Thermo Scientific SS14 Brucella abortus Mode d'emploi

Sérums d’agglutination
de Brucella
F
R30164801
R30164901
1. DOMAINE D’APPLICATION
Les sérums d’agglutination de Brucella (Brucella abortus et
Brucella melitensis) sont destinés à être utilisés dans des
tests quantitatifs d’agglutination en tube pour l’identification
sérologique des cultures de Brucella1 à des fins épidémiologiques
et diagnostiques. On peut également les utiliser comme
antisérums témoins pour les suspensions colorées de Brucella
(SS14/R30855501 et SS15/R30953501).
(0,5%). Chaque flacon, doté d’une tétine et
d’un compte-gouttes, contient 2 ml de liquide
et est fourni prêt à l’emploi.
Lors de leur conservation, il arrive que
certains sérums se troublent légèrement.
Ceci n’indique pas nécessairement leur
détérioration et ne provoque normalement
pas d’interférences avec les résultats ; les
sérums peuvent cependant être clarifiés
par centrifugation ou par filtration à travers
une membrane (0,45 µm) avant l’emploi.
Les sérums fortement troubles sont
nécessairement contaminés et doivent être
jetés.
5. PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D’EMPLOI
Les antisérums fournissent uniquement une identification
sérologique ; l’identification complète d’un organisme doit se
faire uniquement en association avec un test biochimique.
Destiné exclusivement au diagnostic in vitro.
2. REsumE et explication du test
Les antigènes de surface de Brucella sont répartis en deux
catégories : A et M. La plupart des souches de Brucella abortus
et B. suis ont un rapport antigènes A/antigènes M élevé,
contrairement à la plupart des souches de B. melitensis.1,2
Les antisérums sont préparés à partir de souches homogènes
représentatives de B. abortus et B. melitensis et sont absorbés
de façon à ce que le premier réagisse plus intensément avec les
souches à forte proportion d’antigène A, et le second avec les
souches à forte proportion d’antigène M. La réactivité différentielle
peut être détectée au moyen de tests d’agglutination en tube,
utilisant chacun des deux sérums dirigés contre une suspension
du type d’organismes testés. Normalement, il devrait y avoir une
différence d’au moins le quadruple entre les titres obtenus avec
les deux antisérums.
S’il vous plaît se référer à la fiche de données de sécurité et
l’étiquetage du produit pour obtenir des informations sur les
composants potentiellement dangereux.
3. PRINCIPE DE LA METHODE
Les tests sérologiques sont basés sur le fait que les anticorps
contenus dans le sérum, produits en réponse à l’exposition à
des antigènes bactériens, agglutinent visiblement les bactéries
portant les antigènes homologues.
4. REactifs
COMPOSITION DU COFFRET
Sérums d’agglutination de Brucella
Brucella abortus
Brucella melitensis
1 flacon compte-gouttes
ZM01/R30164801
ZM02/R30164901
(2 ml)
DESCRIPTION, PREPARATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION
RECOMMANDEES
Voir également le paragraphe Précautions et restrictions d’emploi.
Les sérums doivent être conservés entre 2 et 8°C pour maintenir
leur activité au moins jusqu’à la date inscrite sur le flacon.
Réservé exclusivement à un usage professionnel.
INFORMATIONS DE SECURITE
1.
Manipuler les cultures de Brucella conformément aux
directives appropriées en vigueur.
2.
L’équipement non jetable doit être stérilisé en utilisant une
procédure appropriée après l’emploi, bien que la méthode
la plus appropriée soit la stérilisation par autoclave pendant
au moins 15 minutes à 121°C. Le matériel à usage unique
doit être stérilisé par autoclave ou incinéré.
3.
Les éclaboussures de matériaux potentiellement infectieux
doivent être éliminées immédiatement à l’aide d’un
papier absorbant et les surfaces contaminées doivent être
nettoyées avec un désinfectant anti-bactérien standard ou
de l’alcool à 70%. Le matériel utilisé pour le nettoyage des
éclaboussures, y compris les gants, doit être éliminé comme
s’il s’agissait de déchets biologiquement dangereux.
4.
Ne pas effectuer de pipetages à la bouche. Pour manipuler
les échantillons et effectuer le test, porter des gants à usage
unique et une protection des yeux. Une fois le test terminé,
se laver soigneusement les mains.
5.
Ces réactifs contiennent du phénol. Bien que sa concentration
soit faible, le phénol est connu comme étant toxique par
ingestion et par contact avec la peau. Ne pas avaler les
réactifs. Si l’un d’entre eux entre en contact avec la peau
ou les yeux, laver la surface en rinçant immédiatement et
abondamment à l’eau.
