Remarque : pour des renseignements sur les commandes en dehors des États-Unis, adressez-vous à une succursale ou un distributeur Promega local. Les coordonnées de ceux-ci sont disponibles au site :
www.promega.com. Adresse électronique : [email protected].
Conventions de dénomination
Tout au long de ce document, les solutions fournies dans le ReliaPrep™ Large Volume HT gDNA Isolation System
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• sont nommées comme suit :
• Solution de protéinase K (PK) = Solution de protéinase K
Protéase alcaline (Alkaline Protease, APA) = Protéase alcaline
Tampon de lyse cellulaire (Cell Lysis Buffer, CLD) = Tampon de lyse cellulaire
Tampon de liaison (Binding Buffer, BBA) = Tampon de liaison
Tampon de lavage (Wash Buffer, WBA) = Tampon de lavage
Tampon de lavage préparé (Prepared Wash Buffer, WBC) = Tampon de lavage préparé
Remarque : pour Réf. A1751, comportant le Tampon de lavage (WBA), il est nécessaire de préparer ce dernier avant de le charger dans l’appareil, en ajoutant de l’éthanol à 50 % à la bouteille de tampon de lavage (WBA) tel que décrit à la section 4.A. Pour Réf. A2751, comportant le Tampon de lavage préparé (WBC), aucune préparation supplémentaire n’est requise.
3. Avant de commencer
3.A. Types d’échantillons compatibles
Les méthodes présentées dans ce document sont prévues pour le traitement d’un volume de sang total compris entre 1 et 10 ml. Une combinaison quelconque d’échantillons de sang peut être traitée en une procédure, pour autant que le volume de départ soit dans la plage recommandée. Le sang peut être prélevé en présence de la plupart des anticoagulants couramment utilisés. Le sang peut être fraîchement prélevé ou congelé. L’utilisation de sang coagulé n’est pas recommandée, car les caillots peuvent boucher les cônes d’aspiration ou de transfert des
échantillons et peut donner des éluats impurs colorés. Les échantillons doivent pouvoir passer à travers une pipette sérologique standard de 10 ml. Des échantillons de sang ayant été stockés de façon non optimale peuvent
être traités, cependant la quantité et la qualité de l’ADN isolé peuvent être compromises selon les conditions spécifiques. Veuillez contacter le service technique de Promega pour toute question au sujet des types d’échantillons compatibles à l’adresse suivante : [email protected].
3.B. Options de traitement des échantillons
Les échantillons sont traités à l’aide de tubes coniques standard de 50 ml préchargés dans l’appareil HSM. Si vous ne souhaitez pas transférer les échantillons manuellement, le système peut les transférer automatiquement à partir des tubes de récolte sous vide. Le temps de traitement total est prolongé d’environ une heure quand le transfert automatisé des échantillons est sélectionné. Lors du transfert à partir de tubes primaires, le système peut transférer le contenu entier des tubes ou jusqu’à un volume maximum déterminé. Le diamètre des tubes contenant les échantillons peut être de 13 ou 16 mm, mais des tubes d’un seul diamètre doivent être utilisés pour une série d’échantillons donnée. Les échantillons peuvent au besoin être traités à la RNase A (réactif facultatif, acheté séparément).
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