3.C. Options d’élution
L’ADN doit être élué à l’aide d’eau sans nucléases (comprise). Les utilisateurs peuvent choisir des volumes d’élution entre 500 et 1 500 µl. L’élution de l’ADN dans un volume bas augmente la concentration de l’ADN purifié, mais réduit le rendement total. Des volumes finaux d’élution inférieurs à 1 ml peuvent entraîner une resuspension incomplète de la résine ReliaPrep™ pour les échantillons de volume élevé, ce qui diminue la performance et augmente la présence de résine résiduelle dans les éluats. Il est possible d’utiliser un volume d’élution proportionnel au volume initial de l’échantillon. Dans ce cas, les échantillons d’un volume initial compris entre
1 et 3 ml seront élués dans 500 µl d’eau, et ceux d’un volume initial de 10 ml seront élués dans 1 500 µl d’eau.
Pour les échantillons d’un volume initial compris entre 3 et 10 ml, le volume d’élution sera ajusté de façon linéaire.
Tous les ADN élués sont transférés du HSM à une plaque intermédiaire à 96 puits profonds. Si vous souhaitez stocker l’ADN dans du tampon TE, le système peut ajouter du Tris-EDTA concentré à la plaque intermédiaire.
Après la centrifugation manuelle, le système peut transférer les échantillons aux récipients finaux. Ces derniers peuvent consister en tubes de 2 ml à bouchons vissés (par ex. Sarstedt Réf. 72.609) ou en une plaque à 96 puits profonds. Si vous choisissez de transférer les échantillons dans des tubes, vous serez invité à placer ceux-ci sur la plateforme suite à l’élution. Au moment de l’installation du système veuillez discuter des récipients finaux requis avec le technicien.
3.D. Quantification et évaluation de l’ADN
La qualité et la concentration de l’ADN peuvent être déterminées de diverses manières, notamment par spectrophotométrie, à l’aide de colorants fluorescents, par électrophorèse sur gel et par PCR quantitative. De nombreux rapports font état du fait que différentes méthodes de quantification de l’ADN donnent souvent des valeurs absolues inégales. Nous vous recommandons d’utiliser une même méthode pour déterminer la qualité et la quantité de l’ADN tout au long de votre procédure (c.-à-d. utiliser une même méthode pour quantifier l’ADN purifié et pour déterminer la quantité d’ADN à utiliser dans vos applications d’aval). Tout au long de ce document, des résultats des méthodes de spectrophotométrie NanoDrop ® et de colorants QuantiFluor™ dsDNA (ADN double-brin) sont présentés.
4. Traitement automatisé
L’appareil Tecan Freedom EVO ® -HSM Workstation offre plusieurs options de traitement des échantillons. Ces options sont contrôlées sur l’interface TouchTools™. Toutes les options décrites à la section 3 sont accessibles à partir de cette interface. Consultez le Manuel technique de l’appareil Tecan Freedom EVO ® -HSM Workstation, n o TM402, pour obtenir les instructions concernant l’interface TouchTools™. Pour assistance complémentaire concernant l’interface de l’utilisateur et les options de traitement, veuillez contacter le service technique de
Promega à l’adresse [email protected].
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