Hitachi Chemical Diagnostics CLA Manuel utilisateur

4 Réactifs/Composants
Kit CLA® de dosage des IgE spécifiques d’allergènes *
A conserver entre 2 et 8°C jusqu’à la date d’expiration. Ne pas
congeler.
Description des composants
FICHE TECHNIQUE POUR
LE KIT CLA® DE DOSAGE DES IgE
SPECIFIQUES D’ALLERGÈNES
Chaque kit de dosaage
de 20 test comprend
Cuves de dosage CLApette
Allergènes spécifiques ou mélange d’allergènes
fixés à des fils de cellulose de façon covalente
20 cuves
Solution concentrée de tampon de lavage
Une fois diluée, cette solution contient
0,01 M de tampon phosphate (PBS),
0,1% de Tween 20, et 0,001%
d’azide de sodium (conservateur)
2 bouteilles de
50mL chacune
Pour utilisation diagnostique in vitro
Doc.No.:0546-FRE
Rev.: 07
1
Utilisation prévue
Anticorps IgE
Une bouteille de 32 mL
Solution bleue contenant un anticorps de chèvre
anti IgE humain conjugué à une enzyme, 0,01 M
de tampon phosphate (PBS) à pH 7,2, des
stabilisateurs de protéines, ainsi que 0,1%
de Proclin® (conservateur).
Le kit CLA® de dosage des IgE spécifiques d’allergènes est un test in vitro
à utiliser pour la détermination semi-quantitative de la concentration en IgE
produits dans le sérum humain, dirigés contre des allergènes déterminés.
2 Résumé et explication du test
L’atopie est un état d’hypersensibilité immunologique induit par une classe
particulière d’anticorps appelés réagines, et identifiées Immunoglobulines E
1, 2
(IgE), dans les années 1960. Lorsqu’ils sont stimulés par un allergène
donné, les lymphocytes B compétents produisent des anticorps IgE contre
cet allergène, un anticorps IgE se lie par son domaine Fc, à des récepteurs
3
présents sur la surface des mastocytes et des basophiles. la fixation
d’allergènes spécifiques sur ces IgE couplées aux cellules va alors induire
la dégranulation de ces cellules et permettre la libération d’amines
vasoactives, et provoquer la contraction de muscles lisses, des
démangeaisons, des boursouflures ainsi que la perte de fluides
extracellulaires à travers les muqueuses. Les manifestations cliniques les
plus courantes de ce mécanisme biologique sont le rhume de foin,
l’asthme, l’eczéma, l’urticaire et le choc anaphylactique. L’évaluation du
taux d’IgE d’un patient contre divers allergènes est important pour le
4, 5
diagnostic et le traitement de l’allergie atopique.
Photo réactif A
Solution contenant
14 -30 mM d’0-aminophthahydrazide (luminol)
Une bouteille de 8 mL
Photoréactif B
Une bouteille de 8 mL
Solution contenant 0,05 M de tampon borate à pH 9,4
Le kit CLA® de dosage des IgE spécifiques d’allergènes est fondé sur une
modification n’utilisant pas d’isotopes de la méthode RAST d’origine, et
permet la détermination simultanée d’un grand nombre d’allergènes
6
spécifiques. Des résultats semi-quantitatifs sont obtenus en utilisant un
système de classification similaire à celui utilisé pour la méthode RAST.
Tous les groupes d’allergènes CLA® incorporent des contrôles internes, qui
permettent d’évaluer le fonctionnement du kit en tenant compte des
liaisons non spécifiques dues au sérum du patient. Le kit CLA® de dosage
des IgE spécifiques d’allergène combine la spécificité et la sensibilité de la
méthode RAST, avec la facilité et la simplicité d’un dosage, sans utilisation
7
d’isotope, de plusieurs allergènes simultanés.
Photoréactif C
Solution contenant
0,0025 M d’éthyle orange
Une bouteille de 8 mL
Photoréactif D
Solution contenant
0,004 M de peroxyde d’hydrogène
Une bouteille de 8 mL
Bouchons en caoutchouc pour cuve de dosage
CLApette (noirs)
A placer en haut des cuves CLApette
44 bouchons
Bouchons en caoutchouc pour cuve de dosage
CLApette (blancs)
A placer en bas des cuves CLApette
44 bouchons
*Disponibles sous différents formats de kit. Pour plus de détails,
contactez votre représentant Hitachi Chemical Diagnostics local.
