Spectral Diagnostics EAAQC-5 Mode d'emploi

Spectral Diagnostics Incorporated
Dosage de l’activité de l’endotoxine (EAA)
Utilisation diagnostique in vitro
Mesure de l’activité de l’endotoxine dans des échantillons de sang total humain
Numéros de catalogue : EAA20-1, EAQC-5
Utilisation prévue : Le dosage EAAest un test diagnostique in vitro rapide qui utilise un anticorps monoclonal spécifique pour
mesurer l’activité de l’endotoxine dans des échantillons de sang total humain prélevé sur EDTA. Employé en association avec des
cultures microbiennes et d’autres tests diagnostiques pertinents (par ex. échographie, bronchoscopie ou tomodensitométrie) ce test
est indiqué pour A) exclure la présence d’infections bactériennes Gram négatives. Le tests EAAest également indiqué pour B) en
association avec d’autres informations cliniques comme les signes cliniques et les résultats d’autres tests biologiques et/ou
radiographiques l’évaluation du risque de progression vers une sepsie grave chez les patients lors de la première journée
d’admission dans un service de soins intensifs.
Résumé et explication : L’endotoxine ou lipopolysaccharide (LPS) est un constituant majeur de la paroi cellulaire des bactéries
Gram négatives et elle constitue le principal produit bactérien Gram négatif responsable de la sepsie grave1-2. Des niveaux élevés
d’endotoxine provoquent des modifications de l’expression de plus de 300 gènes, l’activation des macrophages, des neutrophiles,
des cellules endothéliales et de la cascade de coagulation, qui mènent à la cascade de la sepsie3.
Ce dosage utilise la réponse biologique des neutrophiles présents dans le sang d’un patient vis-à-vis d’un complexe
immunologique constitué d’endotoxine et d’un anticorps exogène comme mesure de l’activité de l’endotoxine chez ce patient 4. Le
dosage réagit spécifiquement avec le LPS des bactéries Gram négatives et ne présente pas de réaction croisée avec les constituants
de la paroi cellulaire des bactéries Gram positives et d’autres micro-organismes.
Le dosage doit être utilisé en association avec :
A) des cultures microbiologiques conventionnelles et autres tests diagnostiques pertinents comme l’échographie, la radiographie
thoracique, la bronchoscopie ou la tomodensitométrie pour faciliter « l’exclusion » d’un infection Gram négative infection en
apportant rapidement des informations diagnostiques supplémentaires.
B) tous les résultats cliniques et biologiques disponibles dont le jugement du médecin afin de déterminer le risque de sepsie
grave.
Principe : Le dosage EAAest un dispositif de test rapide qui mesure l’activité de l’endotoxine dans le sang total. Ce test est basé
sur la réaction entre l’endotoxine et un anticorps spécifique anti-endotoxine. Les protéines du complément opsonisent le complexe
endotoxine-anticorps. Le complexe immun opsonisé sensibilise les neutrophiles présents dans le sang pour accroître leur
stimulation du métabolisme oxydatif en réponse au zymosan. La stimulation du métabolisme oxydatif des neutrophiles donne des
oxydants qui réagissent avec le luminol dans le mélange réactionnel pour émettre une chimioluminescence. Cette
chimioluminescence peut alors être détectée par un luminomètre compteur de photons.
Une mesure de l’activité initiale (Tube 1) en l’absence de l’anticorps anti-endotoxine spécifique permet de connaître la stimulation
non spécifique du métabolisme oxydatif des neutrophiles du patient. Une mesure de contrôle supplémentaire comportant
l’anticorps anti-endotoxine spécifique et un excès d’endotoxine exogène (Tube 3) permet de connaître la stimulation maximum du
métabolisme oxydatif des neutrophiles du patient. La mesure test (Tube 2) comporte l’anticorps spécifique pour mesurer le niveau
net de l’activité de l’endotoxine. La valeur du dosage EAAest calculée en normalisant la chimioluminescence dans l’échantillon
de test (Tube 2) par rapport à la chimioluminescence maximum (Tube 3), en corrigeant les deux mesures de la
chimioluminescence de l’activité initiale (Tube 1).
