Certains antigènes présents dans ce tableau sont dérivés du
même précurseur et peuvent avoir des épitopes en commun.
Ceci doit être pris en compte lors de l’interprétation du schéma,
par exemple
Consortium for Retrovirus Serology
Standardization -CRSS (Consortium
pour la standardisation des tests
sérologiques sur rétrovirus) 1988 USA
American Red Cross (Croix rouge
américaine) 1988 USA
Chinese Center for Disease Control
and Prevention (CCDCP) 2004 Chine
National and State Reference
Laboratories (NRL) 1987 Australie
Société allemande de lutte contre
les maladies virales (DVV)
1. Il est improbable de détecter gp41 en l’absence de gp160
car gp160 est la forme polymérique de gp41 et la
concentration en gp160 est plus élevée que celle en gp41
dans le test HIV BLOT 2.2 de MPD. Le gp41 apparaît sous
la forme d’une bande diffuse. Une bande nette et étroite au
niveau de la région du gp41 ne doit pas être interprétée
comme étant une bande gp41. De nombreux prélèvements
normaux et non infectés par le VIH présentent une réaction
positive à cet antigène non-VIH, ce qui a probablement pour
origine la lignée cellulaire humaine utilisée pour la croissance
du virus VIH.
ASTPHLD a été rebaptisé Association of Public Health
Laboratories en 1998
Pour l’interprétation du test HIV BLOT 2.2 de MPD, nous
recommandons les critères définis ci-dessous. Les résultats
doivent être enregistrés pour chaque bande détectée et être
interprétés comme étant NÉGATIFS, POSITIFS ou
INDÉTERMINÉS.
3. Les bandes POL p66, p51 et p31 sont généralement
détectées simultanément. La sensibilité des p66 et p31 est
toutefois plus importante que celle de la p51.
4. La réactivité croisée du VIH-2 est variable mais présente
généralement une réactivité aux antigènes GAG et/ou POL.
Une réactivité croisée avec la bande gp160 est toutefois
possible dans certains cas, mais rarement avec la gp41.
PROFIL DE L’ÉCHANTILLON
5. Il existe également une bande de poids moléculaire élevé
d’environ 160 KD qui est supposée correspondre à une
protéine précurseur GAG-POL. Ceci est observé avec
certains sérums à fort titrage en anti-VIH-2 ou indéterminés
(réactivité GAG seulement) mais la bande apparaît alors
nette et étroite, contrairement à la bande diffuse
correspondant à la gp160 ENV.
INTERPRÉTATION
Aucune bande virale spécifique
n’est présente
NÉGATIF
Détection d’anticorps p17
UNIQUEMENT, pas d’autre bande
NÉGATIF
Détection de 2 ENV
(gp160/gp41 et gp120) et GAG
(p17, p24, p55) ou POL (p31, p51, p66)
Détection de 2 ENV
(gp160/gp41 et gp120) et GAG
(p17, p24, p55) ou POL
(p31, p51, p66) et bande spécifique
au VIH-2 visible
Le processus d’interprétation se déroule comme suit :1. S’assurer que la bande de contrôle est visible. En l’absence
de cette bande de contrôle, les résultats doivent être
considérés comme invalides du fait d’ une erreur technique
telle que l’oubli de l’échantillon, du conjugué ou du substrat.
2. Identifier le poids moléculaire de chaque bande visible sur
la bandelette en utilisant comme référence les contrôles
POSTIFS FORT et/ou FAIBLE.
3. L’interprétation de la bandelette est ensuite basée sur la
présence de bandes spécifiques selon les recommandations
des autorités compétentes (à savoir le ministère de la santé,
l’Organisation Mondiale de la Santé, etc.).
POSITIF AU VIH-1
POSITIF AU VIH-1
avec
VIH-2 POSSIBLE
Bandes virales spécifiques
présentes mais profil ne remplissant
pas les critères de POSITIVITÉ
Bandes virales spécifiques
présentes, profil ne remplissant
pas les critères de POSITIVITÉ,
mais bande spécifique au VIH-2
visible
Les recommandations applicables pour l'interprétation peuvent
varier en fonction des politiques locales. MPD recommande de
suivre la législation en vigueur dans le pays où le test est utilisé.