3 Principe du test
5 Précautions à suivre
®
Le kit CLA de dosage des IgE spécifiques d’allergènes utilise une cuve en
plastique de dosage CLApette® qui permet d’incuber le sérum des patients
simultanément en présence d’un grand nombre d’allergènes spécifiques ou
d’un mélange d’allergènes. Chaque cuve de dosage CLApette contient un
nombre défini de fils de cellulose sur lesquels un allergène spécifique ou un
mélange d’allergènes a été fixé de façon covalente. Chaque cuve de
dosage possède aussi un contrôle négatif (blanc) et un contrôle positif de la
méthode.
Le kit CLA de dosage des IgE spécifiques d’allergène est conçu pour
des diagnostics in vitro.
La solution concentrée de tampon de lavage contient de l’azide de
sodium, comme conservateur. Il a été rapporté que l’azide de sodium
peut interagir avec le plomb et le cuivre des tuyaux de plomberie, et
peut former des composés métaux-azide potentiellement explosifs.
La prudence est donc conseillée lors de l’élimination de ce réactif,
rincer abondamment évier et plomberie afin d’éviter l’accumulation de
8
composé métal-azide.
Ne pas utiliser les composants du kit après la date d’expiration
indiquée et imprimée sur chacun des composants.
Les réactifs présents dans les kits CLA de dosage des IgE
spécifiques d’allergène forment un tout. Ne pas mélanger ces
réactifs avec des réactifs provenant d’autres kits.
Toute contamination par de l’eau de javel peut interférer avec le
dosage.
Le test CLA® des IgE spécifiques d’allergènes est réalisé en plaçant le
sérum du patient dans une cuve de dosage. Au cours de cette incubation,
les IgE du sérum se lient aux allergènes couplés aux fils de cellulose. La
cuve de dosage est ensuite lavée avec du tampon afin d’éliminer tous les
composants du sérum non liés. Un anticorps anti IgE couplé à une enzyme
est ensuite ajouté dans la cuve de dosage, et se lie aux IgE du sérum
fixées sur le fil. Après un second lavage, la cuve de dosage est remplie
d’une solution de photo réactifs qui réagit avec l’anticorps couplé à
l’enzyme afin de produire une réaction de chimiluminescence. La quantité
de lumière émise par chaque fil est directement proportionnelle à la
quantité d’IgE spécifique de l’allergène présente dans le sérum du patient.
1
1.
6 Préparation des Réactifs
2.
Tampon de Lavage:
•
•
•
•
3.
4.
Laisser la solution concentrée de tampon de lavage revenir à température
ambiante. Vérifier que tout cristal de sel est dissout. Si des cristaux persistent,
placer la bouteille (bien vissée) de solution concentrée de tampon de lavage
dans un bêcher contenant de l’eau chaude, jusqu’à ce que tous les cristaux
soient dissous.
Rincer le distributeur de tampon de lavage ainsi que le tube avec de l’eau
distillée.
Bien mélanger la solution concentrée de tampon de lavage en inversant
doucement la bouteille plusieurs fois.
Dans une éprouvette graduée ou un flacon de 1 L, mélanger-le contenu de la
bouteille de solution concentrée de tampon de lavage (50 mL) avec 950 mL
d’eau distillée ou dé ionisée. Bien mélanger.
Transférer cette solution dans le distributeur de tampon de lavage.
Une fois préparée et stockée à température ambiante (20-25°C) ou réfrigérée
(2-8°C), cette solution peut être utilisée pendant un mois,
REMARQUE: Les cycles répétés de congélation/décongélation doivent être
évités. Les échantillons qui ont été décongelés doivent être bien mélangés
avant centrifugation.