Prélèvement et préparation des échantillons : Cette procédure nécessite des échantillons de sang total prélevé sur EDTA. Les
directives recommandées par le NCCLS6 doivent être respectées lors du prélèvement, du transport et du traitement des échantillons
de patient. Les échantillons doivent être recueillis dans des tubes à prélèvement sanguin contenant un anti-coagulant, l’EDTA, par
ponction veineuse ou via un cathéter à demeure. En cas de prélèvement via une canule ou un cathéter artériel ou veineux à
demeure, veuillez rincer les tubulures conformément aux normes de votre établissement avant de prélever le sang dans le tube
approprié. Les échantillons de sang peuvent être conservés jusqu’à 180 minutes à température ambiante entre18 25 C avant
analyse. Le sang doit être soigneusement mélangé par inversion pendant au moins 20 à 30 secondes immédiatement avant
l’analyse. Il est nécessaire de disposer d’un minimum de 2,5 ml de sang total pour réaliser le dosage du patient (1,0 ml de sang du
patient) et le dosage de CQ (1,0 ml) qui peuvent être réalisés sur des échantillons indépendants.
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Matériels fournis :
N° de cat.
Plateaux EAA*
Tests de contrôle
qualité EAA*
Flacon de réactif
EAA**
Mode d’emploi
EAA20-1
4
1
2
Oui
EAQC-5***
0
5
1
Oui
* Les plateaux EAA™ et les tests de CQ sont contenus dans une poche scellée. Voir ci-dessous une description du contenu de
chaque type de test. ** Voir ci-dessous une description du contenu de chaque flacon.
*** Configuration de pièces d'équipement de l'EAQC-5 pour effectuer des contrôles de la qualité supplémentaires.
*Chaque plateau EAAcontient les réactifs suivants en quantité suffisante pour réaliser 5 tests en double :
Contenu
Étiquette
10 tubes contenant des stabilisants et du luminol-zymosan
(Tube 1)
(Tube 2)
10 tubes contenant 1,0-2,0 g d’anticorps monoclonal murin
anti-endotoxine, des stabilisants et du luminol-zymosan
(Tube 3)
10 tubes contenant 1,0-2,0 g d’anticorps monoclonal murin
anti-endotoxine, des stabilisants et du luminol-zymosan
(Tube LPS MAX)
5 tubes contenant 2,3 ng d’endotoxine (E coli 055:B5) et des
stabilisants
5 tubes vides
(Tube Aliquot)
* Chaque test individuel de contrôle qualité EAAcontient les réactifs suivants :
Contenu
Étiquette
2 tubes contenant des stabilisants et du luminol-zymosan
(Tube 1)
(Tube 3)
2 tubes contenant 1,0-2,0 g d’anticorps monoclonal murin
anti-endotoxine, des stabilisants et du luminol-zymosan
(Tube Contrôle haut)
1 tube contenant 1,0-2,0 g d’anticorps monoclonal murin antiendotoxine, des stabilisants et du luminol-zymosan
(Tube Contrôle bas)
1 tube contenant 1,0-2,0 g d’anticorps monoclonal murin, des
stabilisants et du luminol-zymosan
1 tube contenant 2,3 ng d’endotoxine (E coli 055:B5) et des
(Tube LPS MAX CQ)
stabilisants
1 tube vide
(Tube Aliquot CQ)
** Chaque flacon de réactif EAAcontient environ 70 ml de réactif EAArenferment de l’HBSS et de l’héparine en
quantité suffisante pour une trousse.
Conservation et stabilité du réactif : Ne pas utiliser la trousse EAA™ au-delà de sa date de péremption. Ne pas mélanger des
composants provenant de trousses différentes portant des numéros de lots différents. Conserver la trousse EAA™ entre 2 et 8C
ou sortir les flacons de réactif EAA™ pour les conserver entre 2 et 8C et les poches non ouvertes à température ambiante.
Composants du test EAA™
Température
Stabilité
Plateaux du dosage EAA
Non ouvert
Température ambiante (18-25 C)
Jusqu’à la date de péremption
2– 8 C
30 jours
Refermer hermétiquement après
ouverture
Test EAA™ CQ individuel
Température ambiante (18-25 C)
Jusqu’à la date de péremption
Réactif EAA
Non ouvert
2– 8 C
Jusqu’à la date de péremption
Ne pas congeler
2– 8 C
30 jours
Refermer hermétiquement après
ouverture
Ne pas congeler
Ouvert, refermé
hermétiquement
Flacon ouvert
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Matériels supplémentaires nécessaires:
1. Combipipette, capable de délivrer des volumes de 40 l et 1000 l volumes et une micropipette capable de délivrer un volume
de 500 l.