Cer tains des critères recommandés par différentes
organisations internationales sont répertoriés ci-dessous:
Association of State and Territorial
Public Health Laboratory Directors /
Centers for Disease Control
(ASTPHLD1/CDC), 1989 USA
Centre National de Transfusion
Sanguine
Organisation Mondiale de la Santé
(OMS) 1990
GAG, POL et ENV, une bande de
chaque
Deux bandes ENV ou une bande
ENV avec P24
Une bande ENV avec au moins
une des bandes GAG ou POL
Une bande ENV avec au moins une
bande GAG ou POL, voir aussi DIN
58 969, section 41.
1
2. La bande p55 est généralement détectée en présence d’une
forte réactivité au p24 et/ou au p17. Les bandes apparaissant
comme p42 et p39 correspondent toutes deux à des
fragments de GAG et ne doivent pas être interprétées
comme gp41 (ENV).
ORGANISATION
Une bande ENV avec p24 ou p31
INDÉTERMINÉ2
INDÉTERMINÉ2
avec
VIH-2 POSSIBLE
2
INTERPRETATION DES RESULTATS POUR LES TESTS
INDETERMINES:
Les résultats INDETERMINES ne doivent pas être utilisés
comme base de diagnostic de l'infection HIV1. En se basant
sur le fait que la plupart des personnes ayant un résultat initial
INDETERMINE et qui sont infectés avec le virus HIV1 vont
développer en moins d'un mois des anticorps HIV détectables,
le CDC (2001) a recommandé que de telles personnes soient
retestées plus ou moins un mois plus tard. Les personnes dont
le résultat INDETERMINE persiste après un mois ne sont
probablement pas infectées sauf si une exposition récente au
virus est suspectée.
CRITÈRES
D'INTERPRÉTATION
POSITIVE DES TESTS
WESTERN BLOT
Au moins 2 bandes parmi P24, gp41
gp120/160
Deux bandes ENV(2) avec GAG ou
POL
Deux bandes ENV avec ou sans GAG
ou POL
D'après une récente étude de FIEBIG et al (2003), bien que la
fenêtre de détection pour une infection primaire à HIV1 puisse
atteindre 22 jours, l'évolution du Blot d' INDETERMINE à
franchement POSITIF ne prend pas plus que 8 jours. De plus,
ce laboratoire affirme que les Western Blot INDETERMINE sont
toujours accompagnés d'ARN HIV1 détectables dans le cas
de réelles infections. Inversement, aucune séroconversion ne
s'est avérée lors du suivi de personnes ayant été testées
positives avec un Western Blot INDETERMINE, une fois
confirmées comme négatives par la PCR (Sethoe et al, 1995).
Donc il est raisonnable de considérer les personnes ayant un
résultat Western Blot INDETERMINE avec un test ARN négatif
comme probablement non infectés par le VIH, surtout quand
les individus testés sont connus comme n'étant pas "à risque".
prélèvement au bout de deux à six mois. De plus anticorps
anti-p24 et anti-p31 augmentent au cours de l’évolution du
SIDA, faisant passer l’interprétation du blot de POSITIF à
INDÉTERMINÉ. En pareil cas, l’interprétation des résultats doit
être fondée sur les tests de blot consécutifs et les évaluations
cliniques.
En raison de sa nature hautement spécifique, l’absence de
réactivité des échantillons au peptide d’enveloppe spécifique
au VIH-2 dans le cadre d’un profil indéterminé ne doit pas
exclure la possibilité d’une infection avec d’autres souches de
VIH-2.
En particulier, les personnes testées INDETERMINE en
Western Blot et ayant été testés avec un ELISA de 4ème
génération devraient de plus subir le test ARN utilisant une
base moléculaire comme le RT-PCR couvrant les HIV 1/2/O. Si
nécessaire, un suivi doit être mené un mois plus tard avec un
test supplémentaire. La seule raison d'utiliser la technique
ELISA de 4ème génération est la détection simultanée des
antigènes et des anticorps. Par conséquent, les échantillons
identifiés comme positifs avec une technique ELISA de 4ème
génération doivent contenir ou les antigènes ou les anticorps
ou les deux. Bien que plus de 95% des cas de vrais positifs
identifiés par une technique de 4ème génération soient
réellement confirmés par Western Blot (Ly et al, 2000), un test
supplémentaire utilisant la détection ARN est apparu inévitable
pour la petite part de réactivité liée à l'antigène P24. De
nouveau, les personnes non considérées comme "à risque"
ne sont probablement pas infectées par le HIV, si elles sont
détectées positives par l'ELISA de 4ème génération avec un
Western Blot INDETERMINE et un résultat ne pouvant être
confirmé comme positif par la technique ARN couvrant les HIV
1/2/O.