9 Étapes à suivre pour le dosage
Pour obtenir des instructions détaillées pour réaliser ce test, se référer au Manuel
d’utilisation du Luminomètre CLA
Matériel fourni
• Kit CLA de dosage des IgE spécifiques d’allergène (voir paragraphe 4,
REACTIFS/COMPOSANTS)
Solution d’anticorps:
•
•
•
Matériel nécessaire non fourni dans le Kit réactifs
•
Kit Équipement CLA, comprenant:
- Portoir de lavage, pouvant contenir jusqu’à 40 cuves de dosage
- Un réservoir de lavage
- Une bouteille de lavage et son piston
- Une micro pipette et des cônes
- Des récipients jetables, de 50 mL
- Une seringue de 3 CC
•
Une éprouvette graduée ou un flacon de 1 L, afin de préparer du tampon de
lavage
•
De l’eau distillée ou dé ionisée
•
Des tubes pour la collecte des échantillons
•
Une centrifugeuse pouvant tourner à 2000-3000 x g ou 2500-3600 rpm
•
Des tubes de stockage en plastique propre, nécessaires à la préparation des
échantillons
•
Du papier absorbant
•
Des mouchoirs propres ne contenant pas de coton
•
Un luminomètre CLA-1
Laisser revenir la solution d’anticorps à température ambiante.
Inverser doucement la solution d’anticorps avant utilisation.
Si elle n’est pas utilisée, la solution d’anticorps réfrigérée (2-8°C) peut être
utilisée jusqu’à la date d’expiration du kit.
REMARQUE: Une bouteille de solution d‘anticorps suffit pour vingt (20)
cuves de dosage contenant 30 allergènes par cuve et 2 contrôles.
Mélange Photo réactif:
Préparer le mélange photo réactif juste avant utilisation.
•
•
Laisser les composés photo réactifs A, B, C, D revenir à température
ambiante.
Dans un récipient, mélanger des volumes égaux de composé photo réactif A,
B, C et D avec une micro pipette à cône jetable. Il faut un volume minimal de
350 μL de chaque composé photo réactif par cuve de dosage, soit au total
1.4 mL par cuve de dosage.
REMARQUE: Afin d’éviter toute contamination des réactifs, utiliser un
nouveau cône jetable pour chacun des composés photo réactifs.
•
Préparation des cuves de dosage et des échantillons des patients
1.
Avant utilisation, centrifuger à nouveau les échantillons de patients pendant 10
à 20 minutes à 2000-3000 x g ou 2500-3600 rpm.
Remuer doucement le récipient afin de mélanger la solution.
REMARQUE: Le frein de la centrifugeuse pourrait déloger le culot, et
augmenter le bruit de fond et produire des résultats erronés. Éteindre le frein
avant de centrifuger les échantillons
REMARQUE: Le mélange photo réactif doit être utilisé dans les 60
minutes qui suivent le mélange.
7
•
•
•
•
8
Laisser le sang coaguler pendant 1 heure à 2 heures à température
ambiante.
Centrifuger le sang coagulé pendant 10 à 20 minutes à 2000-3000 x g ou
2500-3600 rpm.
Transférer le sérum dans un tube en plastique propre marqué de stockage.
Les échantillons de sérum stockés entre 2 et 8°C peuvent être conservés
pendant une semaine au maximum. Au-delà de cette période, les conserver
congeler à -20°C.
2.
Instructions pour le stockage
Conserver les composants du kit entre 2 et 8°C. S’ils sont stockés
correctement, ces composés peuvent être utilisés jusqu’à la date d’expiration
imprimée sur l’étiquette de chaque réactif.
Ne pas congeler les composants du kit.
Les cuves de dosage sont stockées dans un sac en plastique contenant une
éponge humide. S’assurer que le sac en plastique est refermé proprement
avant et après chaque utilisation. Si l’éponge s’assèche, l’humidifier à nouveau
avec du tampon de lavage, puis refermer le sac en plastique. Ces cuves de
dosage peuvent être utilisées jusqu’à la date d’expiration du kit si elles sont
conservées entre 2 et 8°C.
S’il existe des signes de détérioration, ne pas utiliser le kit. Les signes de
détérioration incluent une odeur inhabituelle, une apparence turbide ou tout
autre signe de contamination.
