MODE D’EMPLOI –
MILIEUX EN FLACONS
PARTIELLEMENT
TERMINES
BA-257103.01
Rev.: June 2003
BD Tetrathionate Broth Base •
BD Iodine Solution (for Tetrathionate Broth Base)
APPLICATION
Lorsqu’elle est complémentée avec une BD Iodine Solution, la BD Tetrathionate Broth Base
(base de bouillon de culture au tétrathionate) constitue un milieu d’enrichissement sélectif pour
les Salmonella spp. provenant de selles humaines et de divers aliments. Lorsqu’il est
complémenté, ce milieu est aussi désigné sous le nom de TT Broth.
PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE
Méthode microbiologique.
Les Salmonella spp. provoquent plusieurs types d’infection, de la gastro-entérite légère, jusqu’à
la fièvre typhoïde, dont le diagnostic peut être vital.1 La forme de maladie la plus commune
associée à la Salmonella est la gastro-entérite spontanément résolutive, dont les symptômes
sont une fièvre durant moins de deux jours et une diarrhée durant moins d’une semaine.1
Mueller a démontré l’efficacité du Tetrathionate Broth, qui apporte un enrichissement des
bacilles typhoïdiques et paratyphoïdiques tout en inhibant les microorganismes coliformes.2 En
utilisant une préparation modifiée du bouillon de Mueller, Kauffmann a réussi à augmenter le
nombre d’isolats positifs obtenus.3,4 Le Tetrathionate Broth a été utilisé dans des études
réalisées pour l’industrie avicole, ainsi que dans une étude collective portant sur le dépistage
rapide de Salmonella dans les aliments.5-7 Ce milieu est mentionné dans les méthodes standard
pour le test de Salmonella et est aussi utilisé pour rechercher les bactéries contenues dans les
échantillons de cultures fécales.8-15
Lorsqu’elle est complémentée avec une solution à base d’iodine/iodide, la Tetrathionate Broth
Base est utilisée comme un enrichissement sélectif pour la culture des Salmonella spp.
susceptibles d’être présentes en faibles nombres et de faire concurrence à la flore intestinale.
Par conséquent, elles risquent de ne pas être détectées lors de l’ensemencement primaire des
échantillons sur des milieux différentiels sélectifs solides.
Dans la BD Tetrathionate Broth Base, la peptone de protéose fournit l’azote, le carbone, les
vitamines et les acides aminés nécessaires à la croissance. La sélectivité est obtenue par
l’association de thiosulfate de sodium et de tétrathionate, qui inhibe les microorganismes
commensaux de l’intestin.16 La formation de tétrathionate dans le milieu est provoquée par
l’ajout de l’iode et de l’iodure de potassium contenues dans la BD Iodine Solution. Les
microorganismes contenant l’enzyme tétrathionate réductase prolifèrent dans ce milieu.17 Les
sels biliaires servent d'agents sélectifs et suppriment les bactéries coliformes tout en inhibant les
bactéries à Gram positif. Le carbonate de calcium neutralise et absorbe les métabolites
toxiques, et permet de maintenir une valeur de pH stable.
REACTIFS
Formules* par litre d'eau purifiée
BD Tetrathionate Broth Base
BD Iodine Solution
Bacto peptone de protéose
5,0 g
Iode
300,0 g
Bacto sels biliaires
1,0
Iodure de potassium
250,0
Thiosulphate de sodium
30,0
Aspect : brun rougeâtre
Carbonate de calcium
10,0
pH 8,4 ± 0,2
Aspect : presque incolore à légèrement jaunâtre,
avec un précipité blanc dense
Aspect après l’ajout de solution d’iode : brunâtre, précipité dense
*Ajustées et/ou complémentées en fonction des critères de performances imposés.
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PRECAUTIONS
. A usage professionnel uniquement.
Ne pas utiliser de fioles ou de flacons présentant des signes de contamination microbienne,
décoloration, dessiccation ou fissure, ou d’autres signes de détérioration. Pour compléter la BD
Tetrathionate Broth
Base, suivre les procédures décrites sous Préparation des réactifs.