2. Embouts pour combipipette et micropipette stériles
3. Chronomètre
4. Tubes pour prélèvement sanguin sur EDTA
Avertissements et précautions générales :
ATTENTION :
Matériaux de l'appareil :
L'appareil contient des matériaux qui ne sont pas classés comme dangereux en raison de leur nature physique et chimique ou
de leur concentration en solution, conformément aux réglementations OSHA fédérales (États-Unis) et de la Californie, au
Système d'information sur les matières dangereuses utilisées au travail (SIMDUT, Canada), ainsi qu'à la directive
2008/98/CE du Parlement européen et du Conseil du 19 novembre 2008 relativement aux déchets, abrogeant certaines
directives.
1. Relativement aux réactifs contenus dans la trousse, il n'existe aucun risque direct sur la santé reconnu.
2. Recourir aux précautions générales de laboratoire lors de la manipulation et l'entreposage des matières de l'appareil
inutilisées.
3. Uniquement pour utilisation diagnostique in vitro.
4. L'EAAMC contient des réactifs lyophilisés fixés sur des billes dans les tubes à essais. Dans certaines conditions (emballage
endommagé, mauvais scellement des poches ou mauvaise conservation) ces réactifs peuvent se rétracter en présence d’un
excès d’humidité. Ne pas utiliser les tubes qui contiennent des billes rétractées car les résultats des tests peuvent être
erronés.
5. Utiliser des embouts de pipette individuels afin d’éliminer les contaminations lors du pipetage manuel des échantillons ou
des contrôles.
Matériaux d'appareil usagés :
6. Respecter les précautions universelles recommandées en matière de manipulation de réactifs ou d’échantillons d’origine
humaine usagés.
7. Manipuler ou éliminer les réactifs EAA et tout produit sanguin humain comme s’ils étaient potentiellement capables de
transmettre des agents infectieux.
8. Ne pas pipeter les solutions avec la bouche.
9. Nettoyer immédiatement les éclaboussures avec une solution d’hypochlorite de sodium à 0,5 %.
Procédure de dosage EAA™ – Voir le mode d’emploi en Annexe A
Procédure de CQ EAA™ – Voir le mode d’emploi en Annexe B
Interprétation des résultats du dosage EAA:
A) Exclusion d’une infection Gram négative
Le test EAAest un dosage de l’activité de l’endotoxine avec une valeur seuil numérique d’exclusion d’une infection Gram
négative fixée à 0,40.
Les résultats inférieurs à 0,40 (0,00-0,39) étayent l’absence d’infection Gram négative chez les patients d’un service de soins
intensifs présentant une suspicion d’infection.
Comme pour tous les tests diagnostiques, chaque laboratoire doit établir sa propre valeur seuil diagnostique afin d’assurer une
représentation correcte de populations spécifiques et de refléter les pratiques et les critères actuels en matière d’infections Gram
négatives dans leurs établissements.
B) Évaluation du risque de sepsie grave
Les résultats 0,4 sont indicatifs d’une endotoxémie. De nombreux facteurs peuvent provoquer une élévation des niveaux
circulants d’endotoxine. Il peut s’agir d’une infection Gram négative invasive et de la translocation de l’endotoxine depuis la
lumière intestinale. L’endotoxine est le principal produit bactérien Gram négatif responsable du choc septique.
Un diagnostic précis des causes primaires et secondaires des endotoxémies nécessite des approches cliniques et diagnostiques
afin de déterminer leurs causes exactes et les traitements appropriés.
