Chromogenix COATEST APC Manuel utilisateur

COATEST® APC™ Resistance - 82 2643 63
FRANÇAIS - Révision de la notice 06/2002
Utilization prevue
Contrôle de qualité
Mesure de la réponse anticoagulante à la protéine C activée (APC) dans le plasma
humain, chez les individus atteints de maladie thrombo-embolique soupçonnée ou avérée.
Des Contrôle plasmatique 1 et 2 doivent être utilisés aux fins de validation de la série
de tests. L’on peut aussi se procurer séparément chez Chromogenix du Contrôle
plasmatique 1 (art. n° 82 2650 63) et du Contrôle plasmatique 2 (art. n° 82 2668 63).
Contrôle plasmatique 1 présente une réponse normale à l’APC et le Contrôle
plasmatique 2 une réponse anormale. Des fourchettes de rapports de l’APC attendus
sont communiquées avec chaque lot. L’obtention de valeurs hors des limites de la
fourchette précisée devra conduire à répéter l’analyse, après avoir procédé à une
vérification complète des réactifs et du fonctionnement des instruments. (Voir la section
Etalonnage pour un emploi conforme au CQ des plasmas Contrôle plasmatique 1 et 2).
Contexte et resume
La résistance à l’APC est un trouble de la voie anticoagulante de la protéine C qui
constitue un important facteur de risque de maladie thrombo-embolique. Le phénotype
de résistance à l’APC se caractérise par une réponse anticoagulante anormalement
faible dans le plasma humain lors de l’addition de l’APC humaine.1-5
La responsabilité en revient dans plus de 90% des cas à une mutation du gène du
facteur V. Cette mutation rend l’un des sites de clivage de l’APC au niveau du facteur
Va moins apte au clivage par suite d’une substitution d’acides aminés (Arg506 -> Gln).6, 7
Pour les cas restants, d’autres pathologies héréditaires ou acquises contribuent au
phénotype de résistance à l’APC.8 -10 Coatest APC Resistance fournit une méthode de
détermination de la réponse à l’APC humaine basée sur le temps de céphaline-kaolin
(APTT).11, 12 L’allongement du temps de céphaline-kaolin activé basal après addition de
l’APC est moindre dans le plasma de sujets porteurs du phénotype de résistance à
l’APC que chez ceux qui présentent une réponse normale à l’APC.
Principe de mesure
Recueil des échantillons
Effectuer le prélèvement après que le patient se soit reposé pendant 10 minutes.
Recueillir le sang (9 volumes) sur du citrate de sodium à 0,1 mol/L (1 volume) et
centrifuger à 2000 g, 20 minutes à la température ambiante, dans un délai maximal de
7 heures. Séparer soigneusement le plasma des éléments figurés dans les 30 minutes
qui suivent. Afin d’éviter toute contamination par les plaquettes, on utilisera uniquement
la portion intermédiaire du plasma. L’analyse du plasma doit intervenir dans les
8 heures suivant le prélèvement. Une alternative consiste à le congeler rapidement
à -70°C en aliquotes de 1 mL ou moins, puis à le conserver pendant un maximum de
3 ans à -70°C. Les échantillons ne doivent pas être conservés dans un congélateur à
dégivrage automatique, ni être décongelés et recongelés avant le test. Traiter les
échantillons comme potentiellement infectieux. Pour tout complément d’informations,
se reporter au document H21-A3 NCCLS.14
Le plasma est incubé pendant une durée standard avec le réactif mis en œuvre pour la
mesure du temps de céphaline-kaolin. Après avoir déclenché la coagulation par
l’addition de CaCl2 en l’absence et en présence de l’APC humaine, on enregistre le
temps qui s’écoule jusqu’à la prise en masse du caillot.
REACTIFS
1 flacons
1. CaCl2
8 mL de chlorure de calcium à 0,025 mol/L dans du tampon Tris contenant 0,5 % de
sérum-albumine bovine.
2. Réactif APTT pour temps de céphaline-kaolin
1 flacons
16 mL de phospholipides purifiés avec de la silice colloïdale comme
activateur de contact. Contient un conservateur. Mélanger soigneusement à l’aide
d’un vortex avant l’emploi.
3. APC/CaCl2
4 flacons
Protéine C activée d’origine humaine, colyophilisée avec du CaCl2. Reconstituer à
l’aide de 2,0 mL eau NCCLS type II.13 Laisser reposer pendant 30 minutes à une
température de 20-25°C et mélanger prudemment avant l’emploi.
Les réactifs 2 et 3 ne sont pas interchangeables entre lots.
ATTENTION: Chaque unité de donneur servant à la préparation de réactifs de source
humaine a été soumise à une recherche de la présence d’antigène de surface de
l’hépatite B et d’anticorps dirigés contre le VIH 1 et 2 et le virus de l’hépatite C au
moyen de tests homologués par la FDA, qui ont donné des résultats négatifs. Toutefois,
eu égard au fait qu’aucun test ne permet d’exclure à 100% la présence de ces maladies
à diffusion par voie sanguine, il convient de manipuler et d’évacuer avec précaution les
réactifs de source humaine à base de ce produit.
