MODE D'EMPLOI – MILIEUX
EN BOITES DE PETRI
PRETS A L'EMPLOI
PA-254400.02
Rev.: June 2003
BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood •
BD Bordetella Agar with Charcoal and 7% Horse Blood
APPLICATION
La BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood (gélose de Bordet Gengou avec 15 % de
sang de mouton) et la BD Bordetella Agar with Charcoal and 7% Horse Blood (gélose
Bordetella contenant du charbon de bois et 7 % de sang de cheval) sont des milieux sélectifs
servant à l'isolement de Bordetella pertussis et de B. parapertussis.
PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE
Méthode microbiologique.
Toutes les espèces Bordetella sont des agents pathogènes des voies respiratoires résidant
dans les cellules épithéliales ciliées de l'appareil respiratoire. B. pertussis et B. parapertussis
sont des agents pathogènes connus uniquement chez l'humain. B. pertussis est la principale
cause de coqueluche. B. parapertussis est associée à une forme bénigne de cette maladie. B.
bronchiseptica est principalement un agent zoopathogène mais peut toutefois générer des
bronchites, des pneumonies et des infections des voies extra-respiratoires chez l'humain.
La base de gélose de Bordet Gengou est une modification du milieu décrit à l'origine par Bordet
et Gengou pour la culture de Bordetella pertussis.1 La BD Bordet Gengou Agar with 15%
Sheep Blood est préparée selon une formule modifiée recommandée par l'association de santé
publique américaine (American Public Health Association).2 Dans ce milieu, une infusion à base
de pommes de terre procure de l'azote et des vitamines. De nombreux composants sont
susceptibles d'inhiber la croissance de B. pertussis, notamment les acides gras présents dans
les sécrétions nasales ou sur le coton de l'écouvillon de prélèvement. L'amidon, provenant de
l'infusion de pommes de terre, absorbe les acides gras. Le glycérol est une source de carbone.
Le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du milieu. L'ajout de 15 % de sang de
mouton procure les facteurs de croissance complexes essentiels.
La BD Bordetella Agar with Charcoal and 7% Horse Blood est basée sur la formule de
Mishulow et al., lesquels ont découvert qu'elle constituait un substitut efficace à la gélose de
Bordet Gengou. 3 Ce milieu, ayant par la suite fait l'objet d'un développement plus poussé, est à
présent connu sous le nom de base de gélose charbon Regan-Lowe.4 Dans celui-ci, l'extrait de
bœuf et la peptone de gélatine fournissent les éléments nutritifs. L'amidon et le charbon de bois
servent quant à eux à absorber les acides gras toxiques, les radicaux et les peroxydes,
remplaçant ainsi l'infusion de pommes de terre dans la gélose de Bordet Gengou. La niacine est
une vitamine favorisant la croissance. Le sang de cheval fournit des facteurs de croissance
complexes et diminue encore l'effet toxique des peroxydes.
De la céfalexine est ajoutée à la BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood et à la BD
Bordetella Agar with Charcoal and 7% Horse Blood. Elle sert d'agent sélectif pour éliminer
partiellement la flore bactérienne normale des voies respiratoires.5,6
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REACTIFS
Formules* par litre d'eau purifiée
BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep
Blood
Pommes de terre, infusion de
4,5 g
solides
Digestion pancréatique de
5,0
caséine
Digestion peptique de tissu
5,0
animal
Chlorure de sodium
5,5
Gélose
20,0
Céfalexine
0,04
Glycérol
10,0 mL
Sang de mouton défibriné
15 %
pH 7,2 ± 0,2
BD Bordetella Agar with Charcoal and
7% Horse Blood
Extrait de bœuf
10,0 g
Digestion pancréatique de
gélatine
Amidon soluble
10,0
10,0
Charbon de bois (activé)
4,0
Chlorure de sodium
5,0
Niacine (acide nicotinique)
0,01
Céfalexine
0,04
Sang de cheval défibriné
7%
Gélose
12,0 g
pH 7,4 ± 0,2
*Ajustées et/ou complémentées en fonction des critères de performances imposés.