6.
Conformément aux bonnes pratiques de laboratoire, il est
fortement recommandé de traiter les échantillons et réactifs
comme s’ils étaient potentiellement infectieux et de les
manipuler avec toutes les précautions nécessaires.
PRECAUTIONS D’ANALYSE
1.
Sérums d’agglutination de Brucella
Il s’agit de sérums de lapin contenant des
anticorps anti-Brucella abortus (ZM01/
R30164801) et anti-Brucella melitensis
(ZM02/R30164901). Conservateur : Phénol
2.
3.
Ne pas utiliser les antisérums au-delà de la date de péremption
indiquée. Eviter la contamination microbiologique des
antisérums, ceci pouvant provoquer des résultats erronés
et réduire la durée de vie du produit.
Ne pas modifier la procédure du test ni le temps d’incubation
ou les températures.
Après emploi, replacer les sérums à la température de
conservation recommandée.
6. PrElEvement, transport et conservation des
Echantillons
Pour l’utilisation de cultures de Brucella, s’assurer que les cultures
sont récentes et proviennent de milieux non-sélectifs. En cas
d’utilisation de sérums comme témoins pour les suspensions
colorées de Brucella, les conserver entre 2 et 8°C.
7. ProcEdure
MATERIEL FOURNI
Voir le paragraphe Composition du coffret.
MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI
1.
Les suspensions colorées de Brucella sont disponibles dans
des flacons de 5 ml de liquide :
Brucella abortus
Brucella melitensis
Réf. SS14/R30855501
Réf. SS15/R30953501
2.
Sérum physiologique à 0,85%.
3.
Anse bactériologique et bec bunsen.
4.
Source de lumière sur fond sombre.
5.
Tubes à essai et portoir.
6.
Bain-marie réglé à 37°C.
7.
Chronomètre.
8.
Pipettes de 100 µl à 1 000 µl.
9.
Sérum physiologique additionné de phénol (0,5%).
PROCEDURE DU TEST
Agglutination en tube – culture inconnue
Etape 1 Mettre en suspension une fraction de culture pure
dans du sérum physiologique additionné de phénol
à 0,5%, à raison d’environ 5 ml par inclinaison.
Chauffer la suspension à 60°C pendant une heure afin
d’inactiver les organismes et après refroidissement,
ajuster l’opacité de la suspension à l’aide de sérum
physiologique additionné de phénol de façon à obtenir
environ 2 x 109 organismes par ml.
Etape 2 Préparer une rangée de dilutions de sérum pour chaque
test, par exemple une rangée de sérum B. abortus
et une rangée de sérum B. melitensis pour chaque
organisme inconnu (voir tableau 1), en utilisant du
sérum physiologique (0,85%) comme diluant. Mélanger
le contenu du tube 1 et transférer 0,5 ml dans le tube
2 puis mélanger et transférer 0,5 ml dans le tube 3 et
ainsi de suite jusqu’au tube 8 non inclus ; terminer en
éliminant 0,5 ml du tube 7.
Tableau 1
3
Tube Nº
1
2
3
4
5
6
7
8
Sérum
physiologique 0,9 0,5 0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
(ml)
Sérum (ml)
0,1
Dilutions en série de 0,5 ml
0
Dilution finale 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 Témoin
Etape 3 Introduire 0,5 ml de la suspension dans chaque tube.
Etape 4 Bien mélanger le contenu des tubes, et laisser incuber
à 37°C pendant 24 heures avant la lecture des résultats.
Etape 5 Observer l’apparition éventuelle d’une agglutination
et lire sur un fond sombre.
Agglutination en tube – suspension colorée
Cette méthode peut être utilisée pour contrôler l’activité des
antisérums, ou en tant que contrôle de l’activité des suspensions
lors d’un test de Widal.
Etape 1 Préparer une rangée de dilutions de sérum pour chaque
test (voir tableau 2), en utilisant du sérum physiologique
à 0,85% comme diluant. Mélanger le contenu du tube
1 et transférer 1 ml dans le tube 2 puis mélanger et
transférer 1 ml dans le tube 3 et ainsi de suite jusqu’au
tube 8 non inclus ; terminer en éliminant 1 ml du
tube 7.
