Zenit Reagnts Dosage d'insuline Manuel utilisateur

FR
INSULINE
pour analyses de routine
Détermination immunoenzymatique directe du niveau d’insuline dans le sérum ou le plasma.
8°C
LOT
IVD
Voir étiquette externe
2°C
UTILISATION PREVUE
Le kit Insuline est un dosage immunoenzymatique direct
en phase solide pour la détermination quantitative de
l’insuline dans le sérum ou le plasma humain.
Σ = 96 déterminations
REF 39818
Après une période d’incubation déterminée, la séparation
libre-lié s’obtient à travers un simple lavage de la phase
solide.
L’enzyme présente dans la partie liée catalyse la réaction
entre le substrat (H2O2) et le substrat TMB (TMB), en
développant une coloration bleue qui vire au jaune après
ajout de la Solution d’Arrêt (H2SO4).
La concentration de l’insuline dans l’échantillon est
calculée sur base d’une série standard.
L’intensité de la couleur développée est proportionnelle à
la concentration d’insuline présente dans l’échantillon.
1. SIGNIFICATION CLINIQUE
L’insuline humaine est une hormone polypeptidique qui
régule le métabolisme des hydrates de carbone. En plus
d’avoir comme rôle principal l’homéostasie des hydrates
de carbone, elle a des effets sur le métabolisme des
lipides et régule le relâchement des dépôts lipidiques du
foie.
L’insuline est impliquée dans l’absorption du glucose dans
le muscle et le tissu adipeux, dans l’augmentation de la
réplication de l’ADN et dans la synthèse protéique, elle
modifie l’activité de nombreuses enzymes (effet
allostérique), favorise la synthèse du glycogène, des
acides gras, l’absorption des aminoacides, inhibe la
protéolyse, la lipolyse et la gluconéogenèse. Les cellules
bêta relâchent l’insuline en fonction du glucose.
Les niveaux de glucose dans le sang varient d’environ 70
mg/dL à 110 mg/dL (3,9 - 6,1 mmol/L), sauf juste après un
repas, quand le niveau de glucose dans le sang augmente
temporairement. Cet effet homéostatique est le résultat de
nombreux facteurs, dont la régulation de l’hormone est le
plus important.
Il y a plusieurs pathologies dans lesquelles l’insuline est
impliquée : diabète mellitus, insulinémie, syndrome
métabolique et syndrome d’ovaires polycystiques. Il y a
deux types de diabète mellitus : type 1 (dégradation autoimmunitaire de l’insuline produite par les cellules bêta du
pancréas avec absence absolue d’insuline) et type 2
(syndrome multifactoriel du à une prédisposition génétique
et l’influence des facteurs environnementaux, par exemple
obésité, âge et inactivité physique, avec en conséquence
une résistance à l’insuline des cellules qui ont besoin
d’insuline pour l’absorption du glucose.
Cette forme de diabète a une composante fortement
héréditaire. Dans les deux cas, la production d’insuline
doit être supportée par de l’insuline par voie
pharmacologique administrée en intraveineuse.
La détermination quantitative des niveaux d’insuline dans
le sang peut aider à déterminer les doses.
3. REACTIFS, MATERIELS ET EQUIPEMENT
3.1 Réactifs et matériaux fournis dans le kit
1. Standards d’insuline 6x (1 flacon = 2 mL)
STD0
REF DCE002/7606-0
STD1
REF DCE002/7607-0
STD2
REF DCE002/7608-0
STD3
REF DCE002/7609-0
STD4
REF DCE002/7610-0
STD5
REF DCE002/7611-0
2. Conjugué (1 flacon) 13 mL
Conjugué anti-monoclonal insuline-HRP
REF DCE002/7602-0
3. Microplaque Recouverte (1 microl. fractionnable)
Anti-monoclonal insuline adsorbé sur la microplaque
REF DCE002/7603-0
4. Substrat TMB
(1 flacon) 12 mL
REF DCE004-0
H2O2-TMB 0,25gr/L (éviter le contact avec la peau)
5. Solution d’Arrêt (1 flacon) 12 mL
REF DCE005-0
Acide sulfurique 0,15 mol/L (éviter le contact avec la
peau).