3.
4.
5.
6.
Sortir du sac en plastique les cuves de dosage nécessaires (une par
échantillon). Refermer le sac et remettre les cuves non utilisées dans le
réfrigérateur.
Essuyer l’humidité à l’extérieur de chaque cuve de dosage.
Indiquer le numéro d’identification du patient sur chacune des cuves de dosage,
en orientant la grille colorée vers le bas.
Noter les numéros de lot des kits, des groupes d’antigènes, ainsi que le numéro
d’identification des patients
Tapoter doucement l’extrémité de la cuve de dosage sur un papier absorbant
afin d’éliminer tout résidu de liquide.
Méthode Standard
A. Remplir les cuves de dosage avec du sérum:
1.
Attacher la seringue de 3 cc sur le haut de la cuve de dosage.
2.
Insérer la partie basse de la cuve de dosage dans un tube contenant du
sérum de patient. Éviter tout précipité et/ou couches de lipides.
3.
A l’aide de la seringue, aspirer lentement le sérum afin de remplir
complètement la cuve de dosage. S’assurer que le filament supérieur
est complètement couvert par du sérum et qu’aucune bulle ne se soit
formée dans la cuve de dosage.
B. Boucher et incuber les cuves de dosage:
1.
Sans ôter la seringue, insérer un bouchon blanc sur la partie inférieure de
la cuve de lavage.
2.
Enlever la seringue et placer un bouchon noir sur le haut de la cuve de
dosage.
Collecte et Préparation des Échantillons
Manipuler les échantillons provenant de patients, ainsi que les composants du kit
selon les précautions prescrites pour tout échantillon de sérum humain ou de sang
pouvant contenir un agent infectieux. Au cours de la manipulation des échantillons
provenant de patients, suivre les précautions d’usage ou celles suggérées par votre
institution.9-11
Le volume minimal de sérum humain nécessaire, sans utilisation d’agitateur rotatif,
par cuve de dosage individuelle est le suivant:
REMARQUE: insérer les bouchons à fond afin d’éviter toute fuite.
3.
Placer les cuves de dosage remplies de sérum verticalement sur le portoir
de lavage.
4.
Laisser incuber à température ambiante pendant 16 à 24 heures, Noter
l’heure du début de l’incubation.
Une cuve de dosage contenant 30 allergènes, 1,5 mL de sérum
Protocole à suivre pour la collecte, la préparation et le stockage du sérum à utiliser
dans le test CLA:
C. Préparer le tampon de lavage en suivant les instructions décrites dans le
paragraphe 6, PREPARATION DES REACTIFS.
Prélever un échantillon de sang veineux dans un tube de séparation du sérum de
10 mL ou un tube à bouchon rouge. Le patient n’a pas besoin d’être à jeûn. Aucune
préparation spéciale n’est nécessaire.
D. Élimination du Sérum:
1.
Enlever le bouchon blanc de la cuve de dosage, remettre la cuve de
dosage sur le portoir de lavage.
2.
Enlever le bouchon noir de la cuve de dosage de façon à éliminer le sérum
dans le réservoir de lavage. Noter l’heure du début D’arrêt de l’incubation.
REMARQUE: Un sérum hémolysé ou contenant des lipides peut avoir un effet
adverse sur l’efficacité du kit CLA de dosage des IgE spécifiques d’allergène.
2
E. Lavage des cuves de dosage:
1.
Amorcer le distributeur de tampon de lavage afin d’éliminer toute bulle
d’air.
2.
Adapter la tubulure du distributeur sur l’extrémité supérieure de la
première cuve de dosage.
3.
Laver successivement chaque cuve de dosage une fois avec 10 mL de
tampon de lavage en pressant une fois modérément sur le piston.
laboratoire doit dés lors déterminer si cette méthode alternative convient à
ses besoins spécifiques.13
Cette méthode nécessite l’utilisation de l’agitateur rotatif CLA
Préparer les cuves de dosage et les échantillons de patients comme décrit dans les
étapes 9.1 à 9.6
A.
Remplir la cuve de dosage avec du sérum:
1.