PRECAUTIONS
. A usage professionnel uniquement.
Ne pas utiliser les boîtes si elles présentent des signes de contamination microbienne,
décoloration ou dessiccation, ou d'autres signes de détérioration.
Consulter le document « MODE D'EMPLOI GENERAL » pour connaître les procédures de
manipulation aseptique, les risques biologiques, ainsi que les méthodes d'élimination des
produits utilisés.
STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
Dès réception, conserver les boîtes de Pétri dans l'obscurité entre 2 et 8 °C dans leur
emballage d'origine, jusqu'au moment de leur utilisation. Ne pas les congeler ni les surchauffer.
Les boîtes peuvent être ensemencées jusqu'à leur date de péremption (voir étiquette sur
l'emballage) et incubées pendant le délai d'incubation recommandé.
Des boîtes provenant d’une pile ouverte de 10 boîtes sont utilisables pour une semaine
lorsqu’elles sont conservées entre +2 et +8 °C dans un endroit propre.
CONTROLE DE QUALITE PAR L'UTILISATEUR
Ensemencer les échantillons représentatifs avec les souches ci-dessous (pour plus
d'informations, voir le document « MODE D'EMPLOI GENERAL »). Incuber en atmosphère
aérobie dans une chambre humide pendant 5 à 7 jours, à une température comprise entre 35 et
37 °C. Ne pas incuber en atmosphère aérobie enrichie en dioxyde de carbone.
Souches
BD Bordet Gengou Agar
BD Bordetella Agar +
with 15% Sheep Blood
Charcoal + 7 % Horse
Blood
Croissance moyenne à
Croissance bonne à
Bordetella pertussis
ATCC 9797
importante
importante
Croissance moyenne à
Croissance bonne à
Bordetella parapertussis
ATCC 15311
importante
importante
Inhibition partielle à complète
Inhibition partielle à complète
Streptococcus pneumoniae
ATCC 6305
Inhibition partielle à complète
Inhibition partielle à complète
Streptococcus pyogenes
ATCC 19615
Non ensemencé
Rouge foncé teinté de marron, Noir brillant teinté de rouge,
opaque
opaque
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METHODE
Matériaux fournis
BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood ou BD Bordetella Agar with Charcoal
and 7% Horse Blood, toutes deux fournies en boîtes de Pétri Stacker de 90 mm. Produit
soumis à contrôle microbiologique.
Matériaux non fournis
Milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.
Types d'échantillons et prélèvement
La méthode consistant à analyser les expectorations pour diagnostiquer la coqueluche n'est plus
recommandée.7 Des sécrétions obtenues par prélèvement au niveau du rhinopharynx postérieur
ou bien par lavage ou écouvillonnage rhino-pharyngien (alginate de calcium sur une poignée
avec câble) doivent être recueillies au cours de la première semaine de toux paroxysmale.3 Ne
jamais utiliser d'écouvillon en coton ! Il est recommandé de procéder par aspiration pour
prélever ces sécrétions. Ne jamais utiliser d'échantillon prélevé sur la gorge. Des milieux de
transport spéciaux, basés sur le charbon de bois, ont été décrits. Même si des milieux de
transport sont utilisés, les échantillons doivent impérativement être remis au laboratoire aussi
vite que possible. Les temps de transport supérieurs à 24 h réduisent considérablement la
viabilité de Bordetella. Pour plus d'informations, consulter les documents cités en référence.6,8,9
Mode opératoire du test
Ensemencer les boîtes de Pétri sans attendre, dès l'arrivée des échantillons au laboratoire, et
les diluer par striation. Incuber les boîtes à l'air ambiant dans une chambre humide (p. ex. dans
un récipient BD GasPak contenant de l'eau dans un bécher) pendant 7 à 10 jours, et les
examiner chaque jour à l'aide d'une loupe. Ne pas incuber en atmosphère aérobie enrichie en
dioxyde de carbone car le gaz risquerait d'éliminer le microorganisme. La température
d'incubation optimale est comprise entre 34 et 36 °C. Une température plus élevée risquerait
de réduire le développement de Bordetella.6
Résultats
Après une durée d'incubation suffisante, les colonies de B. pertussis de la BD Bordet Gengou
Agar with 15% Sheep Blood et de la BD Bordetella Agar with Charcoal and 7% Horse
Blood sont petites, blanches, bombées et étincelantes ; leur aspect est similaire à des perles
coupées en deux. Dans la BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood, les colonies de B.