6. Solution de lavage conc. 50 x
(1 bouteille) 20 mL
NaCl 45g/L; Tween-20 55g/L REF DCE006-0
3.2 Réactifs nécessaires non fournis dans le kit
Eau distillée
3.3 Matériel et équipement auxiliaire
Distributeurs automatiques
Lecteurs pour microplaques (450 nm)
2. PRINCIPE DU TEST
Le TEST ELISA INSULINE est basé sur la capture
simultanée de l’insuline humaine de la part de deux
anticorps monoclonaux, un immobilisé dans la
microplaque, l’autre conjugué avec la peroxydase (HRP).
Remarque :
11/28
11/27
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Conserver tous les réactifs entre +2 et + 8C° à l’abri de la
lumière.
Ouvrir le sachet du réactif 3 (Microplaque recouverte)
uniquement après l’avoir porté à température ambiante et
le refermer immédiatement après le prélèvement des
bandes à utiliser.
4. PRECAUTIONS
ƒ Les composants du kit doivent être conservés entre 2 et
8°C et ne doivent pas être utilisés après la date de
péremption.
ƒ Eviter l’exposition du réactif TMB-H2O2 à la lumière
solaire directe, aux métaux ou aux oxydants.
ƒ Les réactifs ouverts sont stables pendant 60 jours si
conservés entre 2 et 8°C.
ƒ Cette méthode permet la détermination quantitative
d’insuline de 5 à 300 µIU/mL.
S0
0
S1
5
S2
25
S3
50
S4
100
Solution d’Arrêt
S5
300
50 µL
100 µL
100 µL
100 µL
100 µL
100 µL
100 µL
7. LIMITATIONS DE LA PROCEDURE
7.1 Performances de l’analyse
Ne pas utiliser d’échantillons microbiologiquement
contaminés, ainsi que des échantillons fortement
lipémiques ou hémolysés. Il est important que le temps de
réaction de chaque micro-puit soit le même pour la
reproductibilité des résultats. Le temps de distribution des
micro-puits ne devrait pas être supérieur à 10 minutes. S’il
se prolonge au-delà de 10 minutes, il est recommandé de
suivre l’ordre de distribution. L’addition du substrat TMB
fait démarrer une réaction cinétique, qui se termine avec
l’ajout du substrat et de la solution d’arrêt. L’addition du
substrat et de la solution d’arrêt doit avoir lieu dans la
même séquence pour éliminer les différents temps de
réaction. Les lecteurs de plaques mesurent la DO
verticalement. Ne pas toucher le fond des micro-puits.
L’aspiration non complète de la solution de lavage des
micro-puits peut donner lieu à de mauvaises réplications
et à de faux résultats.
Distribuer :
Echantillon
---
6. CONTROLE QUALITE
Chaque laboratoire devrait tester les contrôles à valeurs
basses, moyennes et hautes de la courbe de réponse
standard pour suivre les performances du kit. Ces
contrôles devraient être traités comme inconnus et les
valeurs déterminées dans chaque procédure analytique
effectuée. Des tableaux de contrôle de la qualité devraient
être réalisés pour suivre les prestations des réactifs
fournis. Des méthodes statistiques pertinentes devraient
être utilisées pour en certifier les tendances. Des
déviations significatives des prestations établies peuvent
indiquer un changement non notifié des conditions
expérimentales ou la péremption des réactifs du kit. Il
faudrait utiliser des réactifs frais pour déterminer la cause
des variations.
5.4 Procédure
Porter tous les réactifs à température ambiante 22-28°C.
Préparer les puits de la microplaque en double pour
chacun des standards, contrôles et échantillon à tester.
---
100 µL
---
Lire l’absorbance (E) à 450 nm en mettant à zéro avec le
blanc
5.3 Préparation de l’échantillon
Suivre les bonnes pratiques de laboratoire lors de
l’utilisation de produits à base de sang.
Pour faire une comparaison soignée afin de déterminer les
valeurs normales, il faudrait prélever des échantillons de
sérum le matin à jeun.
Le sang devrait être recueilli dans un tube pour
prélèvements sans additifs ou anti-coagulants.
Laisser le sang se coaguler. Centrifuger l’échantillon pour
séparer le sérum de cellules.
Les échantillons devraient être réfrigérés à 2-8°C pendant
un maximum de 5 jours. S’ils ne peuvent être dosés dans
cette période, ils doivent être conservés à -20°C pendant
maximum 30 jours. Eviter les cycles de congélation et
décongélations répétées.