Tableau 2
Tube Nº
1
2
3
4
5
6
7
8
Sérum
physiologique 1,9 1,0 1,0
1,0
1,0
1,0
1,0
1,0
(ml)
Sérum (ml)
0,1
Dilutions en série de 1 ml
0
Dilution finale 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 Témoin
Etape 2 Agiter la suspension, y compris l’éventuel contenu du
compte-gouttes. Distribuer une goutte de la suspension
dans chaque tube.
Etape 3 Bien mélanger le contenu des tubes et laisser incuber à
37°C pendant 24 heures avant la lecture des résultats.
Etape 4 Observer l’apparition éventuelle d’une agglutination.
Il n’est pas nécessaire d’utiliser un éclairage de fond
puissant.
8. Resultats
Agglutination en tube – culture inconnue
Dans une réaction positive, une agglutination granulaire manifeste
doit apparaître. Il peut se produire un éclaircissement du liquide
et un sédiment qui monte sous forme de masse granulaire, puis
se redépose au fond du tube lorsqu’on donne une chiquenaude
à celui-ci. Dans le cas d’une réaction négative ainsi que pour le
sérum physiologique témoin, l’aspect de la suspension doit rester
inchangé et le sédiment doit se remettre en suspension quand on
donne une chiquenaude au tube.
Une agglutination dans le tube témoin indique une suspension de
type R (rugueux), qui n’est pas appropriée pour le test.
Agglutination en tube – suspension colorée
En cas d’agglutination dans le tube contrôle, la suspension doit
être éliminée. Les antisérums ne sont pas des sérums standard ;
le titre obtenu n’est pas toujours le titre inscrit sur le flacon, mais
il doit s’en approcher.
CONTROLE DE QUALITE
Il est recommandé de tester les sérums régulièrement selon la
méthode recommandée avec des suspensions connues comme
étant positives et négatives (suspensions colorées de Brucella
ou suspensions préparées à partir de cultures de Brucella
complètement identifiées).
INTERPRETATION DES RESULTATS
Le titre de sérum est la dernière dilution présentant une
agglutination positive. Un titre égalant ou approchant le titre
inscrit sur le flacon doit indiquer une homologie.
9. LIMITEs DE LA METHODE
Des antigènes communs à ceux de Brucella ont été décrits4,5
dans Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae et des espèces de
salmonelles. Les tests sérologiques utilisés seuls ne fournissent
rien de plus qu’une identification présomptive et un test de
confirmation biochimique doit être réalisé.
Les souches de Brucella présentent une réactivité croisée dans
les tests d’agglutination en tube, bien qu’il existe une différence
de réactivité.
10. REsuLTATs ATTENDus
Agglutination visible en présence d’antigènes homologues.
11. CARACTERIsTIQuEs sPECIfIQuEs
Brucella abortus (ZM01/R30164801) et Brucella melitensis
(ZM02/R30164901) présentent une agglutination visible dans les
tests d’agglutination en tube avec respectivement la suspension
colorée de Brucella abortus (SS14/R30855501) et la suspension
colorée de Brucella melitensis (SS15/R30953501).
12. BIBLIOGRAPHIE
1.
Corbel, M.J. and Brinley Morgan, W.J. (1975). Proposal for minimal
standards for descriptions of new species and biotypes of the genus
Brucella. Int. J. Syst. Bact., 25, 83.
2.
Wilson, G.S. and Miles, A.A. (1975). Topley and Wilson’s Principles
of Bacteriology, Virology and Immunity, 6th ed., London, E. Arnold.
Pages 1063-1065.
3.
Alton, G.G., Jones, L.M. et al. (1975). Laboratory Techniques in
Bruccellosis. 2nd ed., W.H.O. Monograph Series, No. 55.
4.
Corbel, M.J. (1975). The serological relationship between Brucella
spp., Yersinia enterocolitica serotype IX and Salmonella serotypes of
Kauffmann-White group N. J. Hyg. (Camb.), 75, 151.
5.
Feeley, J.C. (1969). Somatic O antigen relationship of Brucella and
Vibrio cholerae. J. Bacteriol., 99, 645.
13. CONDITIONNEMENT
ZM01/R30164801......................................................2 ml
ZM02/R30164901......................................................2 ml
Légende des symboles
Référence de catalogue
Dispositif médical de diagnostic in vitro
Consulter le mode d’emploi
Limite de température
conservation)
(température
de
Code de lot (numéro de lot)
A utiliser avant (date de péremption)
Dernière dilution montrant une agglutination
positive
Fabricant
FU X7815-GB, Imprimé au Royaume-Uni
révisée Novembre 2013
Remel Europe Ltd.
Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
UK
Pour tout support technique, contacter le distributeur local.
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