Les échantillons présentant une infection possible au VIH-2
doivent être analysés plus avant à l’aide d’un test de HIV-2
Western Blot.
CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
SPÉCIFIQUES
Le fonctionnement du test HIV BLOT 2.2 de MPD de détection
des anticorps au VIH-1 ou au VIH-2 a été évalué par des essais
cliniques.
Tableau 1 : Étude de sensibilité sur la réactivité de l’antigène
viral VIH-1 avec des échantillons séropositifs au
VIH-1. (Nombre d’échantillons = 197)
Néanmoins, les tests ADN et ARN du HIV pour la détection
des acides nucléiques (NAT) n'étaient pas reconnus à des fins
de diagnostic par les autorités compétentes (US CDC, 2001;
Constantine & Zink, 2005) jusqu'il y a peu de temps. A ce jour,
un seul test qualitatif ARN est reconnu par la FDA des US pour
le diagnostic primaire des infections aigues à HIV. Donc, les
algorithmes recommandés par le CDC des US (2001) et de
l'OMS (2004) doivent encore être mis à jour et les tests acides
nucléiques (NAT) doivent y être inclus comme méthodes
permettant de résoudre les résultats INDETERMINE en
Western Blot. Cependant, le CDC des US (2001) reconnaissait
qu'en présence des spécialistes clinique et de laboratoire, les
tests nucléiques (NAT) pouvaient être utiles pour déterminer le
statut infectieux des personnes ayant un résultat en Western
Blot INDETERMINE.
PROFILE
SÉROLOGIQUE
HIV BLOT 2.2
NOMBRE (%)
GAG, POL et ENV
p24, p31, gp41
et/ou
gp120/gp160
ENV et GAG ou
POL
DUPONT/ORTHO
VIH-1 WB
NOMBRE (%)
192 (97,5 %)
188 (95,4 %)
187 (94,9 %)
179 (90,9 %)
197 (100,0 %)
197 (100,0 %)
Tableau 2 : Étude de spécificité sur la réactivité de l’antigène
viral VIH-1 avec des échantillons de donneurs
normaux et des sérums porteurs d’autres
infections virales.
LIMITES DE LA MÉTHODE
ÉCHANTILLON
(TYPE)
La détection d’anticorps du VIH-1 ne permet pas d’établir un
diagnostic du syndrome d’immunodéficience acquise (SIDA).
Un BLOT NÉGATIF n’offre pas la garantie que le virus du SIDA
n’est pas présent. Bien qu’un blot POSITIF en anticorps du
VIH-1 indique la présence d’une infection par le virus, le
diagnostic du SIDA ne peut être établi que sur un tableau
clinique selon des critères définis par le Centre de contrôle
des maladies (États-Unis), l’Organisation mondiale de la santé
ou autre organisme pertinent.
Donneurs
normaux
HTLV-1
CMV
Virus EpsteinBarr (VEB) (IgM)
Zona (IgG)
Rougeole
Rubéole
Oreillons
Adénovirus
HSV
Dengue
Total
ll est reconnu que des personnes ayant fait une séroconversion
récente peuvent présenter des profils incomplets mais elles
développent une réactivité accrue (en nombre comme en
intensité de bandes) après deux à six mois. La plupart des
Blots POSITIFS présenteront d’autres bandes virales
spécifiques visibles.
