Conventions de dénomination
Tout au long de ce document, les solutions fournies dans le ReliaPrep™ Large Volume HT gDNA Isolation System
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• sont nommées comme suit :
• Solution de protéinase K (PK) = Solution de protéinase K
Protéase alcaline (Alkaline Protease, APA) = Protéase alcaline
Tampon de lyse cellulaire (Cell Lysis Buffer, CLD) = Tampon de lyse cellulaire
Tampon de liaison (Binding Buffer, BBA) = Tampon de liaison
Tampon de lavage (Wash Buffer, WBA) = Tampon de lavage
Tampon de lavage préparé (Prepared Wash Buffer, WBC) = Tampon de lavage préparé
Remarque : pour Réf. A1751, comportant le Tampon de lavage (WBA), il est nécessaire de préparer ce dernier avant de le charger dans l’appareil, en ajoutant de l’éthanol à 50 % à la bouteille de tampon de lavage (WBA) tel que décrit à la section 4.A. Pour Réf. A2751, comportant le Tampon de lavage préparé (WBC), aucune préparation supplémentaire n’est requise.
3. Avant de commencer
3.A. Types d’échantillons compatibles
Les méthodes présentées dans ce document sont prévues pour le traitement d’échantillons de couches leucocytaires préparés à partir de 2,5 à 10 ml de sang total. Le sang peut être prélevé en présence de la plupart des anticoagulants couramment utilisés. Les échantillons peuvent être frais ou congelés, mais les échantillons de couches leucocytaires doivent être préparés à partir de sang non congelé pour maximiser le rendement en leucocytes. Des échantillons préparés à partir de sang de qualité non optimale peuvent être traités, cependant la quantité et la qualité de l’ADN isolé peuvent être compromises selon les conditions spécifiques. Veuillez contacter le service technique de Promega pour toute question au sujet des types d’échantillons compatibles à l’adresse suivante : [email protected].
3.B. Options de traitement des échantillons
Les échantillons sont traités à l’aide de tubes coniques standard de 50 ml préchargés dans l’appareil HSM. Si vous ne souhaitez pas transférer les échantillons manuellement, le système peut les transférer automatiquement à partir de tubes de 2 ml à bouchons vissés (par ex. Sarstedt Réf. 72.609). Le temps de traitement total est prolongé d’environ 20 minutes quand le transfert automatisé des échantillons est sélectionné. Les échantillons peuvent au besoin être traités à la RNase A (réactif facultatif, acheté séparément).
3.C. Options d’élution
L’ADN doit être élué à l’aide d’eau sans nucléases (comprise). Les utilisateurs peuvent choisir des volumes d’élution compris entre 500 et 1 500 µl. L’élution de l’ADN dans un volume bas augmente la concentration de l’ADN purifié, mais réduit le rendement total. Des volumes finaux d’élution inférieurs à 1 ml peuvent entraîner une resuspension incomplète de la résine ReliaPrep™ pour les échantillons de volume élevé, ce qui diminue la performance et augmente la présence de résine résiduelle dans les éluats.
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