pertussis et de B. parapertussis peuvent présenter une faible bêta-hémolyse en périphérie.
CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE
La BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood et la BD Bordetella Agar with Charcoal
and 7% Horse Blood sont des milieux sélectifs approuvés pour l'isolement des espèces
Bordetella, notamment B. pertussis et B. parapertussis.6,9 Les données les plus récentes
encouragent l'utilisation du milieu basé sur le charbon de bois.6,10,11
Ces milieux comprennent de la céfalexine, qui inhibe de nombreuses bactéries Gram positives
et certaines bactéries Gram négatives présentes dans la flore normale de la gorge. Toutefois,
elle n'inhibe pas complètement tous les microorganismes.5,6
Bordetella bronchiseptica peut se développer dans ces milieux. Il s'agit d'un pathogène
opportuniste pouvant également générer des infections respiratoires.12
Des tests supplémentaires sont nécessaires pour l'identification complète de Bordetella
pertussis et de B. parapertussis. Le test de l'immunofluorescence directe, pouvant également
être utilisé en parallèle avec une culture pour la détection directe des agents à partir des
échantillons, peut aussi être utilisé pour confirmer les isolats obtenus dans ces milieux.6,8,9
REFERENCES
1. Bordet, J., and D. Gengou. 1906. Le microbe de la coqueluche. Ann. Inst. Pasteur 20:731.
2. Kendrick, P. L., E. Eldering, and W. L. Bradford. 1970. Whooping cough. In H. L. Bodily, E. L.
Updyke, and J. O. Mason (ed.), Diagnostic procedures for bacterial, mycotic and parasitic
infections, 5th ed. American Public Health Association, New York, NY.
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3. Mishulow, L., L. S. Sharpe, and L. L. Cohen. 1953. Beef-heart charcoal agar for the
preparation of pertussis vaccines. Am. J. Public Health, 43:1466.
4. Regan, J., and F. Lowe. 1977. Enrichment medium for the isolation of Bordetella. J. Clin.
Microbiol. 6: 303-309.
5. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical
bacteria, vol. 1, p. 86-92. Williams & Wilkins, Baltimore, MD.
6. Loeffelholz, M.J. 2003. Bordetella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A.
Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
7. Chievitz, J., and A. H. Meyer. 1916. Recherches sur la coqueluche. Ann. Inst. Pasteur
30:503
8. Baron, E. J., L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey & Scott’s diagnostic
microbiology, 9th ed. Mosby-Year Book, Inc., St. Louis, MO.
9. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
10. Hoppe, J.E., and R. Vogl. 1986. Comparison of three media for culture of Bordetella
pertussis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 5: 361-363.
11. Hoppe, J. E. 1988. Methods for isolation of Bordetella pertussis from patients with whooping
cough. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 7: 616-620.
12. Woolfrey, B. F., and J. A. Moody. 1991. Human infections associated with Bordetella
bronchiseptica. Clin. Microbiol. Rev. 4: 243-255.
CONDITIONNEMENT
BD Bordet Gengou Agar with 15% Sheep Blood
No réf. 254400
Milieux en boîtes de Pétri prêts à l'emploi, 20 unités
BD Bordetella Agar with Charcoal and 7 % Horse BloodBD Bordetella Agar with Charcoal
and 7 % Horse Blood
No réf. 256054
Milieux en boîtes de Pétri prêts à l'emploi, 20 unités
INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES
Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
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Becton Dickinson France SA
11 rue Aristide Bergès
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292
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PA-254400.02
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