Les échantillons de patients avec des concentrations
d’insuline au-dessus de 300 µIU/mL peuvent être dilués
(par exemple 1/10 ou plus) avec le standard 0 et testés à
nouveau. La concentration des échantillons s’obtient en
multipliant le résultat par le facteur de dilution.
Echantillon
100 µL
---
Incuber à température ambiante (22-28°C) pendant 15
minutes à l’abri de la lumière.
5.2 Préparation de la Solution de Lavage
Diluer le contenu de la solution de lavage concentrée 50x
dans 1000 mL d’eau distillée ou déionisée dans un
récipient adapté à la conservation.
Standard
Conjugué
Substrat TMB
Une fois ouverts, les standards sont stables pendant au
moins 60 jours à 2-8°C. Ils contiennent un conservant.
Réactifs
50 µL
Incuber à température ambiante (22-28°C) durant 2
heures.
Enlever le contenu de chaque puit et laver avec 300 µL de
solution de lavage diluée. Répéter la procédure de lavage
deux fois en éliminant complètement la solution de lavage.
5. PROCEDURE
5.1 Préparation des Standard (S0, S1, S2, S3, S4, S5)
Les standards ont approximativement les concentrations
suivantes:
µIU/ml
Standard S0-S5
Blanc
7.2 Interprétation des résultats
Si on a utilisé l’ordinateur pour calculer les résultats, il est
impératif que les valeurs des étalons tombent dans les 10 %
des concentrations assignées.
---
12/28
12/27
FR
La variabilité à l’intérieur du même kit a été déterminée en
répliquant (16x) trois niveaux différents de sérum de
contrôle. La variabilité intra-test est de 2%.
1.1.2 Inter-Tests
La variabilité entre kits différents a été déterminée en
répliquant trois niveaux différents de sérum de contrôle
avec deux kits appartenant à des lots différents. La
variabilité inter-tests est de 6%.
8. RESULTATS
8.1 Remarques
La densité optique (D.O.) du standard 5 devrait être ≥ 1,0.
Les densités optiques (D.O) de quelques étalons ou
échantillons pourraient résulter supérieures à 3,0, dans ce
cas, elles pourraient être hors du gamme de mesure du
lecteur de microplaque. Il est donc nécessaire, pour des
D.O supérieures à 3,0, d’effectuer une lecture à 405 nm
en plus de 450 nm et 620nm (filtre de référence pour la
soustraction des interférences dues au plastique).
Pour lecteurs de microplaques non conçus pour lire la
plaque à trois longueurs d’onde en même temps, il est
conseillé de procéder de la façon suivante:
- Lire la microplaque à 450 nm et à 620 nm.
- Lire à nouveau la microplaque à 405 nm et à 620 nm.
- Trouver les puits dont les DO à 450 nm sont supérieures
à 2,0
- Sélectionner les DO correspondantes lues à 405 nm et
multiplier ces valeurs à 405 nm par le facteur de
conversion 3,0 (où DO 450/DO 405 = 3,0), qui est: DO
450 nm = DO 405 nm x 3,0.
Attention: Le facteur de conversion 3,0 est seulement
suggéré. Pour une meilleure précision, l’utilisateur est
invité à calculer le facteur de conversion spécifique pour
son propre lecteur.
10.2 Spécificité
L’anticorps utilisé présente les réactions croisées
suivantes, évaluées en ajoutant les substances
interférentes. La réactivité croisée a été calculée en
dérivant le rapport entre doses de substances
interférentes sur dose d’insuline nécessaire pour obtenir la
même absorbance :
Insuline
Proinsuline
C-Peptide
100%
N.D.
N.D.
10.3 Sensibilité
La concentration minimale d’insuline mesurable est
2 µIU/ml avec une limite de confiance de 95%.
10.4 Corrélation
Le kit Insuline (Zenit) a été comparé avec un kit disponible
dans le commerce. 9 échantillons de sérum ont été testés.
La courbe de régression obtenue est :
y = 1,1045 x -2.9851
r = 0,98 (r2 = 0,96)
8.2. Extinction moyenne
Calculer l’extinction moyenne (Em) de chaque point de la
courbe standard (S0 –S5) et de chaque échantillon.
