Instrument MiSeqDx
10 Suivez les temps d’incubation indiqués dans les étapes de normalisation de la librairie comme indiqué dans la notice d’accompagnement du réactif concerné. Une incubation inappropriée peut affecter la représentation de la librairie et la densité des amplifiats.
11 Il est vivement recommandé d’installer le logiciel antivirus fourni par l’utilisateur afin de protéger l’ordinateur des virus. Consultez le manuel de l’utilisateur pour obtenir des instructions relatives à l’installation.
12 N’utilisez pas l’instrument MiSeqDx si l’un des panneaux a été retiré. L’utilisation de l’instrument, lorsque l’un des panneaux a été retiré, crée un risque d’exposition à la tension secteur et à plusieurs tensions continues.
13 Ne touchez pas la platine de Flow Cell dans le compartiment de Flow Cell. Le réchauffeur dans ce compartiment fonctionne entre 22 et 95 °C et peut causer des brûlures.
14 L’instrument pèse environ 57 kg (126 lb) et peut causer des blessures graves s’il tombe ou s’il est manipulé sans précaution.
Notes concernant la procédure
Le débit d’échantillons par analyse MiSeqDx peut être compris entre 8 et 48 échantillons. Les primers d’indexage utilisés pendant l’amplification par PCR doivent être choisis en fonction du débit d’échantillons final souhaité pour assurer la diversité dans la séquence d’indexage.
REMARQUE
Pour une efficacité maximale du débit, procédez à la préparation de la librairie pour 96 échantillons au plus, puis répartissez les échantillons en deux analyses de séquençage avec un maximum de 48 échantillons par analyse.
MiSeqDx utilise un voyant DEL vert pour séquencer des bases G/T et un voyant DEL rouge pour séquencer des bases
A/C. À chaque cycle, au moins un des deux nucléotides de chaque canal de couleur doit être lu pour assurer un enregistrement approprié. Il est important de maintenir l’équilibrage des couleurs pour chaque base de la lecture d’index en cours de séquençage, sinon un échec de l’enregistrement pourrait se produire lors du séquençage de la lecture d’index.
Si le séquençage est inférieur à 48 échantillons dans une analyse de séquençage, sélectionnez les index appropriés selon leurs séquences, afin de maintenir l’équilibre des couleurs dans les canaux verts et rouges. Au minimum, les analyses comportant 8 à 48 échantillons doivent inclure les combinaisons de primers d’indexage figurant dans la notice d’accompagnement de la Trousse universelle MiSeqDx 1.0.
Pour effectuer avec précision des analyses plus petites, au moins huit échantillons doivent être présents. Si six
échantillons uniques (à l’exclusion des contrôles positifs et négatifs) ne sont pas disponibles, il convient d’effectuer l’analyse avec des réplicats d’échantillons de n’importe quel échantillon d’ADN génomique humain. Consultez la notice d’accompagnement de la Trousse universelle MiSeqDx 1.0 pour connaître l’ensemble minimal d’indices à équilibre chromatique à utiliser pour les analyses de séquençage de huit échantillons.
Mode d’emploi
Le mode d’emploi suivant de l’instrument MiSeqDx requiert l’utilisation des réactifs fournis dans la trousse Trousse universelle MiSeqDx 1.0.
MiSeqDx Préparation de la feuille d’échantillons
1 Dans l’écran d’accueil de Illumina Worklist Manager, sélectionnez Create Worklist (Créer la liste de travail).
2 Dans le champ Test Type (Type de test), sélectionnez MiSeqDx universel.
3 Dans le champ Worklist Name (Nom de la liste de travail), saisissez un nom pour la feuille d’échantillons.
Il s’agit d’un champ obligatoire.
— Si l’identifiant du code à barres de la cartouche de réactifs alphanumérique est utilisé pour le nom de la feuille d’échantillons, le Logiciel d’exploitation de MiSeq (MOS) trouve automatiquement la feuille d’échantillons (cet identifiant se trouve sur l’étiquette de la cartouche de réactifs, juste sous le code à barres).
— Si vous utilisez un autre nom pour la feuille d’échantillons, le bouton Browse (Parcourir) situé dans le
Logiciel d’exploitation de MiSeq (MOS) peut être utilisé afin de trouver la feuille d’échantillons appropriée.
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| nº 15070068 Rév. A FRA
Mars 2015
