3.D. Quantification et évaluation de l’ADN. Promega A1751, A2751

Vous trouverez ci-dessous de brèves informations sur ReliaPrep Large Volume HT gDNA. Ce système permet l’isolement d’ADN génomique à partir d’échantillons de couches leucocytaires grâce à l’appareil Tecan Freedom EVO®-HSM Workstation. Il offre une flexibilité pour les applications génomiques à haut débit et ajuste automatiquement les réactifs en fonction du volume des échantillons.

PDF Télécharger

Document

3.C. Options d’élution (suite)

Tous les ADN élués sont transférés du HSM à une plaque intermédiaire à 96 puits profonds. Si vous souhaitez stocker l’ADN dans du tampon TE, le système peut ajouter du Tris-EDTA concentré à la plaque intermédiaire.

Après la centrifugation manuelle, le système peut transférer les échantillons aux récipients finaux. Ces derniers peuvent consister en tubes de 2 ml à bouchons vissés (par ex. Sarstedt Réf. 72.609) ou en une plaque à 96 puits profonds. Si vous choisissez de transférer les échantillons dans des tubes, vous serez invité à placer ceux-ci sur la plateforme suite à l’élution. Au moment de l’installation du système veuillez discuter des récipients finaux requis avec le technicien.

3.D. Quantification et évaluation de l’ADN

La qualité et la concentration de l’ADN peuvent être déterminées de diverses manières, notamment par spectrophotométrie, à l’aide de colorants fluorescents, par électrophorèse sur gel et par PCR quantitative.

Des rapports font état du fait que différentes méthodes de quantification de l’ADN donnent souvent des valeurs absolues inégales. Nous vous recommandons d’utiliser une même méthode pour déterminer la qualité et la quantité de l’ADN tout au long de votre procédure (c.-à-d. utiliser une même méthode pour quantifier l’ADN purifié et pour déterminer la quantité d’ADN à utiliser dans vos applications d’aval). Tout au long de ce document, des résultats de la méthode de spectrophotométrie NanoDrop ® sont présentés.

4. Traitement automatisé

L’appareil Tecan Freedom EVO ® -HSM Workstation offre plusieurs options de traitement des échantillons.

Ces options sont contrôlées sur l’interface TouchTools™. Toutes les options décrites à la section 3 sont accessibles sur cette interface. Consultez le Manuel technique de l’appareil Tecan Freedom EVO ® -HSM Workstation, n o TM402, pour obtenir les instructions concernant l’interface TouchTools™. Pour assistance complémentaire concernant l’interface de l’utilisateur et les options de traitement, veuillez contacter le service technique de

Promega à l’adresse [email protected].

4.A. Matériaux supplémentaires

En plus des réactifs fournis par Promega, d’autres matériaux et réactifs doivent être préparés et fournis par l’utilisateur.

moléculaire à de l’eau de qualité biologie moléculaire. Mélanger. Remarque : l’utilisation d’alcool dénaturé contenant du méthanol ou de l’isopropanol peut réduire le rendement en ADN et sa qualité.

bouteille entière de Tampon de lavage (WBA). Bien mélanger avant l’emploi. Remarque : si la configuration de votre kit (Réf. A2751) comporte du Tampon de lavage préparé (WBC), ne pas ajouter d’éthanol avant utilisation.

EP049 · Révisé 8/13

Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA

Numéro vert aux États-Unis 800-356-9526 · +1-608-274-4330 · Fax +1-608-277-2516

www.promega.com

Caractéristiques clés

Automatisation de l'isolement d'ADN
Adapté aux échantillons de couches leucocytaires
Utilisation avec l'appareil Tecan Freedom EVO®-HSM Workstation
Flexibilité pour les volumes d'échantillons
Ajustement automatique des réactifs
Volumes d'élution personnalisables

Questions fréquemment posées

Ce système est prévu pour le traitement d’échantillons de couches leucocytaires préparés à partir de 2,5 à 10 ml de sang total.

L’ADN doit être élué à l’aide d’eau sans nucléases (comprise). Les utilisateurs peuvent choisir des volumes d’élution compris entre 500 et 1 500 µl.

Après l’élution, il vous sera demandé de centrifuger la plaque intermédiaire. Cette étape est nécessaire afin d’éliminer les particules de résines résiduelles présentes dans les éluats.