8.3 Courbe standard - Méthode automatique
Utiliser la smoothed cubic spline (suggérée) ou bien la
fonction 4 paramètres logistic comme algorithme de
calcul.
11. DISPOSITIONS POUR L’ELIMINATION
Les réactifs doivent être éliminés en accord avec les lois
locales.
8.4 Courbe standard - Méthode manuelle
Une courbe de réponse est utilisée pour déterminer la
concentration en insuline dans un échantillon inconnu.
Enregistrer les DO obtenues dans le tableau du lecteur de
la microplaque conformément à l’exemple 1.
Faire le graphique des DO pour chaque standard dupliqué
par rapport aux concentrations correspondantes d’insuline
en µIU/ml sur papier ligné
Tracer la meilleure courbe qui s’approche des valeurs à
travers les points dessinés.
Pour déterminer la concentration d’Insuline pour un
échantillon inconnu, localiser la DO moyenne des
duplications des échantillons inconnus correspondants sur
l’axe vertical du graphique, trouver le point d’intersection
sur la courbe et lire la concentration (en µIU /ml) sur l’axe
horizontal du graphique (on peut trouver la moyenne des
duplications de l’échantillon inconnu comme indiqué).
BIBLIOGRAPHIE
- Eastham R.D Biochemical Values in Clinical Medicine, 7th
Ed. Bristol. England. Jonh Wright &Sons, Ltd (1985).
- Gerbitz, V.K.D., J. Clin. Chem. Biochem. 18, 313-326
(1980)
- Boehm TM, et al Diabetes Care 479-490. (1079)
- Wayne PA National Committee for Clinical Laboratory
Standards. Procedure for the collection of diagnostic blood
specimens by venipuncture: approved standards. 4th Ed.
NCCLS (1988)
- Turkinton RW.,et al Archive of Internal Med. 142
- Sacks BD Carbohydrates in Burtis, C.A. and Ashwood, AR
(Eds ) Tietz Textbook OF Clinical Chemistry.2nd Ed.
Philadelphia w. B. Saunders Co. 1994
- Kahn CR, et al. Diabetes Care 2 283 – 295 (1979)
SUGGESTIONS POUR LA RESOLUTION DES
PROBLEMES /TROUBLESHOOTING
9. VALEURS DE REFERENCE
Les niveaux d’insuline sont beaucoup plus élevés dans le
plasma que dans le sérum; il est donc préférable d’utiliser
du sérum.
Les gamme assignés par le fabricant sont en accord avec
les travaux publiés dans la littérature.
ERREURS CAUSES POSSIBLES/SUGGESTIONS
Aucune réaction colorimétrique de l’échantillon
- absence distribution du conjugué
- contamination du conjugué et/ou du substrat
- erreurs dans l’exécution de l’échantillon (ex. Distribution
accidentelle des réactifs en séquence erronée ou
provenant de flacons erronés, etc.)
Réaction trop faible (DO trop basses)
- conjugué non adéquat (ex. ne provenant pas du kit
original)
- temps d’incubation trop bref, température d’incubation
trop basse
Réaction trop intense (DO trop hautes)
Ces gammes devraient être utilisés uniquement comme
indication:
Enfants<12 ans
<10 µIU/mL
Adultes (Normaux)
0,7 – 9,0 µIU/mL
Diabétiques (Type II)
0,7 – 25 µIU/mL
10. PARAMETRES CARACTERISTIQUES
10.1 Précision
10.1.1 Intra-test
13/28
13/27
FR
- réactifs et/ou strip non portés à température ambiante
avant l’utilisation
- le laveur pour microplaques ne lave pas correctement
(suggestion: nettoyer la tête du laveur)
CV% inter-test élevé
- conditions d’incubation non constantes (durée ou
température)
- contrôles et échantillons non distribués en même temps
(avec les mêmes intervalles) (contrôler la séquence de
distribution)
- variabilité intrinsèque des opérateurs
Ed. 10/2009
- conjugué non adéquat (ex. ne provenant pas du kit
original)
- temps d’incubation trop long, température d’incubation
trop élevée
- mauvaise qualité de l’eau utilisée pour la solution de
lavage (faible degré de déionisation)
- lavages insuffisants (conjugué non complètement
enlevé)
Valeurs inexplicables hors échelle
- contamination de pipette, embouts ou récipients- lavages
insuffisants (conjugué pas complètement enlevé)
CV% intra-test élevé
14/28
14/27
DE