Eviter le contact avec la peau et les yeux (S24/25).
Ne pas jeter les résidus à l’égout (S29).
Porter un vêtement de protection approprié (S36).
Ce produit est à usage diagnostique in vitro.
Materiel necessaire mais non fournIi:
— Eau désionisée, filtrée sur filtre de 0,22 µm, ou eau NCCLS type II.13
— Pipette étalonnée.
— Utiliser des appareils de mesure de la coagulation automatiques ou semiautomatiques basés sur des méthodes de détection mécaniques ou optiques.
REMARQUE: Lors de l’utilisation d’appareils de mesure automatiques ou semi-automatiques,
se rapporter toujours au manuel de l’opérateur, fourni par le fabricant de l’appareil, pour
des procédures exactes.
Calculer le rapport de l’APC pour les prélèvements et les contrôles:
Temps de coagulation APC/CaCl2
Rapport de l'APC =
Temps de coagulation CaCl2
Un rapport de l’APC inférieur ou égal à la valeur seuil (voir Etalonnage) indique une
réponse faible correspondant au phénotype de résistance de l’APC. En cas d’obtention
d’une telle réponse faible, il est recommandé de procéder à l’analyse d’un second
échantillon recueilli séparément pour confirmation.
REMARQUE: Les échantillons de plasma frais ou congelés doivent être évalués par
référence à une normale issue de l’analyse d’échantillons de plasma frais ou congelés –
selon le cas – de sujets sains. Les échantillons frais donnent généralement des
rapports de l’APC un peu plus élevés.
Conditions de conservation et stabilité
Evaluation du coffret
Les réactifs scellés sont stables à des températures de 2 à 8°C jusqu’à la date de
péremption imprimée sur l’étiquette. Eviter la contamination des réactifs par des
microorganismes.
1. CaCl2
Stable une fois le flacon entamé pendant 1 semaine à 15-25°C ou pendant 1 mois à
2-8°C dans le flacon d’origine.
2. Réactif APTT pour temps de céphaline-kaolin
Stable une fois le flacon entamé pendant 1 semaine à 15-25°C ou 1 mois à 2-8°C
dans le flacon d’origine. Ne pas congeler.
3. APC/CaCl2
Stable après la reconstitution pendant 2 heures à 37°C, pendant 8 heures à 15-25°C,
pendant 5 jours à 2-8°C ou pendant 3 mois à -20°C ou á des températures
inférieures dans le flacon d’origine. *Voir REMARQUE.
*REMARQUE: Décongeler à 37°C le réactif et mélanger prudemment avant l’emploi.
Ne pas recongeler.
REPETABILITE ET PRECISION
L’imprécision des temps de coagulation obtenus en présence et en l’absence de l’APC
été déterminée par analyse de trois échantillons de plasma présentant une réponse
différente de l’APC. Les analyses ont été effectuées à 7 reprises, y compris 5
reproductions de chaque plasma conformément à la référence EP5-T2 NCCLS.15
CaCl2 (s)
Intrasérie
Interséries
Réponse forte
29,9
CV = 1,8%
CV = 4,2%
Contrôle plasmatique 1
32,0
CV = 2,0%
CV = 3,9%
Contrôle plasmatique 2
32,2
CV = 1,1%
CV = 0,8%
APC/CaCl2 (s)
Intrasérie
Interséries
Réponse forte
122
CV = 2,4%
CV = 2,0%
Contrôle plasmatique 1
116
CV = 4,3%
CV = 5,0%
Contrôle plasmatique 2
64,5
CV = 1,4%
CV = 1,6%
Rapport de l’APC
Interséries
Réponse forte
4,1
CV = 5,0%
Contrôle plasmatique 1
3,6
CV = 3,3%
Contrôle plasmatique 2
2,0
CV = 1,4%
Procedure
1. Amener tous les réactifs à la température ambiante avant l’emploi. Décongeler
rapidement à 37°C les prélèvements de plasma congelé de façon standardisée en
veillant à exposer le prélèvement à une perte négligeable de l’activité des facteurs
de coagulation labiles et en vérifiant l’absence de cryoprécipités.
2. Préchauffer un volume suffisant de CaCl2 et d’APC/CaCl2 à 37±0,5°C.
3. Ajouter un volume de plasma dans l’éprouvette ou dans la cuvette, puis compléter
par un volume identique du réactif pour le temps de céphaline-kaolin. Faire incuber à
37°C pendant 5 minutes. Un appareil de mesure, comportant une durée d’incubation
differente, préréglée, peut être utilisé à condition que la durée soit au minimum de
3 minutes.
4. Ajouter un volume de CaCl2 et commencer simultanément à chronométrer la
formation du caillot. Enregistrer le délai nécessaire à la formation du caillot.
5. Procéder à une seconde analyse du prélèvement plasmatique en remplaçant CaCl2
par APC/CaCl2 et enregistrer le délai de la formation du caillot.
REMARQUE: En cas d’utilisation d’instruments automatisés, il est préférable de
prolonger jusqu’à un minimum de 150 secondes la durée de détection de la prise en
masse du caillot.