Le dosage EAAest destiné à aider à l’évaluation du risque de développement chez un patient d’une sepsie grave pendant les
premières heures critiques qui suivent son admission dans un service de soins intensifs, les résultats de ce test étant plus utiles
quand ils sont envisagés en même temps que d’autres facteurs de risque de sepsie. Le dosage EAAn’est pas destiné au diagnostic
différentiel d’un état septique en cours. Lors d’une étude clinique prospective, multicentrique, contrôlée (voir Performances
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3 sur 8
cliniques ci-dessous) le risque de développement d’une sepsie grave parmi les patients d’un service de soins intensifs a été étudié
et les résultats de l’étude ont étayé les critères interprétatifs d’évaluation des risques suivants :
• Les patients testé le premier jour de leur admission dans le service de soins intensifs dont le résultat du dosage EAAétait 0,60, présentaient un risque trois fois plus élevé de développer une sepsie grave au cours des 24 heures suivantes que les sujets
dont le résultat du dosage EAAétaient < 0,40 (0,00-0,39).
Les résultats inférieurs à 0,40 unités EAAindiquaient un faible niveau d’activité de l’endotoxine. Des résultats de cet ordre
représentaient un faible risque d'évolution vers une sepsie grave.
• La sepsie grave est un syndrome qui a plus d’une cause. De faibles niveaux d’activité de l’endotoxine ne permettent pas
d’exclure la possibilité de développement d’une sepsie grave à partir de déclencheurs non endotoxémiques. Par
conséquent, dans un tel contexte, les médecins doivent être encouragés à se concentrer sur les causes non endotoxémiques
de la sepsie. Le dosage EAA™ doit être utilisé en association avec d’autres informations cliniques.
Des résultats compris entre 0,40 et 0,59 unités EAAindiquent un niveau intermédiaire d’activité de l’endotoxine et un risque
élevé d’évolution vers une sepsie grave.
• Les patients de cette plage intermédiaire ont un rapport des cotes pour la sepsie grave de 2,0 par rapport aux patients qui
présentent de résultats du dosage EAA™ faibles.
Un résultat supérieur ou égale à 0,60 unités EAA™ indique un niveau élevé d’activité de l’endotoxine.
• Les patients de cette plage élevée ont un rapport des cotes pour la sepsie grave de 3,0 par rapport aux patients qui présentent
de résultats du dosage EAA™ faibles.
• Des niveaux élevés de l’endotoxine peuvent être associés à d’autres états pathologiques chez les patients gravement atteints
comme le choc (9) et l’hypoxémie (10). L’endotoxémie a des propriétés pathogènes chez les patients souffrant d’une atteinte
hépatique (11,12), les patients au stade post-opératoire (13, 14,15) et les patients faisant l’objet d’une circulation
extracorporelle (16).
•
Bien que des niveaux accrus d’endotoxine puissent ne pas constituer le seul facteur de risque de sepsie grave, leur présence à
des niveaux graduels, faible (0,00-0,39 unités EAA), intermédiaire (0,40-0,59 unités EAA) et élevé (0,60 unités EAA)
est fortement associée à la présence de l’affection. La figure ci-dessous présente les intervalles choisis pour les résultats du
dosage EAA et les rapports des cotes pour le développement d’une sepsie grave ainsi que l’évaluation statistique des
différences entre les trois niveaux. De plus, la tendance parmi les trois niveaux d’endotoxémie est constante et hautement
statistiquement significative (p< 0,0001).
Figure 1. Rapports des cotes pour la
sepsie grave et le niveau d’endotoxémie
Rapports des cotes pour la sepsie grave
3,5
p<0,001
p<0,05
2,5
NS
NS*
1,5
0,5
0,0–0,30 0,30–0,39 0,40–0,49 0,50–0,59
Faible
Intermédiare
Niveau EAA
EPIBv2F-0411
4 sur 8
0,60–0,69 070–1,0
Élevé
*NS= différences non statistiquement significatives entre les rapports des cotes des déciles des niveaux EAAà l’intérieur du
niveau EAAintermédiaire et à l’intérieur du niveau EAAélevé. Remarquez, cependant, que les différences entre les niveaux
EAA, faible versus intermédiaire et intermédiaire versus élevé sont statistiquement significatives.
Limitations :
Analytiques
1. Comme pour tous les immunodosages ou réactions immunochimiques il convient de procéder avec le plus grand soin.
2. L’utilisateur doit être avertit des effets possibles sur les résultats des interférences potentielles dues à des médicaments ou
à des substances endogènes inconnues. Voir Substances interférentes ci-dessous.