Consulter le document MODE D'EMPLOI GENERAL pour plus d'informations sur les
procédures de manipulation aseptique, les risques biologiques et l'élimination des produits
usagés.
Avertissement : BD Iodine Solution (for Tetrathionate Broth Base) : Composants
déterminant le danger devant figurer sur l’étiquette : iodine
Xn Nocif
Phrases de risque :
20/21 Toxique par inhalation et par contact avec la peau.
Phrases de sécurité :
9 Conserver le récipient dans un endroit bien ventilé.
23 Ne pas respirer les fumées ou vapeurs.
25 Eviter le contact avec les yeux.
36/37 Porter un vêtement de protection et des gants appropriés.
N Dangereux pour l’environnement
Phrases de risque :
50 Très toxique pour les organismes aquatiques.
Phrases de sécurité :
57 Utiliser un récipient approprié pour éviter toute contamination du milieu
ambiant.
STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
Dès réception, conserver les fioles de BD Tetrathionate Broth Base dans l’obscurité, entre 5 et
25 °C, jusqu’au moment de leur utilisation. Ne pas les congeler ni les surchauffer. Les fioles
peuvent être ensemencées jusqu'à la date de péremption indiquée et incubées pendant les
durées recommandées. Les fioles provenant de boîtes déjà entamées peuvent être utilisées
jusqu’à la date de péremption indiquée. Les fioles ouvertes doivent être utilisées
immédiatement.
Conserver la BD Iodine Solution entre 15 et 22 °C, dans l’obscurité ; ne pas réfrigérer.
Refermer hermétiquement. Les flacons provenant de boîtes déjà entamées peuvent être utilisés
jusqu’à la date de péremption indiquée. Les flacons ouverts peuvent être utilisés à plusieurs
reprises, jusqu’à la date de péremption indiquée, dans la mesure où ils sont refermés et
conservés correctement après chaque utilisation.
CONTROLE DE QUALITE PAR L'UTILISATEUR
Avant de l’utiliser, terminer la préparation de la BD Tetrathionate Broth Base en lui ajoutant
une solution de BD Iodine Solution (pour plus d’informations, voir METHODE – Préparation
des réactifs). Ensemencer les fioles avec 10 à 100 UFC de souches de Salmonella par fiole.
Utiliser 104 à 105 UFC pour les souches restantes. Incuber pendant 18 à 24 h à 35 ± 2 °C. Après
l’incubation, repiquer 10 à 20 µL dans des boîtes de Pétri contenant une BD MacConkey II
Agar ; incuber les boîtes pendant 18 à 24 h à 35 ± 2 °C et relever les résultats de la croissance.
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Souches
Croissance
Salmonella Typhimurium ATCC 14028
Salmonella Abony DSM 4224
Escherichia coli ATCC 25922
Enterococcus faecalis ATCC 19433
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Bonne à importante
Bonne à importante
Faible à bonne
Faible ou nulle
Faible ou nulle
Croissance après repiquage
sur BD MacConkey II Agar
Bonne à importante
Bonne à importante
Inhibition partielle
Inhibition partielle à complète
Inhibition partielle à complète
METHODE
Matériaux fournis
BD Tetrathionate Broth Base, 12 mL, fournie en fioles de 30 mL à bouchon à vis. Produits
contrôlés microbiologiquement.
BD Iodine Solution (for Tetrathionate Broth Base), 40 mL, fournie en flacons de 50 mL à
bouchon à vis.
Matériaux non fournis
Milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.
Préparation des réactifs
Pour terminer la préparation de la BD Tetrathionate Broth Base, ajouter 2 % (0,24 mL) de BD
Iodine Solution (for Tetrathionate Broth Base) par fiole (12 mL). Fermer le tube et le
mélanger doucement. Ne pas chauffer ! Noter que le sédiment blanc (carbonate de calcium) ne
se dissout pas. Une fois la solution d’iode ajoutée, le milieu terminé doit être ensemencé dans
les 2 h.
