Biokar diagnostics BK107 Manuel utilisateur

Bouillon de MacCONKEY
DOMAINE D’UTILISATION
Le bouillon de MacConkey est utilisé comme milieu présomptif de détection des bactéries coliformes
dans l’eau, le lait et les produits de la mer (huîtres).
HISTORIQUE
Le bouillon de MacConkey constitue une modification de la formule du milieu décrit originellement
par MacConkey en 1901. Celui-ci contenait du taurocholate de sodium comme agent inhibiteur et du
tournesol comme indicateur. En 1905, MacConkey suggéra l’emploi du rouge neutre au lieu
d’indicateur au tournesol. Ultérieurement, Childs et Allen démontrèrent l’effet inhibiteur du rouge
neutre et lui ont substitué l’emploi de pourpre de bromocrésol, moins inhibiteur.
PRINCIPES
- La présence de bile purifiée inhibe la croissance des microorganismes à Gram positif.
- La fermentation du lactose par les coliformes est mise en évidence par l’acidification du milieu
qui provoque le virage au jaune de l’indicateur pH (pourpre de bromocrésol), ainsi que par la
production de gaz dans les cloches de Durham.
PREPARATION
Milieu simple concentration
- Mettre en solution 35,0 g de milieu déshydraté (BK107) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Agiter lentement jusqu’à dissolution complète.
- Répartir en tubes munis d’une cloche de Durham.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
- Après refroidissement, les cloches de Durham ne doivent pas contenir d’air.
Milieu double concentration
- Mettre en solution 70,0 g de milieu déshydraté (BK107) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Agiter lentement jusqu’à dissolution complète.
- Répartir en tubes 20 x 200 mm (sans cloche de Durham) à raison de 10 mL par tube.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
MODE D’EMPLOI
Milieu simple concentration
- Ensemencer les tubes avec 1 mL d'inoculum et de ses dilutions décimales successives.
Milieu double concentration
- Ensemencer les tubes avec 10 mL d’inoculum.
- Recouvrir d’un bouchon de gélose stérile (Agar bactériologique type E A1012) préalablement
maintenue à 44-47°C.
Incubation
- Pour les coliformes, incuber pendant 24 heures à 30 ou 37°C suivant le protocole analytique à
respecter.
- Pour les coliformes thermotolérants, incuber 24 heures à 44,5°C.
- A partir des tubes à double concentration, transférer une öse bouclée de culture dans un tube à
simple concentration et incuber à nouveau pendant 24 heures avant d’effectuer la lecture.
LECTURE
La fermentation du lactose qui se traduit par l’apparition de gaz dans les cloches de Durham
(volume au minimum égal au 1/10ème du volume de la cloche) en 24 heures, indique le présence
de coliformes. L’identification des germes peut être pratiquée à partir des tubes gazogènes au
moyen de subcultures sur des milieux gélosés appropriés : gélose lactosée au BCP (BK023) ou
gélose EMB (Levine) (BK056).
FORMULE-TYPE
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone .......................................................................................20,00 g
- Bile de boeuf bactériologique.........................................................5,00 g
- Lactose ........................................................................................10,00 g
- Pourpre de bromocrésol.................................................................0,01 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,3 ± 0,2.
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CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre beige à beige vert, fluide et homogène.
- Milieu préparé : solution violacée, limpide.
- Réponse culturale typique après 48 heures d’incubation à 30°C :
Microorganismes
(1)
Escherichia coli
(1)
Citrobacter freundii
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
(1)
ATCC® 25922
ATCC 43864
ATCC 29212
ATCC 25923
Croissance
Production de gaz
bonne, score 2
bonne, score 2
partiellement inhibée,
score 0-1
inhibée, score 0
positive
positive
négative
inoculum <102 microorganismes.
STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu déshydraté : 2-30°C.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu préparé en tubes ou en flacons : 6 mois à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre indicatif).
PRESENTATION
Code
Milieu déshydraté :
- Flacon de 500 g
BK107HA
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
McCONKEY, A. and HILL, C.A... 1901. Bile salt broth. Thompson-Yates Laboratories Report VI/1.
McCONKEY, A.. 1905. Lactose fermenting bacteria in feces Journal of Hygiene, 5 : 333-379.
McCONKEY, A.. 1908. Bile salt media and their advantages in some bacteriological examinations. Journal of Hygiene, 8 :
322-334.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
Pharmacopée Européenne 5.6. 01/2007:20613. 2.6.13. Contrôle microbiologique des produits non stériles : Recherche de
microorganismes spécifiés. Solution et milieux de culture recommandés, 4679-4682.
United States Pharmacopeia 30. 2007. Microbiological Tests / Microbiological Examination. Recommended Solutions and
Culture Media, 96-97.
Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-10.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK107/F/2003-01 : 4.
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