Adapter une seringue de 3 ml sur l’extrémité supérieure de la cuve de
dosage et un cône propre sur l’extrémité inférieure de la cuve
2.
Plonger le cône précédemment fixé dans un tube contenant du sérum de
patient. Éviter de prélever tout précipité et/ou couches lipidiques.
3.
Aspirer lentement 750 µl de sérum afin de remplir la moitié de la cuve de
dosage.
REMARQUE: Abaisser le piston de la seringue avant d’insérer l’extrémité
de la cuve de dosage dans les échantillons de sérum. L’injection d’air dans
le sérum peut provoquer un remous des précipités présents au fond des
tubes d’échantillons
4.
Ne pas ôter la seringue
REMARQUE: Laisser chaque cuve de dosage se vider complètement avant
de passer à l’étape suivante.
4.
Répéter l’étape précédente deux fois, afin d’effectuer au total un nombre
de trois lavages pour chaque cuve de dosage.
REMARQUE: Afin d’éviter que les filaments ne sèchent, les cuves de
dosage doivent être remplies immédiatement avec la solution d’anticorps
après ces lavages.
F.
Remplir les cuves de dosage avec la solution d’anticorps:
1.
Tapoter doucement la partie inférieure de la cuve de dosage sur du papier
absorbant, afin d’éliminer toute trace de tampon de lavage.
1.
Adapter une seringue de 3 ml sur l’extrémité supérieure de la cuve de
dosage et un cône propre à l’extrémité inférieure de la cuve de dosage.
3.
Plonger l’extrémité inférieure de la cuve de dosage dans un récipient à
usage unique contenant la solution d’anticorps nécessaire.
4.
A l’aide de la seringue, aspirer lentement la solution d’anticorps, sans
former de bulle, afin de remplir complètement la cuve de dosage. Le
filament supérieur doit être recouvert de solution d’anticorps.
B.
1.
2.
3.
G. Boucher et incuber les cuves de dosage:
1.
Ne pas ôter la seringue
2.
Boucher l’extrémité inférieure de la cuve de dosage avec un bouchon
blanc.
3.
Enlever la seringue et insérer le bouchon noir sur l’extrémité supérieure de
la cuve de dosage.
4.
Garder ces cuves de dosage verticalement, sur le portoir de lavage.
Incuber à température ambiante pendant 4 heures ± 15 minutes, noter
l’heure du début de l’incubation.
4.
5.
6.
7.
H. Éliminer la solution d’anticorps:
1.
Enlever le bouchon blanc de chaque cuve de dosage, replacer chacune de
ces cuves sur le portoir de lavage.
2.
Enlever le bouchon noir de chaque cuve de dosage, de façon à éliminer le
liquide dans le réservoir de lavage. Ne pas jeter les bouchons. Noter
l’heure de la fin de l’incubation.
Laver les cuves de dosage trois (3) fois tel qu’indiqué dans le paragraphe
9.E
J.
Préparer le mélange photo réactif comme indiqué dans le paragraphe 6,
PREPARATION DES REACTIFS.
Remarque: Ne pas faire tourner les cuves de dosage durant l’incubation avec
la solution d’anticorps et le mélange photo réactifs
10 Contrôle de Qualité
K. Remplir les cuves de dosage avec le mélange photo réactif:
2.
3.
4.
5.
L.
Faire pivoter la cuve de dosage afin d’imprégner tous les filaments avec du
sérum, et tapoter doucement l’une des extrémités bouchées plusieurs fois
jusqu’à ce que le sérum s’écoule à l’autre extrémité de la cuve de dosage.
Répéter l’opération jusqu’à l’assurance d’un écoulement fluide d’une
extrémité à l’autre de la cuve de dosage.
Placer les cuves de dosage sur l’agitateur rotatif CLA et allumer l’agitateur
rotatif.
Faire tourner les échantillons 16 à 24 H à Température ambiante
Noter l’heure de début d’incubation des sérums.