Types d'échantillons
Le Tetrathionate Broth terminé est utilisé comme bouillon d’enrichissement des Salmonella
provenant de divers échantillons d’aliments et de selles humaines (voir aussi
CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE ET LIMITES DE LA PROCEDURE).
Mode opératoire du test
Ajouter 1,0 à 3,0 g d’échantillons solides ou 1,0 à 3,0 mL d’échantillonliquide par tube de
Tetrathionate Broth terminé. Il est possible de traiter des quantités plus faibles de matière fécale
si les échantillons ont été prélevés lors de la phase aiguë d’une infection. Mélanger doucement
et incuber pendant 12 à 24 h à 35 ± 2 °C en atmosphère aérobie. Les matières alimentaires
contenant des nombres importants de contaminants doivent être incubées à 43 ± 0.2 °C, au
bain-marie. Pour plus d’informations sur les procédures appropriées pour les aliments, se
reporter aux publications citées en référence.8-12
Noter que les échantillons de selles doivent aussi être striés directement (sans enrichissement
préalable) sur des milieux d’étalement appropriés.1,14,15
Résultats
Après l’incubation, repiquer le Tetrathionate medium sur des milieux différentiels sélectifs adaptés,
comme une BD XLD Agar, une BD Hektoen Enteric Agar ou une BD MacConkey II Agar.
Consulter les publications citées en référence.1,11-15
CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE
La BD Tetrathionate Broth Base enrichie en BD Iodine Solution est un milieu standard utilisé
pour l’enrichissement des Salmonella spp. provenant d’échantillons alimentaires et de selles
humaines.1,8-15 Le Tetrathionate broth et le Rappaport-Vassiliadis medium se sont avérés être
les milieux les plus sensibles pour les matières alimentaires comportant de faibles comptes de
Salmonella.18
Les besoins nutritionnels des microorganismes étant variables, il est possible que certaines
souches de Salmonella se développent peu, voire pas du tout, sur ce milieu. Les techniques
d’isolement doivent toujours inclure plusieurs types de bouillon d’enrichissement et de milieu
d’isolation. Consulter les publications citées en référence.1,14,15
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Pour une identification complète, les isolats obtenus à partir de ce milieu doivent être soumis à
des tests biochimiques et sérologiques supplémentaires.1,14,15
REFERENCES
1. Bopp, C.A., Brenner, F.W., Fields, P.I., Wells, J.G., and N.A. Strockbine. 2003. Escherichia,
Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H.
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paratyphiques. C. R. Soc. Biol. 89:434. Paris.
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Salmonellabacillen. Z. Hyg. Infektionskr. 117:26.
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Salmonella in foods: collaborative study. J. Assoc. Off. Anal. Chem. 77:374-383.
8. Andrews, W. H., G. A. June, P. S. Sherrod, T. S. Hammack, and R. M. Amaguana. 1995. Salmonella.
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examination of food, 3rd ed. American Public Health Association, Washington, D.C.
10. Flowers, R. S., W. Andrews, C. W. Donnelly, and E. Koenig. 1993. Pathogens in milk and milk
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United States Pharmacopeial Convention. Rockville, MD.
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Microbiology, Washington, D. C.
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Rappaport-Vassiliadis medium for the recovery of Salmonella spp. from foods with a low microbial
load. J. Food Prot. 62: 16-21.
CONDITIONNEMENT
BD Tetrathionate Broth Base (milieu en flacons, partiellement complété)
No réf. 257103
50 unités par
carton
Volume de remplissage 12 mL ; en fioles de 30 mL à
bouchon à vis
BD Iodine Solution (pour Tetrathionate Broth Base) (milieu en flacons partiellement terminé)
No réf. 257199
1 unité par
carton
Volume de remplissage 40 mL ; en flacons de 50 mL à
bouchon à vis
INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES
Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD.
BA-257103.01
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BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
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Becton Dickinson France SA
11 rue Aristide Bergès
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292
http://www.bd.com
BD and BD logo are trademarks of Becton, Dickinson and Company.
Bacto is a trademark of Difco Laboratories, division of Becton, Dickinson and Company.
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
2003 Becton, Dickinson and Company
BA-257103.01
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