Biokar CT-SMAC Manuel utilisateur

Gélose MacCONKEY Sorbitol (CT-SMAC base)
DOMAINE D’UTILISATION
La gélose MacCONKEY Sorbitol (CT-SMAC) est un milieu sélectif utilisé pour l’isolement et la
différenciation du sérotype O157:H7 d’Escherichia coli à partir de l’eau, du lait, de la viande de bœuf
et des autres produits alimentaires.
HISTORIQUE
Le sérotype O157:H7 d’Escherichia coli est un sérotype pathogène, identifié pour la première fois en
1982, comme agent responsable de colites hémorragiques. L’alimentation d’origine animale est la
source principale de contamination humaine. La viande de bœuf, de porc, les volailles et certains
produits laitiers non pasteurisés ont été incriminés dans les toxi-infections à Escherichia coli
O157:H7. Ce microorganisme a également été isolé à partir de pommes de terre, de cidre et d’eau du
robinet.
En 1985, Farmer et Davis confirment les travaux de Wells et al. (1983), en démontrant que le
sérotype O157:H7 se caractérise par son incapacité à fermenter le sorbitol, alors que 80% des
souches d’Escherichia coli sont sorbitol-positifs. En 1986, March et Ratnam soulignent l’intérêt de
l’utilisation de la gélose MacCONKEY-Sorbitol pour la détection des colonies d’Escherichia coli
O157:H7. En 1991, Chapman introduit l’utilisation du céfixime pour inhiber les Proteus. En 1993,
Zadik combine l’action du tellurite de potassium au céfixime. L’addition de ces composés dans la
gélose, augmente la fréquence de détection des colonies d’Escherichia coli O157:H7, en éliminant de
manière importante les microorganismes de la microflore secondaire.
PRINCIPES
- La polypeptone favorise la croissance des Escherichia coli O157:H7.
- Les microorganismes sorbitol-négatifs (notamment O157:H7) présentent des colonies incolores.
- Les microorganismes capables de fermenter le sorbitol sont mis en évidence par le virage au
rouge du rouge neutre.
- La microflore secondaire est inhibée par l’association entre les sels biliaires, le cristal violet, le
céfixime et le tellurite de potassium.
PREPARATION
- Mettre en suspension 50,0 g de milieu déshydraté de base (BK147) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps
nécessaire à sa dissolution.
- Répartir en flacons, à raison de 100 mL par flacon.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
NOTA :
Une liquéfaction partielle de l’agar entraînera inévitablement une altération significative de la
consistance du gel du milieu solidifié, après stérilisation et refroidissement.
MODE D’EMPLOI
Faire fondre le milieu (s’il est préparé à l’avance).
Refroidir et maintenir le milieu à 47°C.
Ajouter stérilement 1 mL de supplément sélectif reconstitué (BS037) par flacon.
Homogénéiser parfaitement.
Couler en boîtes de Petri stériles.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert.
Ensemencer en stries l’inoculum à partir d’un bouillon d’enrichissement utilisé pour la recherche
des Escherichia coli O157:H7, à la surface des boîtes, afin d’obtenir des colonies isolées.
- Incuber à 37°C pendant 24 heures.
-
LECTURE
Après 24 heures d’incubation, Escherichia coli O157:H7 forme des colonies lisses, incolores, pouvant
présenter un halo orangé d’alcalinisation. La spécificité du milieu n’étant pas totale, les colonies
suspectes doivent être soumises à un test sérologique d’agglutination sur lame à l’aide d’antisérums
O157.
FORMULE - TYPE du milieu complet
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone .........................................................................................17,0 g
- Peptone pepsique de viande ...........................................................3,0 g
- D-Sorbitol .......................................................................................10,0 g
- Sels biliaires n°3 ..............................................................................1,5 g
- Chlorure de sodium..........................................................................5,0 g
- Rouge neutre ..............................................................................30,0 mg
- Cristal violet ..................................................................................1,0 mg
- Céfixime ......................................................................................0,05 mg
- Tellurite de potassium ...................................................................2,5 mg
- Agar agar bactériologique ..............................................................13,5 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,1 ± 0,2.
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CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre beige rosé, fluide et homogène.
- Milieu préparé : gélose rouge violacé.
- Réponse culturale typique après 24 heures d’incubation à 37°C (méthode qualitative
d’ensemencement) :
Microorganismes
Escherichia coli O157:H7
Escherichia coli O157:H7
Escherichia coli
(sorbitol-positif)
ATCC® 43895
ATCC 35150
ATCC 25922
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
ATCC 29212
ATCC 25923
Croissance
Caractéristiques
bonne, score 2
bonne, score 2
partiellement à
complètement inhibée,
score 0-1
inhibée, score 0
inhibée, score 0
colonies incolores
colonies incolores
colonies rouges
STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu de base déshydraté : 2-30°C.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu de base préparé en flacons : 6 mois à 2-8°C (à titre indicatif).
- Milieu complet préparé, en boîtes, avec supplément : 8 jours à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre
indicatif).
Supplément sélectif Céfixime-Tellurite pour gélose CT-SMAC :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
PRESENTATION
Code
Milieu de base déshydraté
(sans céfixime, ni tellurite de potassium) :
- Flacon de 500 g
BK147HA
Supplément sélectif Céfixime-Tellurite pour gélose CT-SMAC :
- Coffret de 10 flacons qsp 500 mL
BS03708
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Wells, J. G., B. R. Davis, I. K. Wachsmuth, L. W. Riley, R. S. Remis, R. Sokolow, and G. K. Morris. 1983. Laboratory
investigation of hemorrhagic colitis outbreaks associated with a rare Escherichia coli serotype. J. Clin. Microbiol. 18 : 512520.
Farmer, J. J. III, and B. R. Davis. 1985. H7 antiserum-sorbitol fermentation medium : a single tube screening medium for
detecting Escherichia coli O157:H7 associated with hemorrhagic colitis. J. Clin. Microbiol. 22 : 620-625.
March, S. B., and S. Ratnam. 1986. Sorbitol-MacConkey medium for detection of Escherichia coli O157 : H7 associated with
hemorrhagic colitis. J. Clin. Microbiol. 23 : 869-872.
Chapman, P. A., C. A. Siddons, P. M. Zadik, and L. Jewes. 1991. An improved selective medium for the isolation of
Escherichia coli O157. J. Med. Microbiol. 35 : 107-110.
Zadik, P. M., P. A. Chapman, and C. A. Siddons. 1993. Use tellurite for the selection of verocytotoxigenic Escherichia coli
O157. J. Med. Microbiol. 39 : 155-158.
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NF EN ISO 16654 (V 08-032). Juillet 2001. Microbiologie des aliments. Méthode horizontale pour la recherche des
Escherichia coli O157.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production
des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
SUPPORT PHOTO
Référence produit : [BK147HA + BS03708]
Utilisation : L’isolement et la différenciation du sérotype O157:H7 d’Escherichia coli à partir de l’eau,
du lait, de la viande de bœuf et des autres produits alimentaires
Escherichia coli O157:H7
Gélose de MacCONKEY Sorbitol (CT-SMAC)
Réf : BK147HA + BS03708
Incubation : 24 heures / 37°C
Caractéristiques : E. coli O157:H7 : colonies lisses, incolores, pouvant présenter un halo
orangé d’alcalinisation. Les colonies sont légèrement colorées de façon artificielle par
l’absorption des colorants présents dans la formulation du milieu.
E. coli non-O157:H7 : colonies rouges, de taille nettement supérieure.
Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-10.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK147/F/2003-01 : 4.
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