Les Blots INDÉTERMINÉS ne doivent pas être utilisés comme
base pour le diagnostic de l’infection par le VIH-1. Pour tous
les BLOTS INDÉTERMINÉS, il est recommandé de renouveler
le test sur le prélèvement d’origine et sur des échantillons
consécutifs. Les donneurs de sang dont les blots sont
INDÉTERMINÉS doivent être retestés à partir d’un nouveau
7
NOMBRE POSITIFS
3
RÉACTIVITÉ AU VIH-1
INDÉTERMINÉS3 NÉGATIFS
208
5
5
5
0
0
0
0
11
0
1
1
197
5
4
4
5
6
5
4
5
5
5
258
0
0
0
0
0
0
0
0
1
2
1
1
2
0
1
21
4
4
4
3
3
5
4
237
Tableau 3 : Étude de sensibilité de la bande peptide VIH-2
sur des échantillons séropositifs au VIH-2.
(Nombre d’échantillons = 178)
BIBLIOGRAPHIE
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Whaley, J.S. Mc Dougal, and S. Kennedy. March 1985.
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Altanta.
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transfer of proteins from polyacrylamide gels to
nitrocellulose sheets: procedure and some applications.
Proc. Natl. Acad. Sci.. USA 76: 4350-4354.
3. J. Schupbach, M. Popovic, R. V. Gilden. M.A. Gonda, M. G.
Sarngadharan and R. C. Gallo. 1984. Serological Analysis
of subgroup of Human T-Lymphotropic retroviruses (HTLVIII) associated with AIDS. Science 224, 503-505.
4. M. G. Sarngadharan, M. Popovic, L. Bruch, J. Schupbach
and R. C. Gallo. 1984. Antibodies reactive with human TLymphotropic retroviruses (HTLV-III) in the serum of patients
with AIDS. Science 224, 506-608.
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recommendations for screening donated blood and plasma
for antibody to the virus causing Acquired Immune
Deficiency Syndrome” - United States Morbidity and
Mortality Weekly Report 34 (1) :1-5.
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interpreting results from Western blot assays for HIV-1,
HIV-2, and HTLV-I/HTLV-II, Weekly Epidemiological
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of a new human retrovirus from West African patients with
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cross-reactivity in Western Blot for HIV-1 and HIV-2 may
not indicate dual infection. Lancet 11:927-930.
10. Bottiger B., A. Karlsson, F. Andreasson et al. 1990. Envelope
cross-reactivity between Human Immunodeficiency Virus
Type 1 and Type 2 detected by different serological methods:
Correlation between cross-neutralization and reactivity
against the main neutralizing site. J. Virol. 64(7):3492-3499.
11. Centers for Disease Control. 2001. Revised Guidelines
for HIV Counseling, Testing, and Referral and Revised
Recommendations for HIV Screening of Pregnant Women
— United States, Morbid. Mortal. Weekly Rep. 50: RR19.
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Schumacher, L. Peddada, C. Heldebrant, R. Smith, A.
Conrad, S. H. Kleinman, and M. P. Busch. 2003. Dynamics
of HIV viremia and antibody seroconversion in plasma
donors: implications for diagnosis and staging of primary
HIV infection. AIDS. 17:1871-1879.
13. Ly, T. D., C. Edlinger, and A. Vabret. 2000. Contribution of
combined detection assays of p24 antigen and antihuman immunodeficiency virus (HIV) antibodies in
diagnosis of primary HIV infection by routine testing. J
Clin Microbiol. 38:2459-2461.
14. Sethoe, S. Y., A. E. Ling, E. H. Sng, E. H. Monteiro, R. K.
Chan. 1995. PCR as a confirmatory test for human
immunodeficiency virus type 1 infection in individuals with
indeterminate western blot (immunoblot) profiles. J Clin
Microbiol. 33:3034-3036.
15. Constantine, N. T. and H. Zink. 2005. HIV testing
technologies after two decades of evolution. Indian J Med
Res. 121:519-538.
16. World Health Organization. 2004. Guidelines for HIV
Diagnosis and monitoring of antiretroviral therapy.
Regional Office for South-East Asia, New Delhi, India.
Réactivité peptide VIH-2
VIH-2 Western Blot :
Profile sérologique@
Positif
Négatif
GAG, POL et 2 ENV
GAG, POL et 1 ENV
160
18
0
0
@
Sérums trouvés positifs avec le nouveau test LAV Blot 2 de
Pasteur. Résultats fournis par Dr Oliviero E. Varnier et Dr Flavia
Lillo. Laboratoire des rétrovirus humains. Université de Gênes.