Cliniques
1. Le dosage EAAne doit pas être utilisé hors des services de soins intensifs car ses performances n’ont pas été validées en
dehors de ce cadre.
2. Le dosage EAAne doit pas être utilisé à d’autres moments que lors du premier jour d’admission dans un service de
soins intensifs car ses performance n’ont pas été validées en dehors de ce cadre.
3. Des observations de résultats positifs vis-à-vis de l’endotoxine chez des patients ne présentant pas de sepsie grave ont
déjà été rapportées dans des études publiées.
4. Les résultats du dosage EAAdoivent être évalués dans le contexte des résultats biologiques du patient et en fonction de
son état clinique global. Dans le cas où les résultats biologiques sont en désaccord avec le tableau clinique ou les
antécédents du patient, des tests supplémentaires doivent être mis en œuvre.
Résultats attendus :
A) Exclusion d’une infection Gram négative
Le test EAAest un dosage de l’activité de l’endotoxine avec une valeur seuil numérique d’exclusion d’une infection Gram
négative fixée à 0,40. Les résultats inférieurs à 0,40 (0,00-0,39) étayent l’absence d’infection Gram négative chez les patients d’un
service de soins intensifs présentant une suspicion d’infection.
L’essai Multi-Center Endotoxin Detection in Critical illness (MEDIC) est une étude observationnelle, multicentrique, prospective,
réalisée dans 10 services de soins intensifs (ICU) d’hôpitaux universitaires en Amérique du Nord et en Europe. L’essai MEDIC a
été mis en œuvre afin d’évaluer les performances du dosage EAApar rapport à la détermination par culture des infections Gram
négatives invasives. Les patients éligibles étaient ceux qui présentaient une suspicion clinique d’infection plus une prescription de
culture diagnostique.
Les infections Gram négatives invasives ont été identifiées par culture chez 36 sur 465 (8 %) des patients évaluables. En utilisant
une valeur seuil < 0,40 pour le dosage EAA, le test a donné les résultats suivants :
Pas d’infection gram
négative
Infection gram négative
répondant aux critères
*CEC
Total
< 0,40 (0,00-0,39) EAA
134
8
142
0,40 (0,40-1,00) EAA
295
28
323
Total
429
36
465
NPV (IC à 95 %)
94,4 (88,4 – 97,8)
Sensibilité (IC à 95 %)
77,8 (56,3 – 92,1)
Spécificité (IC à 95 %)
31,2 (25,3 – 37,7)
PPV (IC à 95%)
8,7 (5,8 – 12,3)
*Comité d’évaluation clinique : Toutes les cultures présentant une croissance bactérienne ont été examinées par un comité (CEC) à
l’aide de règles explicites d’adjudication afin d’obtenir un accord en ce qui concerne la présence ou l’absence d’infection.
Comme pour tous les tests diagnostiques, chaque laboratoire doit établir sa propre valeur seuil diagnostique afin d’assurer une
représentation correcte de populations spécifiques et de refléter les pratiques et les critères actuels en matière d’infections Gram
négatives dans leurs établissements.
Les résultats 0,40 sont indicatifs d’une endotoxémie. De nombreux facteurs peuvent provoquer une élévation des niveaux
circulants d’endotoxine.
Il peut s’agir d’une infection Gram négative invasive et de la translocation de l’endotoxine depuis la lumière intestinale.
L’endotoxine est le principal produit bactérien Gram négatif responsable du choc septique. Au cours de l’étude MEDIC, les
patients qui présentaient un niveau d’EAA 0,60 ont eu un rapport des cotes pour la sepsie grave de 3,0 (voir Évaluation des
risques de sepsie grave ci-dessous).
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Un diagnostic précis des causes primaires et secondaires des endotoxémies nécessite des approches cliniques et diagnostiques
afin de déterminer leurs causes exactes et les traitements appropriés.
B) Évaluation du risque de sepsie grave
Le dosage EAAest une évaluation de l’activité de l’endotoxine comportant trois intervalles d’endotoxémie : faible < 0,40 (0,00
0,39) unités EAA™, intermédiaire 0,40-0,59 unités EAA™ et élevé 0,60 unités EAA™.