Veiller à l’écoulement régulier du sérum dans chacune des cuves de
dosage. Si le sérum ne s’écoule pas facilement d’une extrémité à l’autre
d’une cuve de dosage
a. Arrêter l’agitateur rotatif, enlever la cuve de dosage en question, la
tapoter doucement sur la paillasse.
b. Remettre la cuve de dosage sur l’agitateur rotatif.
c. Allumer l’agitateur rotatif et observer à nouveau le flux du sérum dans
chaque cuve de dosage.
d. Recommencer l’opération si nécessaire.
C à N Suivre le protocole indiqué dans la méthode standard.
REMARQUE: Afin d’éviter que les filaments ne sèchent, remplir
immédiatement les cuve de dosage avec du mélange photo réactif après le
dernier lavage.
1.
Insérer un bouchon blanc à l’extrémité inférieure de la cuve de dosage.
Retirer la seringue de 3 ml et insérer un bouchon noir sur l’extrémité
supérieure de la cuve de dosage.
REMARQUE: Les bouchons doivent être insérés fermement afin d’éviter
toute fuite.
REMARQUE: S’assurer que le fil supérieur est recouvert par la solution
d’anticorps. Ceci diminuera les risques de formation de bulles d’air, qui
pourraient affecter les résultats du test.
I.
Boucher les cuves de dosage, les placer sur l’agitateur rotatif CLA et
faire tourner:
A. Fils de contrôle interne
Chaque cuve de dosage possède un contrôle positif et un contrôle négatif. Ces
filaments servent de contrôles internes pour chaque cuve de dosage.
Tapoter doucement la partie inférieure de la cuve de dosage sur du papier
absorbant, afin d’éliminer toute trace de tampon de lavage
Adapter une seringue de 3 ml sur l’extrémité supérieure de la cuve de
dosage.
Plonger l’extrémité inférieure de la cuve de dosage dans le mélange photo
réactif contenu dans un récipient à usage unique.
A l’aide de la seringue, aspirer lentement le mélange photo réactif, sans
former de bulle, afin de remplir complètement la cuve de dosage. Le filament
supérieur doit être recouvert par du mélange photo réactif
Noter l’heure du début de l’incubation
Contrôle positif: celui-ci permet de vérifier le bon fonctionnement des réactifs du
kit. Ce contrôle devrait produire une valeur supérieure ou égale à 243 en LUs.
Contrôle négatif: celui-ci permet d’éliminer toute valeur correspondant à liaison
non spécifique des IgE. Ce contrôle devrait produire des valeurs inférieures à 33 en
LUs.
Résultats de contrôles internes non validés
Si les résultats pour les contrôles internes ne sont pas dans les limites des valeurs
indiquées ci-dessus, alors replacer la cuve de dosage dans la cassette (s’assurer
que la cuve de dosage est insérée proprement) et refaire une lecture.
Boucher les cuves de dosage:
1. Ne pas ôter la seringue
2. Insérer le bouchon blanc sur la partie inférieure de la cuve de dosage.
3. Enlever la seringue et insérer le bouchon noir sur la partie supérieure de la
cuve de dosage.
4. Vérifier que la cuve de dosage ne fuit pas.
5. Essuyer tout mélange photo réactif qui pourrait contaminer l’extérieur de la
cuve de dosage, avec un mouchoir propre, humide, ne contenant pas de
coton.
Si les résultats ne sont toujours pas acceptables, appeler l’assistance technique de
votre fournisseur local.
B. Sérums positifs et négatifs pour les IgE
Hitachi Chemical Diagnostics recommande que chaque nouveau lot de kit CLA de
dosage des IgE spécifiques d’allergène ainsi que les cuves de dosage sont testées
avec deux sérums contrôles: le sérum CLA positif pour les IgE et le sérum CLA
négatif pour les IgE. Pour toute instruction concernant leur utilisation, ainsi que les
valeurs à obtenir, se référer à la fiche technique du kit CLA contenant les sérums
positifs et négatifs pour les IgE. Certaines institutions peuvent avoir besoin d’utiliser
ces sérums contrôle plus fréquemment. Pour plus de détails, vérifier avec votre
institution.
M. Laisser incuber les cuves de dosage pendant 20 minutes avant la lecture
au luminomètre. Toutes les cuves de dosage doivent être lues dans les 60
minutes qui suivent l’addition du mélange photo réactif dans la cuve de
dosage.
