qui ne serait pas traitée ci-dessous, veuillez consulter une succursale ou un distributeur
Promega local. Les coordonnées de ceux-ci sont disponibles au site : www.promega.com.
Adresse électronique : [email protected].
Symptômes
Faible rendement en ADN
ADN dégradé
Causes possibles et commentaires
La résine ReliaPrep™ n’a pas été remise en suspension de façon adéquate avant l’emploi. Resuspendez la résine ReliaPrep™ avec soin dans le flacon de réactif avant de la transférer pour la purification des échantillons.
L’échantillon contenait trop peu de leucocytes par millilitre de sang. Le rendement en ADN dépend du nombre de leucocytes dans le matériel de départ. Les échantillons avec un faible taux en leucocytes présenteront un moindre rendement en raison de la quantité réduite au départ.
Le volume initial de l’échantillon dépasse la capacité de traitement du système. Le ReliaPrep™ Large Volume HT gDNA Isolation System a été optimisé pour purifier de l’ADN à partir de 1 à 10 ml de sang total. Le traitement d’échantillons de sang en dehors de cette plage recommandée peut entraîner une réduction du rendement en ADN et de sa concentration.
Si la limite de 10 ml est dépassée, les volumes de traitement nécessaires seront en excès du volume utile maximal des tubes de 50 ml. Le ReliaPrep™
Large Volume HT gDNA Isolation System a été optimisé pour des
échantillons de sang normaux provenant d’adultes en bonne santé, qui contiennent en général entre 4,5 × 10
6
et 1 × 10
7
leucocytes/ml. Des
échantillons de sang total contenant un taux plus élevé de leucocytes peuvent provoquer une capture plus lente de la résine ReliaPrep™ au cours de la purification, ce qui réduit le rendement.
L’utilisation réussie du ReliaPrep™ Large Volume HT gDNA Isolation
System dépend de l’usage des réactifs appropriés dans l’ordre voulu.
Vérifiez si tous les réactifs ont bien été placés dans la position adéquate de l’appareil et s’ils ont été dilués correctement avant l’emploi.
Des nucléases ont été introduites au cours de la purification ou du maniement. Utilisez des récipients en plastique ou en verre sans nucléases.
Utilisez des cônes à filtre pour toutes les étapes de pipetage. Portez des gants à tout moment. Les nucléases éventuellement introduites après l’élution dégradent l’ADN. Pour protéger l’ADN élué contre les nucléases, sélectionnez l’option d’ajouter du tampon TE concentré à une concentration de 1X dans l’éluat final.
L’ADN était dégradé avant la procédure de purification. Si l’ADN était dégradé avant la purification, l’ADN résultant le sera également.
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Numéro vert aux États-Unis 800-356-9526 · +1-608-274-4330 · Fax +1-608-277-2516
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6. Dépannage (suite)
Symptômes
Résine ReliaPrep™ dans l’éluat final
Médiocre pureté de l’ADN
Message d’erreur de l’appareil
Causes possibles et commentaires
Les solutions concentrées d’ADN peuvent être visqueuses. Il peut être nécessaire de prolonger le temps de capture de la résine ReliaPrep™ pour ces solutions visqueuses. Éliminez la résine résiduelle de l’ADN
élué en effectuant la centrifugation comme indiqué.
Une médiocre pureté de l’ADN, observée par les rapports spectroscopiques ou dans les analyses en aval, est souvent le résultat d’un retrait incomplet du lysat. Tout ajustement physique du système robotique peut influencer l’efficacité du retrait du lysat.
Contactez le service technique à l’adresse [email protected] avant de tenter d’ajuster le système robotique.
Si le système signale un volume insuffisant dans un bac de réactif, vérifiez que le type de bac utilisé est adéquat et ajoutez du réactif au bac.
Si vous observez d’autres erreurs, contactez le service technique de
Promega. Notez le message d’erreur précis et l’heure. Vous aurez besoin des fichiers de rapport détaillés EVOware
®
, enregistrés sous :
C:\ProgramData\Tecan\EVOware\AuditTrail\log. Les fichiers de rapport utilisent la convention de dénomination suivante :
EVO_aaaammjj_hhmmss.log (la date et l’heure correspondent à la création du fichier).
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