Résultats
Instrumentation Laboratory Company - Lexington, MA 02421-3125 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
D’une manière générale, l’imprécision du rapport de l’APC est d’autant moins grande
que les valeurs de ce rapport sont faibles. L’étude ci-dessus a été réalisée sur un
instrument ACL 300. L’analyse en double ou en triple de 17 à 20 échantillons de plasma
sur 9 types d’instruments différents, a abouti à un CV intrasérie égal respectivement à
2,0% (extrêmes: 0,3-4,2%) et 3,9% (extrêmes: 0,8-11,3%) en l’absence et en présence
de l’APC.
Etalonnage
Le rapport effectif de l’APC qui correspond à une réponse limite à l’APC, est susceptible
de légères variations dues à l’instrumentation utilisée, de même qu’à l’état de
l’instrument. Il est recommandé que chaque utilisateur vérifie les performances de son
instrument et parvienne à une estimation de la valeur seuil de résistance à l’APC en
appliquant la procédure suivante:
1. Effectuer cinq déterminations indépendantes du rapport de l’APC – au moins en
triple dans chaque série – d’un échantillon de plasma présentant une réponse
normale à l’APC. Confirmer que la variation inter- et intratest du rapport de l’APC est
inférieure à 7%.
2. Déterminer les rapports de l’APC pour 50 à 100 échantillons de plasma provenant de
sujets sains âgés de 20 à 65 ans, répartis en un nombre sensiblement égal
d’hommes et de femmes non enceintes. Les individus sains sélectionnés seront
autant que possible représentatifs de la communauté régionale. Inclure le plasma
témoin niveau 1 et le plasma témoin niveau 2. La distribution du rapport de l’APC
doit être reconnue non gaussienne.
3. S’assurer que les rapports de l’APC pour les plasmas témoins sont bien à l’intérieur
de la fourchette précisée.
4. Calculer le rapport médian de l’APC. Si cette valeur est égale ou inférieure à 2,6,
il est conseillé, de manière à obtenir une résolution plus élevée, de reconstituer
l’ampoule de APC/CaCl2 avec 1,5 mL d’eau au lieu de 2,0 mL.
5. Calculer la valeur-seuil de résistance à l’APC en multipliant le rapport de l’APC
médian par 0,75 s’il est inférieur à 3 et en multipliant le rapport de l’APC médian par
0,80 s’il est égal ou supérieur à 3.
6. Le rapport de l’APC pour le Contrôle plasmatique 1 doit se situer dans les limites de
la normale. Le rapport de l’APC pour le Contrôle plasmatique 2 doit se situer en
dessous de la valeur seuil.
Interpretation des résultats
Si l’analyse de deux échantillons de sang recueillis indépendamment révèle qu’un individu
est porteur du phénotype de résistance à l’APC, il est recommandé de pratiquer une
analyse de contrôle en recherchant l’existence éventuelle d’une mutation du facteur V.
Limitations/facteurs interferents
Le temps de céphaline-kaolin (APTT) doit se trouver dans les limites de la normale. Des
échantillons de plasma présentant des temps de céphaline-kaolin allongés, par suite
notamment de déficits en facteurs intrinsèques de la coagulation ou de l’existence
d’anticorps dirigés contre les protéines des phospholipides, ne permettraient de tirer de
l’effet de l’addition de l’APC aucune conclusion fiable. Les sujets à étudier ne doivent
pas être sous héparinothérapie ou sous OAC. Dans ce dernier cas, le traitement sera
arrêté pendant au minimum une semaine, jusqu’au rétablissement du temps de Quick
de base. Comme pour tous les tests basés sur l’APC, on prendra soin d’éviter une
activation de contact des échantillons, en raison du risque inhérent d’activation des
facteurs VIII et V. Pour des motifs analogues, il importe de même d’éviter toute
contamination plaquettaire des échantillons de plasma (voir à Recueil des échantillons).
Valeurs de reference
Les rapports de l’APC issus de l’analyse du plasma de 100 sujets sains (51 hommes et
49 femmes, âge: 20 à 58 ans) sur cinq instruments de coagulation différents, se
situaient dans une fourchette comprise entre 2 et 5.
302163 R1 06/2002
Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia / Litteratur / Litteraturförteckning /
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clinical chemistry devises.
US Patent 5,443,960; EP 0 608 235; Australia 666 484; Japan 2562000; Canada 2,119,761.
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In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in vitro
Dispositif mèdical de diagnostic
in vitro
Per uso diagnostico in vitro
Dispositivo médico para
utilização em diagnóstico in
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“in vitro” diagnostisk udstyr
In vitro diagnostisk medicinsk
produkt
Batch code
Chargen-Bezeichnung
Identificación número
de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Batch nr.
Tillverkningskod
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Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima del
Data límite de
utilização
Anvendelse
Användning
Temperature limitation
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Temperatura de
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Fabricado por
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Mandataire
Rappresentanza autorizzata
Representante autorizado
Leverandør
Auktoriserad representant
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302163 R1 06/2002
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