Note d'application
Flux de travail ultrarapide
pour les études de linéarité CIH
Un flux de travail ultrarapide pour les études de linéarité CIH grâce à la
préparation automatisée d'étalons et à l'analyse UHPLC
Introduction
Selon la Conférence internationale sur l'harmonisation des exigences techniques relatives à l'homologation des produits pharmaceutiques à usage humain (CIH), il est nécessaire de tester la linéarité
des méthodes d'analyse dans le cadre d'une étude de validation de méthode. Le processus classique
consiste à préparer des étalons pour 5 niveaux d'étalonnage différents et à réaliser 3 injections de chacun de ces étalons. La plage de concentration type utilisée est égale à 70 à 130 % de la concentration
nominale.
Statistiquement, il est recommandé de préparer chaque niveau de concentration individuellement, afin
de répartir de façon aléatoire les sources potentielles d'erreur (ex. : un pesage incorrect de l'un des
étalons). De nombreux laboratoires préparent une solution de base, puis la diluent selon les 5 niveaux
différents de concentration. Cette méthode de préparation d'étalons est la plus rapide, mais présente
un inconvénient majeur : toute erreur dans la solution de base se répercute sur tous les étalons dilués.
Méthodes
Certaines méthodes de chromatographie comprennent plusieurs analytes, la linéarité de chacun
devant être testée. Ceci augmente considérablement le temps (et les risques d'erreur) de préparation
manuelle, ainsi que les risques d'erreurs pour l'approche étalon de base/dilution.
Une meilleure méthode consiste à automatiser la préparation des
étalons à l'aide du système Quantos de METTLER TOLEDO, qui dose
et pèse automatiquement les analytes dans des flacons HPLC ou des
fioles volumétriques.
Il peut également peser la quantité appropriée de diluants pour offrir
une solution gravimétrique. Ceci présente de nombreux avantages pour
les études de linéarité, les principaux étant sa rapidité et la possibilité
d'utiliser l'approche statistiquement correcte pour la préparation
individuelle de chaque concentration d'étalon.
Système de dosage de poudres et de liquides
Quantos
Dans cette expérimentation, nous avons testé la linéarité de 5 analytes
de boissons sans alcool : l'acésulfame K, la saccharine, la caféine, la
vanilline et le benzoate. Le système Quantos a pesé automatiquement
la quantité correcte de chaque analyte, puis de diluant (eau/méthanol
90/10) pour obtenir les concentrations indiquées dans le tableau 1.
Cette analyse a été réalisée sur le système automatisé Dionex UltiMate® 3000 Basic, un système
d'entrée de gamme totalement compatible avec les analyses UHPLC. La CIH exige de déterminer les
valeurs suivantes : coefficient de corrélation, point d'interception sur l'axe des y, pente de la courbe de
régression et somme des carrés des résidus.
Flux de travail d'étude de linéarité CIH
Les laboratoires doivent également
vérifier que le coefficient de corrélation
est conforme aux limites attendues de
la méthode (généralement ≥ 0,999).
La réalisation de ces calculs peut
prendre beaucoup de temps. Certains
laboratoires utilisent des feuilles de
calcul Excel pour accélérer le processus, mais cette démarche peut elle
aussi être longue, car les utilisateurs
doivent retranscrire manuellement les
valeurs et une autre personne doit vérifier cette transcription.
Pour cette analyse, l'utilisation de
feuilles de calcul et la vérification
requise prendraient environ 2 heures.
Le système de données de chromatographie Chromeleon® de Dionex peut
totalement automatiser cette tâche et
générer immédiatement la totalité des
résultats pour tous les analytes. Il suffit
à l'utilisateur de nommer les pics et
d'entrer leurs concentrations, un processus prenant seulement 5 minutes.
La Figure 2 représente le rapport
généré automatiquement pour l'analyte
« saccharine ».
Étalon 1
7,390
2,695 2,800
6,285
14,050
Étalon 2
9,730
3,480
3,700
8,110
18,100
Étalon 3
9,930
3,890
3,995
8,995
19,965
Étalon 4 11,450 4,305
4,355
9,860
21,910
Étalon 5
13,650
5,085
5,220
11,655
25,855
Tableau 1 : Concentrations d'analytes de boissons sans alcool préparés par le Quantos QB1-L
Figure 1 : Analyse de 5 analytes de boissons sans alcool en moins de 5 minutes
Figure 2 : Rapport de linéarité pour la saccharine
Analyte Acésulfame K Saccharine
Caféine
Vanilline
Benzoate
Système UltiMate 3000 RSLC
Analyte Acésulfame K Saccharine
Caféine
Vanilline
Benzoate
R2
0,99973
0,99989
0,99939
0,99939
0,99964
Étape Temps requis (ancien processus)
Prép. d'échantillons 180 minutes
Analyse
450 minutes
Résultats
120 minutes
Total
750 minutes
Temps requis
(nouveau processus)
50 minutes
75 minutes
5 minutes
130 minutes
Tableau 2 : Coefficient de corrélation de tous les
analytes
Tableau 3 : Temps requis pour une expérimentation de linéarité avec le processus traditionnel et le
nouveau processus automatisé
Résultats
L'automatisation du flux de travail
grâce à la combinaison du système de
dosage Quantos de METTLER TOLEDO
avec le système UltiMate 3000 et
le logiciel Chromeleon de Dionex a
délivré des résultats exceptionnels
pour l'étude de linéarité, comme le
montre le Tableau 2. Celui-ci indique
le coefficient de corrélation de tous les
analytes, la valeur R2 de chacun étant
supérieure à 0,999.
Les laboratoires d'analyse peuvent
ainsi optimiser considérablement
leur productivité, comme le montre le
Tableau 3.
Mettler-Toledo AG
Pesage et analyse en laboratoire
CH-8606 Greifensee
Tél. : +41 44 944 2211, Fax : +41 44 944 3170
Auteur : Fraser McLeod, Dionex Corporation, Allemagne
Jan Prochnow, Michalis Meyer, METTLER TOLEDO, Suisse
Sous réserve de modifications techniques
© 01/2011 Mettler-Toledo AG
Imprimé en Suisse
Global MarCom Greifensee
Conclusions
Comme l'indique le Tableau 3, le temps
requis pour réaliser l'expérimentation à
l'aide du processus traditionnel est de
12h30, contre seulement 130 minutes
avec le processus automatisé, rendu
possible par l'association d'instruments
et d'outils logiciels de METTLER TOLEDO
et de Dionex.
www.mt.com/quantos
Pour plus d'informations
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