N. Pour la lecture des résultats, se référer au Manuel d’utilisation du
luminomètre CLA.
11
Résultats
Le luminomètre CLA-1 mesure la quantité de lumière émise par les fils dans les
chambres de test. Cet appareil mesure l’émission de lumière en unités de
luminescence (LUs). Pour calculer la réponse IgE des patients, cet instrument
soustrait automatiquement les valeurs d’émission données par le contrôle interne
négatif des valeurs émises par chaque filament. Des valeurs de classe allant de 0 à
Méthode alternative
Remarque :Il a été démontré lors d'études internes que la sensibilité du
dosage obtenue avec la technique utilisant un agitateur rotatif peut être
diminuée lorsque comparée à la sensibilité de la technique standard . Chaque
3
Remarque: Il n’existe pas d’allergène spécifique témoin pour comparer ces
méthodes biologiques in vitro.
4 ont été déterminées en mesurant la quantité de lumière émise par chaque
filament dans une cuve de dosage. Ces valeurs constituent le système d’évaluation
de classe d’allergie pour le kit CLA de dosage des IgE spécifiques d’allergène. Les
quantités en IgE correspondant à chaque valeur de classe ainsi que les valeurs
correspondant au luminomètre sont indiquées dans le tableau ci-dessous.
15 Bibliographie
Classe CLA
LUs nets
Concentration en IgE induit par allergène
défini
4
3
2
1
1/0
0
>242
143-242
66-142
27-65
12-26
0-11
Concentration très importante
Concentration élevée
Concentration moyenne
Concentration faible
Non significatif
absence
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Des valeurs de classe CLA de 1/0 et plus représentent une augmentation
progressive des concentrations d’anticorps spécifiques d’un antigène. La valeur 0
indique l’absence ou des taux non détectables d’anticorps spécifiques d’allergènes.
9.
12 Limites de la Méthode
•
•
•
•
•
•
•
•
10.
Un sérum hémolysé ou contenant des lipides peut affecter l’efficacité du kit
CLA de dosage des IgE spécifiques d’allergène.
Un diagnostic clinique et/ou un traitement immunothérapeutique ne devrait pas
uniquement se baser sur les résultats d’un seul test. Mais doit être fait par un
médecin après évaluation de toutes les données cliniques et des résultats de
laboratoire.
Le kit CLA de dosage des IgE spécifiques d’un allergène donné produit des
résultats semi-quantitatifs. Cette méthode n’a pas de référence absolue. Des
valeurs de classe ont été arbitrairement assignées.
Parce que la capacité d’interaction d’un anticorps IgE avec un allergène peut
varier d’un allergène à un autre, une classification similaire pour différents
allergènes ne signifie pas obligatoirement une équivalence clinique.
Lorsque des allergies alimentaires sont testées, les IgE circulantes peuvent ne
pas être détectées si elles reconnaissent des allergènes dénaturés (cuits,
transformés, digérés). Ces formes dénaturées ne sont pas présentes sous la
même structure que les allergènes alimentaires utilisés dans ce test particulier.
Un faux résultat positif chez des personnes testées pour des allergies
alimentaires pourrait les conduire à suivre un régime alimentaire inapproprié.
Un résultat négatif chez une personne sensible à certains aliments pourrait
conduire à un choc anaphylactique aux conséquences plus ou moins graves.
Un fort taux d’IgE totale (supérieur ou égal à 500 IU/mL) peut donner des
résultats d’IgE spécifiques, faiblement ou fortement positifs sur tous les
filaments. Il conviendra d’interpréter ces résultats avec précaution.
Des résultats fiables et reproductibles seront obtenus si le test est réalisé en
respectant parfaitement les instructions d’utilisation du produit et les procédures
de contrôle de bonne qualité.
L’eau de javel interfère avec le dosage. Toute vaisselle contaminée doit être
abondamment lavée avec de l’eau distillée ou dé ionisée.
11.
12.
Ishizaka K, Ishizaka T, Hornbrook MM. J Immunol 1966;97:75.