% des patients
Figure : Histogramme des valeurs de l’EAAchez des sujets sains
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
Niveau EAA
Un niveau d’EAAde 0,40 représente une valeur supérieure de +2 écart-types au-dessus de la moyenne. Dans une population de
sujets sains, 93 % d’entre eux ont un niveau d’EAAinférieur à cette valeur. Il est donc raisonnable de supposer qu’un niveau de
0,40 représente une valeur seuil conservatrice au-dessous de laquelle la plupart des individus doivent être « sains ». De plus, un
niveau d’EAAde 0,60 représente une valeur supérieure de +4 écart-types au-dessus de la moyenne. Des variations individuelles
de la valeur initiale peuvent se produire. De façon inattendue, de légères élévations de l’endotoxine ont été rapportées dans certains
états ambulatoires comme des périodontités7 ou chez les fumeurs de cigarettes. Aucun des volontaires n’a présenté un niveau
d’EAAmesuré 0,60. Comme tel, ceci représente une valeur significative au-dessus duquel le niveau d’EAApeut être indicatif
d’un processus indésirable sous-jacent.
Performances cliniques : L’essai Multi-Center Endotoxin Detection in Critical illness (MEDIC) est une étude observationnelle,
multicentrique, prospective, réalisée dans 10 services de soins intensifs (ICU) d’hôpitaux universitaires en Amérique du Nord et en
Europe. La présence d’une endotoxémie a été évaluée lors du premier jour de séjour des patients dans le service de soins intensifs
afin de déterminer les chances de développer une sepsie grave au cours des 24 heures qui suivent l’admission dans le service de
soins intensifs. La population cible de l’Étude d’évaluation des risques comportait tous les patients éligibles enrôlés dans l’essai
MEDIC lors du premier jour d’admission dans le service de soins intensifs admission qui disposaient d’échantillons évaluables,
N=857. Les données démographiques des patients sont présentées dans le tableau suivant.
Données démographiques et caractéristiques initiales des patients analysés
Caractéristiques
Âge : moyenne (E-T) médiane [IQR]* années
60 (17) 62 [49, 74]
Sexe (% masculin)
58,9 %
Race (% non caucasien)
15,8 %
APACHEII : moyenne (E-T) médiane [IQR]*
15,2 (9,5) 14 [8, 21]
Durée du séjour dans l’ICU : moyenne (E-T) médiane [IQR]*
5,4 (± 10,9) 2,0 [1, 5]
Durée du séjour à l’hôpital : moyenne (E-T) médiane [IQR]*
23,3 (± 27,0) 1,0 [7,29]
Mortalité dans l’ICU
13,3 %
Mortalité à l’hôpital
19,9 %
*IQR = étendue interquartile
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6 sur 8
La population des patients en soins intensifs constitue l’environnement clinique le plus approprié pour l’évaluation du dosage
EAA. L’utilité du dosage EAAn’a été validée que pour la population des patients en soins intensifs. La relation entre les
niveaux d’endotoxine et le risque de développement d’une sepsie grave chez les patients gravement malades est destinée à apporter
un complément aux informations cliniques actuellement disponibles afin d’établir le risque de sepsie grave au cours du premier
jour d séjour dans les services de soins intensifs.
Résultats du dosage EAAet risque de sepsie grave au cours des 24 premières heures dans l’ICU
Résultats du dosage EAA
Faible
< 0,40 (0,00-0,39)
Intermédiaire
0,40-0,59
Élevé
0,60 (0,60-1,00)
Incidence des sepsies
graves au cours des
24 premières heures
4,9 %
Rapport des cotes
IC à 95 %
Chi2, valeur de p
9,2 %
2,0
1,02-3,78
4,3, <0,05
13,4 %
3,0
1,65-5,41
14,2, <0,001
Parmi les 857 patients évalués, 214 patients présentaient des valeurs de l’EAA (0,60) au Jour 1 mais n’ont pas évolué
vers une sepsie grave au Jour 1. Les états cliniques pertinents susceptibles d’avoir contribué à l’endotoxémie chez ces patients sont
les suivants : choc (n=30), hypoxémie (n=127), insuffisance rénale chronique (n=25) et état post-opératoire (n=54). Certains
patients ont présenté plus d’un de ces états.
