V2 – 11/04/14
RAPID’Enterobacteriaceae / Gélose
DOMAINE D’APPLICATION
Milieu utilisé pour la recherche et le
dénombrement des Enterobacteriaceae en 24
heures et sans confirmations, dans les produits
alimentaires, humain et animal, et les
échantillons de l’environnement.
NF
VALIDATION
par
AFNOR
CERTIFICATION selon le protocole EN ISO
16140
La méthode RAPID’Enterobacteriaceae est
certifiée NF VALIDATION comme méthode
alternative à la norme ISO 21528-2 (décembre
2004)
pour
le
dénombrement
des
Enterobacteriaceae par comptage de colonies,
selon le protocole ISO 16140, pour tous
produits d’alimentation humaine et animale, et
pour les échantillons d’environnement, avec
lecture manuelle et automatisée.
BRD-07/24-11/13
METHODES ALTERNATIVES D’ANALYSES POUR
L’AGROALIMENTAIRE
Certifié par AFNOR Certification
www.afnor-validation.org
PRINCIPE
Le principe du milieu RAPID’Enterobacteriacea
repose sur l’aptitude des Enterobacteriaceae à
fermenter le glucose.
Le milieu est rendu inhibiteur vis-à-vis des
bactéries Gram positives et de certaines
bactéries Gram négatives par la présence
simultanée du cristal violet et des sels biliaires.
Des
indicateurs
colorés
permettent
l’optimisation du contraste de lecture des
colonies d’Enterobacteriaceae de couleur rouge
intense.
PRESENTATION
• Prêt à l’emploi
200 ml x 6 flacons
• Déshydraté
500 g
code 355-4012
code 356-4004
355-4012
356-4004
• Déshydraté : + 15 - 25 °C, flacon
soigneusement fermé dans un endroit frais et
sec.
• La date de péremption et le numéro du lot
sont indiqués sur le conditionnement.
FORMULE THEORIQUE
Eléments nutritifs
Glucose
Elements sélectifs
Indicateurs colorés
Agar
Eau distillée
pH (25°C) final = 7,4 ± 0,2
17.3 g
9.0 g
0.7 g
70 mg
11.0 g
1000 ml
AUTRE(S) PRODUIT(S) NECESSAIRE(S)
(NON FOURNI(S))
• Eau distillée
MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI
(liste non exhaustive)
• Balance
• Sacs de pesée stériles
• Broyeur
• Plaque chauffante
• Agitateur-homogénéisateur
• Flacons de 125 ml en Pyrex
• Boîtes de Pétri stériles (Ø = 90 mm)
• Pipettes stériles (1 ml,….)
• Bain-marie
• Etuve ou enceinte thermostatée
• Tout matériel courant d’un laboratoire
PREPARATION DU MILIEU DESHYDRATE
Toujours agiter avant chaque utilisation
Mettre 38 g de poudre dans 1 litre d’eau
distillée. Attendre 5 minutes, puis mélanger
jusqu’à
l’obtention
d’une
suspension
homogène.
Chauffer lentement, en agitant fréquemment,
puis porter à ébullition jusqu’à complète
dissolution.
Ne pas autoclaver.
Ce milieu peut être utilisé après sa préparation.
Ce milieu peut être conservé en flacon
soigneusement fermé dans un endroit frais et
sec (contrôler la stérilité du milieu au moment
de l’emploi).
Taux de reconstitution : 38 g/l.
500 grammes de poudre permettent de
réaliser 13,15 litres de milieu.
CONSERVATION/VALIDITE/LOT
• Prêt à l’emploi : + 2 - 8 °C.
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RAPID’Enterobacteriaceae / Gélose
PROTOCOLE
• Préparation des échantillons
A effectuer conformément à la norme du produit
concerné.
• Ensemencement en masse
- Déposer 1 ml du produit à analyser (ou une
dilution décimale) dans une boîte de Pétri
stérile.
- Couler environ le milieu fondu, refroidi à 44 47 °C, homogénéiser et laisser solidifier.
- Si une forte contamination est suspectée,
couler une seconde couche (environ 2 mm
d’épaisseur) de ce milieu maintenu à 44 - 47 °C
et laisser solidifier à nouveau.