Tableau 4 : Étude de spécificité de la bande peptide VIH-2
sur des sérums séropositifs au VIH-1, des
échantillons de donneurs normaux et des sérums
porteurs d’autres infections virales.
TYPE
D’ÉCHANTILLON
NOMBRE
RÉACTIVITÉ PEPTIDE VIH-2
Séropositifs au VIH-1
Donneurs normaux
Séropositifs au HTLV-1
CMV
Virus Epstein-Barr
(VEB) (IgM)
Zona (IgG)
Rougeole
Rubéole
Oreillons
Adénovirus
HSV
Dengue
Total
197
208
5
5
5
POSITIFS
16a
0
0
0
0
5
6
5
4
5
5
5
455
0
0
0
0
0
0
0
16
NÉGATIFS
181
208
5
5
5
5
6
5
4
5
5
5
439
a
Testés avec HIV-2 Western Blot de MPD, 6 de ces échantillons
sont apparus réactifs aux ENV et GAG ou POL, 9 de ces
échantillons ont eu une réactivité uniquement avec GAG et/ou
POL et un échantillon était négatif.
Le test HIV Blot 2.2 de MPD a été pratiqué sur 15 panels
commerciaux de séroconversion au VIH-1. Les résultats ont
montré que le test était capable de détecter les anticorps au
VIH plus précocement ou dans le même échantillon pour tous
les panels.
LIMITES DE GARANTIE
Le fabricant ne garantit la trousse de test que pour un usage
diagnostique in vitro sous réserve que soient respectées les
spécifications et limites décrites dans le mode d’emploi du
produit et que celui-ci soit utilisé conformément aux présentes
instructions. Le fabricant décline toute responsabilité, explicite
ou implicite, y compris celle, implicite ou explicite, liée à la qualité
marchande, l’aptitude à l’emploi ou le fonctionnement implicite
à une fin particulière. Le fabricant ne peut s’engager que sur
un remplacement ou un remboursement du produit. Le fabricant
ne peut être tenu responsable par l’acheteur ou toute autre
partie d’aucune détérioration, blessure ou perte financière
résultant de l’utilisation du produit.
PROBLÈMES TECHNIQUES / RÉCLAMATIONS
Dans l’éventualité d’un problème technique / d’une réclamation,
procéder comme suit :
1. Noter le numéro de lot de la trousse, la date de péremption
et le numéro de lot de la bandelette.
2. Conserver les trousse set les résultats obtenus.
3. Contacter le bureau MP Biomedicals le plus proche ou votre
distributeur local.
Tous présentaient une bande p24 ou p17 seulement.
9
8
TABLEAU DE DÉPANNAGE
FIGURE 1
a
MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd.
85 Science Park Drive
#04-01, The Cavendish
Singapore Science Park
Singapour 118259
Tél. : + 65 6775 0008
Fax : + 65 6775 4536
Courriel : [email protected]
b
c
gp 160
gp 120
d
Des points
sombres se
développent sur
les bandelettes
p 66
p 55
p 51
Medical Technology Promedt
Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert
Allemagne
Tél. : + 49 68 94 58 1020
Fax : + 49 68 94 58 1021
Courriel : [email protected]
p 31
Bureaux régionaux :
p 24
p 17
* États-Unis Brevet 5 721 095
Contrôle
sérique
VIH-2
* Le nom et le logo Genelabs sont concédés
sous licence par Genelabs Technologies, Inc.
a. Contrôle positif fort (réactif au
VIH-1 et au VIH-2)
b. Contrôle positif faible (réactif
uniquement au VIH-1)
c. Contrôle négatif
d. Sérum typique séropositif au
VIH-2
10
Des marques
blanches se
développent sur les
bandelettes
1.L’échantillon est trop fort et
réagit à des quantités
insignifiantes d’intermédiaires.
2.L’échantillon interagit avec les
protéines H-9 présentes dans
la préparation virale (HLA,
ABC, DR, par exemple).
3.Bandes légitimes (antigène
d’enveloppe déglycosylé)
identifiées à environ 80-90 kD
dans certains échantillons de
test.
1.Bandelettes retournées
au cours du test.
2.Plaques mal lavées
avant utilisation.