Performances :
Substances interférentes :
•
Des taux de triglycérides jusqu’à 1000 mg/dl n’interfèrent pas avec le dosage EAA. À des concentrations en triglycérides
supérieures à 1500 mg/dl une diminution des valeurs de l’EA a été observée. Les échantillons fortement lipémiques ne
doivent pas être utilisés pour les dosages EAA.
•
L’hémoglobine à 100 mg/dl n’interfère pas avec le dosage EAAalors que des taux de 500 mg/dl atténuent les valeurs
faibles du dosage EAAde moins de 0,03 unités et les valeurs élevées du dosage EAA de 15 % en moyenne. Les
échantillons fortement hémolysés ne doivent pas être utilisés pour les dosages EAA.
•
Une perfusion exogène d’albumine exempte d’endotoxine chez des patients à des niveaux qui font augmenter la
concentration plasmatique en albumine de plus de 10 g/l au-dessus de la limite normale supérieure sont susceptibles de faire
diminuer les valeurs du dosage EAA. Les échantillons provenant de patients porteurs d’anomalies hyperprotéiniques ou
recevant des traitements par l’albumine doivent faire l’objet d’une mesure des protéines afin de s’assurer que les
concentrations élevées en albumine ne constituent par une source d’interférences avec le dosage EAA.
Précision : Les échantillons de sang total, nets et additionnés d’endotoxine endogène, ont été analysés à huit reprises chacun sur
trois instruments La répétabilité et la reproductibilité ont été calculées conformément aux
procédures du NCCLS, EP5-A.
Échantillon
N
1
2
3
4
5
6
24
24
24
24
24
24
Moyenne
EAA
0,11
0,20
0,30
0,50
0,52
0,59
Répétabilité
1E-T
0,015
0,030
0,043
0,059
0,036
0,050
% CV
14
15
15
12
7
8
Totale
1E-T
0,023
0,029
0,042
0,064
0,034
0,046
Précision
% CV
22
14
14
13
6
8
Sensibilité analytique : La précision totale a été utilisée pour estimer la sensibilité de la méthode EAAsur un échantillon de
patient faiblement présentant un niveau faible. Vingt-quatre déterminations EAAont été réalisées sur un échantillon de patient
unique présentant un niveau faible de EAA; huitmesures sur chacun des trois instruments. Le niveau moyen du dosage EAA
du patient était de 0,11 avec un E-T de 0,023.Le sensibilité, calculée par la méthode des deux écart- types, a été ainsi estimée à
0,046 unités EAA.
Spécificité analytique : L’endotoxine provenant des bactéries Gram négatives, E. coli 055:B5, P. aeruginosa, K. pneumoniae, S.
enterides, E. coli 0127:B8, S. marcescens et S. flexnevi a induit une augmentation des niveaux de EAAde 0,10 à 0,52 quand
100 pg/ml d’endotoxine ont été ajoutés à un échantillon de sang dont le niveau net moyen était de 0,33 unités EAA. De plus, des
préparations de V. cholerae LPS ont produit des augmentations statistiquement significatives des valeurs de EA. Aucune réactivité
n’a été observée jusqu’à 2000 pg/m d’extraits d’acide lipotéichoïque provenant des souches suivantes de bactéries Gram positives :
EPIBv2F-0411
7 sur 8
S. mutans, S. pyogenes, S. sanguis, S. faecalis, S. aureus et B. subtilis. De même, il n’a été observé aucune réactivité avec le
mannane des levures jusqu’à 2000 pg/ml et avec les extraits de paroi cellulaire de C. albicans et A. fumagatis.
EPIBv2-04
Linéarité des résultats : Le dosage a été optimisé pour être hautement sensible à de faibles niveaux d’endotoxine et pour résister
à un effet crochet à haute dose induit par des niveaux extrêmement élevés d’endotoxine. Par conséquent, la courbe présente un
aspect curvilinéaire. Quand les échantillons de patient contiennent de faibles niveaux d’endotoxine, de petites augmentations de
ces niveaux vont se traduire par des accroissement significatifs des valeurs du dosage EAA. Il n’est pas nécessaire de procéder à
des dilutions pour les échantillons qui ont généré des valeurs élevées du dosage EAA.
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