• Ensemencement en surface
- Etaler 0.1 ml du produit à analyser (ou une
dilution décimale) sur une boîte de
RAPID’Enterobacteriaceae.
NB : S’il est nécessaire, pour certains produits,
de procéder à l’estimation de petits nombres,
étaler 1 ml du produit à analyser sur 3 boîtes de
90 mm (~ 0,33 ml/boîte) ou sur 1 boîte de 140
mm.
• Incubation
- Incuber à 37°C ± 1°C pendant 24 h ± 2 h.
- Alternativement une température de 30°C ou
35°C ± 1°C pendant 24 h ± 2 h peut être
utilisée
pour
le
dénombrement
des
Enterobacteriacaeae psychrotrophes.
- Un biais median de 0.23 log UFC/g associé à
la lecture automatisée et à l’ensemencement en
surface a été observé lors de la validation de la
méthode.
- Dans le cadre la marque NF VALIDATION, le
compteur automatique de colonies interscience
®
Scan 1200 a été validé avec la version de
logiciel V 6.3.7 Kernel Biorad 1.2
- Pour toutes questions concernant l’utilisation
®
du Scan 1200, se reporter au manuel
utilisateur de l’appareil.
- Pour toute information concernant la fin de
validité de la certification NF VALIDATION,
consulter
l’attestation
BRD
07/24-11/13
disponibles auprès de votre représentant
Bio-Rad ou d’AFNOR Certification.
- Respecter les Bonnes Pratiques de
Laboratoire (EN ISO 7218).
PERFORMANCES/CONTROLE QUALITE DU
TEST
Les performances culturales sont contrôlées à
l’aide des souches suivantes :
MICROORGANISMES
PRECAUTIONS D’EMPLOI
- Ne pas autoclaver.
- Pour
le
dénombrement
des
Enterobacteriaceae
dans
les
matrices
contenant une flore mésophile abondante, il est
préférable d’utiliser le milieu en double couche.
- Dans le cadre la marque NF VALIDATION,
l’ensemencement en surface par méthode
spirale n’a pas été testé.
Fermentation
du glucose
Diamèt
re
PR*
Escherichia coli
ATCC 25922
Positive.
Colonies
roses à
rouges avec
ou sans halo
de
précipitation.
≥ 0.5 mm
≥ 0.5
Salmonella
Typhimurium
ATCC 14028
Positive.
Colonies
roses à
rouges avec
ou sans
halo de
précipitation.
≥ 0.5 mm
≥ 0.5
Productivité
NB : Après incubation, les boîtes de
RAPID’Enterobacteriaceae
peuvent
être
conservées jusqu’à 72 h à 2 / 8 °C avec le
protocole d’ensemencement en masse.
LECTURE ET INTERPRETATION
Après 24 heures d’incubation, dénombrer les
colonies typiques d’Enterobacteriaceae.
Les Enterobacteriaceae forment des colonies
rouge ayant un diamètre supérieur ou égal à
0,5 mm avec ou sans zone de précipitation.
La lecture peut être également réalisée à l’aide
du compteur automatique de colonies
®
interscience
Scan
1200.
Pour
cela,
sélectionner le milieu « Rapid Entero » puis
lancer le dénombrement.
Culture des micro-organismes
en 24H à 37 °C
Sélectivité
Enterococcus
faecalis
ATCC 19433
Pas de croissance
*PR = Nombre total de colonies obtenu sur 2 boîtes
de milieu V.R.B.G./ Nombre total de colonies obtenu
sur 2 boîtes de milieu T.C.S. gélose
CONTROLE QUALITE DU FABRICANT
Tous les produits fabriqués et commercialisés
par la société Bio-Rad sont placés sous un
système d'assurance qualité de la réception
des
matières
premières
jusqu'à
la
commercialisation des produits finis.
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RAPID’Enterobacteriaceae / Gélose
Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un
contrôle de qualité et il n'est commercialisé que
s'il est conforme aux critères d'acceptation.
La documentation relative à la production et au
contrôle de chaque lot est conservée.
MOTS CLES
Enterobacteriaceae / Produits alimentaires /
Recherche / Dénombrement / Cristal Violet /
Sels biliaires / Glucose / Fermentation / Milieu.
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