EL
Verwendete Symbole
FR
IT
Explication des symboles
Spiegazione dei simboli
REF
yyyy-mm-dd
Σ = xx
Max
Min
Επεξήγηση συµβόλων
EN
ES
Explanation of symbols
Explicación de los símbolos
PT
Significado dos símbolos
DE
EL
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ES
FR
IT
PT
In-vitro-Diagnostikum
In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή
In vitro diagnostic medical device
Para diagnóstico in vitro
Dispositif médical de diagnostic in vitro
Dispositivo di diagnostica in vitro
Dispositivos médicos para diagnostico in vitro
DE
EL
EN
ES
FR
IT
PT
Hergestellt von
Κατασκευαστής
Manufacturer
Fabricado por
Fabriqué par
Fabbricante
Produzido por
DE
EL
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ES
FR
IT
PT
Bestellnummer
Αριθµός καταλόγου
Catalogue number
Número de catálogo
Références du catalogue
Numero di catalogo
Número do catálogo
DE
EL
EN
ES
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IT
PT
Herstellungsdatum
Ηµεροµηνία κατασκευής
Date of manufacture
Fecha de producción
Date de fabrication
Data di produzione
Data de produção
DE
EL
EN
ES
FR
IT
PT
Verwendbar bis (letzter Tag des Monats)
Χρήση έως (η τελευταία ηµέρα του µήνα)
Use by (last day of the month)
Fecha de caducidad (usar antes del último día del mes)
Utiliser avant (dernier jour du mois indiqué)
Utilizzare prima del (ultimo giorno del mese)
Utilizar até (antes do último dia do mês)
DE
EL
EN
ES
FR
IT
PT
Biogefährdung
Βιολογικός κίνδυνος
Biological risk
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
DE
EL
EN
ES
FR
IT
PT
Gebrauchsanweisung beachten
Συµβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης
Read instructions for use
Consultar las instrucciones de uso
Consulter le mode d’emploi
Consultare le istruzioni per l’uso
Consultar instruções para uso
DE
EL
EN
ES
FR
IT
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Chargenbezeichnung
Αριθµός παρτίδας
Batch code
Código de lote
Numéro de lot
Codice del lotto
Lote
DE
EL
EN
ES
FR
IT
PT
Ausreichend für “n” Tests
Το περιεχόµενο επαρκεί για “n” δοκιµασίες
Contents for “n” tests
Contenido suficiente para ”n” ensayos
Contenu suffisant pour “n” tests
Contenuto sufficiente per “n” saggi
Conteúdo suficiente para “n” testes
DE
EL
EN
ES
FR
IT
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Inhalt
Περιεχόµενο του κιτ
Contents of kit
Contenido del kit
Contenu du coffret
Contenuto del kit
Conteúdo do kit
DE
EL
EN
ES
FR
IT
PT
Temperaturbereich
Όρια θερµοκρασίας
Temperature interval
Temperatura de conservación
Limites de température de conservation
Limiti di temperatura
Intervalo de temperatura
yyyy-mm
27/28
26/27
Cont.
Manufacturer:
DiaMetra S.r.l. Headquarter:
Via Garibaldi, 18
20090 SEGRATE (MI)
Tel. 0039-02-2139184 - 02-26921595
Fax 0039-02-2133354.
Manufacturing site:
Via Giustozzi 35/35a
Z.I Paciana
06034 FOLIGNO (PG) ITALY.
Tel. 0039-0762-24864
Fax 0039-0762-316197
E-mail: [email protected]
UK
UNITED KINGDOM
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Winnersh - Wokingham
Berkshire RG41 5RA
DE
DEUTSCHLAND
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Eine Division der
Berlin-Chemie AG
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12489 Berlin
EL
∆ιανέεται στην
ΕΛΛΑ∆Α από την
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16451 Argyroupolis
Attiki
ES
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08918 Badalona
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FR
FRANCE
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3-5, Rue du Jura
BP 70511
94633 Rungis Cedex
IT
ITALIA
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Via Lungo l’Ema, 7
50012 Bagno a Ripoli
Firenze
PT
PORTUGAL
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Quinta da Fonte
Edifício D.Manuel I, 2°B
2770-203 Paço de Arcos
28/28
27/27
">