Johansson SGO, Bennich H. Immunol 1967;13:381.
Kulczycki A. J Allergy Clin Immunol 1981;68:5.
Johansson SGO, Bennich HH, Berg T.Prog Clin Immunol 1972;1:157.
Homburger HA. CRC Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences
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Miller SP, Marinkovich VA, Riege DH, Sell WJ, et al. Clin Chem
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Agata H, et col. Ann Allergy 1993;70:153.
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Richardson SH, Barkley WE, eds. Biosafety in microbiological and
biomedical laboratories. 2nd ed. Washington, DC: US Dept of Health and
Human Services, 1988.
Federal OSHA Standard 1910.1030. Bloodborne pathogens. 29 CFR
1910.1030.
Résultats sont fournis selon demande.
Pour toute assistance technique, veuillez contacter Hitachi Chemical
Diagnostics. En dehors des États-Unis veuillez contacter votre
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Maidenhead, Berkshire SL6 8YA
United Kingdom
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Fax. +44 (0) 1628 585 594
Distribué par:
BMD (Biomedical Diagnostics)
B.P. 103
77423 Marne-la-Vallée cedex 2 –France
Téléphone :(33) 1 64 62 10 12
Télécopie :(33) 1 64 62 09 66
REMARQUE: L’utilisation de solutions à base d’alcool pour désinfecter la
paillasse provoque des fissures du plastique des cuves de dosage et les
dégradent prématurément.
©2011, Hitachi Chemical Diagnostics, Inc.
CLA est une marque de fabrication enregistrée par Hitachi Chemical Diagnostics, Inc.
Fabriqué aux États-Unis sous un ou plusieurs brevets ayant pour numéro: 3,941,876, 4,031,197,
4,459,360 (ainsi que sous des brevets correspondants issus au Canada, en Australie, au Japon, en
Espagne, en France, en Allemagne, en Italie, en Suède, et en Grande-Bretagne), 4,510,393,
4,558,013, 5,567,149 (ainsi que sous des brevets correspondants issus au Canada, en Australie,
au Japon, en Espagne, en France, en Allemagne, en Italie, en Suède, en Suisse, en Autriche, en
Belgique, en Hollande, au Luxembourg, et en Grande-Bretagne), 4,568,184, 285,485, 4,743,541
(ainsi que sous des brevets correspondants issus au Canada, en Australie, au Japon, en France,
en Allemagne, en Suède, en Suisse, et en Grande-Bretagne), et 5,082,768 (ainsi qu’un brevet
correspondant au Japon).
13 Valeurs Attendues
A l’origine, les classes CLA ont été déterminées par des études scientifiques ayant
pour but d’établir des courbes étalons en utilisant un sérum contenant des anticorps
IgE spécifiques contre le bouleau blanc. La limite entre les résultats négatifs et
positifs a été établie de façon statistique comme deux déviations standard audessus de la valeur moyenne de la population normale. 6
Il est recommandé que chaque laboratoire définisse ses propres valeurs de
référence sur la population qui les intéresse.
14 Performance de la Méthode Standard
A. Precision12
Inter-test: Cinq réplications de 4 échantillons de sérums s ont été analysées en une
fois. La valeur moyenne du coefficient de variation des réponses à tous les
allergènes analysés, calculé en Lus nets, est de 11.7%.
Inter-test: Cinq réplications de 4 échantillons de sérums ont été analysées sur
quatre jours différents. La valeur moyenne du coefficient de variation des réponses
à tous les allergènes analysés, calculé en Lus nets, est de 11.6%.
B. Sensibilité12
La limite de détection du dosage est de 10 LUs.
C. Spécificité12
Dans le sérum humain, à des niveaux physiologiques normaux, il n’y a pas de
réaction croisée détectable avec les immunoglobulines IgA, IgM, IgG, ou IgD.
D. Comparaison des méthodes In Vitro de détection d’allergie12
En moyenne, la similitude (calculée en pourcentage d’efficacité) entre le kit
CLA et d’autres kits de dosage In Vitro est de 95%; ces valeurs varient entre
86% et 100%.
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