3.Faible dissolution de la
poudre de blotting.
4.Interférence par
électrotransblot au
cours de la fabrication.
1.Contamination
bactérienne ou
fongique de
l’échantillon de test.
2.Précipitation de
complexes immuns
dans un échantillon
de test ancien.
3.Contamination
bactérienne ou
fongique sur la
bandelette en raison
d’une conservation
inadaptée.
4.Bandelettes
physiquement
endommagées,
craquelées ou
rayées.
5.Bandelettes mal
lavées entre les
étapes du test.
Des bandes autres que la
bande de contrôle sérique
se développent sur le
contrôle négatif
Une forte coloration de fond se
développe sur la bandelette en
l’absence ou la présence de
bandes positives
Vérifier le
contrôle positif
gp 41
p 39
MP Biomedicals
Parc d’Innovation, BP 50067
67402 ILLKIRCH CEDEX
France
Tél. : +33 388 67 46 07
Fax : +33 388 67 54 20
Courriel : [email protected]
Les bandes attendues
ne se développent pas
ou sont de faible
intensité
Des bandes non
spécifiques n’indiquant
pas d’infection possible
au VIH-2 se développent
Contrôle positif OK
Le problème est probablement
dû aux réactifs.
Le problème est probablement
dû à l’échantillon de test.
1.Réactifs incorrectement
préparés.
2.Mauvaise dilution du
conjugué.
3.Réactifs instables en raison
d’une exposition à une
température inappropriée.
4.Conjugué contaminé par de
l’IgG humain.
5.pH incorrect du substrat
causé par une exposition à
une forte lumière à ultraviolet
ou un réducteur.
6.Plaques, réactif(s) ou eau
contenant une forte
concentration de phosphate.
7.Utilisation d’un plateau rotatif
au lieu d’un plateau à
bascule.
1.Mauvaise dilution de
l’échantillon de test.
2.Échantillon de test contaminé
par le conjugué.
3.Échantillons de test contenant
une forte concentration de
complexes immuns.
4.IgG de l’échantillon de test
détérioré ou dénaturé par des
cycles répétés de congélationdécontamination ou une
conservation inadaptée.
5.Utilisation d’un plateau rotatif
au lieu d’un plateau à bascule.
6.Il s’agit d’un échantillon de test
ELISA « faux » positif.
11
Bande nette et étroite
au niveau de la
région du gp41
Des bandes non
spécifiques et/ou une
coloration de fond sombre
se développent sur les
bandelettes
Absence de bande
de contrôle sérique
Les cupules de plaque ou
le contrôle ont fait l’objet
d’une contamination
croisée.
1.Bandelettes
surdéveloppées (arrêter
la réaction plus tôt).
2.Lavage incomplet.
Contrôle positif faible
Les bandelettes
sont défectueuses
1.Sérum non ajouté.
2.Bandelettes retournées au
cours du test.
3.Conjugué non ajouté.
4.Substrat non ajouté.
Marques aqueuses
sur les bandelettes
développées
1.Elles sont craquelées.
2.Elles contiennent des
bulles d’air provoquant
l’apparition de points
blancs dans les zones
réactives ; points
suffisamment gros pour
empêcher toute
détection.
3.Elles présentent des
points sombres causés
par un développement
fongique lors de
l’ouverture initiale des
tubes de bandelettes.
Toutefois, si des points
sombres se développent
après l’ouverture initiale
du tube, le problème
provient de conditions de
conservation inadéquates
au site de l’utilisateur.
1.Bandelettes laissées à
sécher après l’étape
de prétrempage, avant
l’ajout du tampon de
blotting.
1.Il ne s’agit pas de la
région du gp41 car le
gp41 apparaît sous la
forme d’une bande
diffuse.
2.Ne pas interpréter
comme étant gp41.
3.Il s’agit probablement
d’une protéine de
lignée cellulaire, p42.
1.Mauvaise dilution de
l’échantillon de test ou
du conjugué.
2.Incubation de
l’échantillon de test/du
réactif trop longue.
3.Lavage incomplet au
cours du test.
4.Température d’incubation
supérieure à 30 °C.
5.Échantillon de test réactif
aux protéines non
virales.
12
">
