MODE D'EMPLOI –
MILIEUX EN BOITES DE
PETRI PRETS A L'EMPLOI
PA-254458.02
Rev.: Juin 2003
BD Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar)
APPLICATION
Lorsqu'elle est utilisée comme milieu de mise en culture, la BD Triple Sugar Iron Agar (gélose
à trois sucres et sel de fer) sert à la différenciation des Enterobacteriaceae, en particulier la
différenciation des Salmonella par rapport aux autres bactéries entériques.
PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE
Méthode microbiologique.
Hajna a mis au point la formulation de la TSI Agar en ajoutant du saccharose à la formulation de
la gélose à deux sucres (glucose et lactose), la Kligler Iron Agar.1,2 La Triple Sugar Iron Agar
contient trois glucides (glucose, lactose et saccharose). La fermentation de ces glucides
provoque une production d'acide, qui est détectée par l'indicateur au rouge de phénol. Des
changements de couleurs en résultent, et le milieu vire au jaune en cas de production d'acide,
ou au rouge en cas d'alcalinisation. La formation d'acide dans le culot est due à la présence de
deux sucres, le lactose et le saccharose, dont les concentrations sont beaucoup plus élevées
que la concentration de glucose ; la formation d'acide à partir du glucose est inhibée par une
oxydation rapide de la petite quantité d'acide présente dans la partie inclinée du tube, qui
entraîne une réaction faisant passer le milieu à un pH neutre ou alcalin lorsque seul du glucose
est fermenté. L'ajout de saccharose permet d'exclure certains coliformes et micoorganismes
Proteus susceptibles d'attaquer le saccharose, mais pas le lactose, pendant une durée
d'incubation de 24 à 48 h. En cas de pH neutre ou alcalin, l'acide sulfhydrique (produit à partir
de thiosulfate de sodium) réagit avec le sel d'ammonium ferreux et entraîne la formation de
sulfure de fer noir. Le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du milieu.
A l'origine, la formule de la gélose TSI est prévue pour une application en tant que milieu en
tubes, avec un culot et une surface inclinée. Cette technique permet la différenciation du
glucose, du lactose, et/ou des fermentants du saccharose et permet aussi de déceler la
production éventuelle d'acide sulfhydrique.
Lorsqu'elle est utilisée en tant que milieu de mise en culture, les réactions observées à la
surface de la gélose en boîte de Pétri se limitent à la formation de produits alcalins (produits à
partir des peptones contenues dans le milieu, si ni le glucose, ni le lactose, et/ou ni le
saccharose sont fermentés), ou de produits acides issus du lactose et/ou du saccharose, qui
sont les principaux sucres présents dans le milieu. En outre, la production d'acide sulfhydrique
survient si aucun des sucres n'est fermenté en produits acides, car la formation d'acide
sulfhydrique nécessite un environnement au pH neutre ou alcalin. La plupart des souches de
Proteus, connues pour leur capacité à produire de l'acide sulfhydrique dans un milieu à pH
neutre ou alcalin, acidifient le milieu car elles fermentent le saccharose et ne présentent pas de
coloration noire dans ce milieu, tandis que les souches de Salmonella, qui ne fermentent ni le
saccharose ni le lactose, produisent des colonies noires.
REACTIFS
BD Triple Sugar Iron Agar
Formule* par litre d'eau purifiée
Digestion pancréatique de caséine
Digestion peptique de tissu animal
Chlorure de sodium
Lactose
Saccharose
10,0 g
10,0
5,0
10,0
10,0
Glucose
Sulfate d’ammonium ferreux
Thiosulfate de sodium
Rouge de phénol
Gélose
pH 7,3 ± 0,2
*Ajustée et/ou complémentée en fonction des critères de performances imposés.
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-1-
1,0
0,2
0,2
0,025
13,0
PRECAUTIONS
. A usage professionnel uniquement.
Ne pas utiliser de boîte de Pétri présentant des signes de contamination microbienne,
décoloration, dessiccation ou fissure, ou d'autres signes de détérioration.
Consulter le document MODE D'EMPLOI GENERAL pour plus d'informations concernant les
procédures de manipulation aseptique, les risques biologiques et l'élimination des produits
usagés.
STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
Dès réception, conserver les boîtes de Pétri dans l’obscurité entre 2 et 8 °C, dans leur
emballage d’origine, jusqu’au moment de leur utilisation. Ne pas les congeler ni les surchauffer.
Les boîtes peuvent être ensemencées jusqu'à la date de péremption indiquée (voir l'étiquette de
l'emballage), et incubées pendant les durées recommandées.
Des boîtes provenant d’une pile ouverte de 10 boîtes sont utilisables pour une semaine
lorsqu’elles sont conservées entre +2 et +8 °C dans un endroit propre.
CONTROLE DE QUALITE PAR L'UTILISATEUR
Ensemencer des échantillons représentatifs avec les souches suivantes (pour plus de détails,
voir le document MODE D'EMPLOI GENERAL). Incuber les boîtes de Pétri en conditions
aérobie entre 35 et 37 °C pendant 18 à 24 h. Inclure un milieu non sélectif tel qu'une Columbia
Agar with 5% Sheep Blood pour servir de référence de croissance.
Souches
Croissance
Escherichia coli ATCC 25922
Croissance bonne à importante ; colonies jaunes, milieu
jaune autour des colonies
Croissance bonne à importante ; colonies de couleur rose, à
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
centre noir ; milieu de couleur rouge
Salmonella Abony DSM 4224
Croissance bonne à importante ; colonies de couleur rose, à
centre noir ; milieu de couleur rouge
Shigella flexneri ATCC 12022
Croissance bonne à importante ; colonies de couleur rose ;
milieu de couleur rouge
METHODE
Matériaux fournis
BD Triple Sugar Iron Agar (boîtes de Pétri Stacker de 90 mm). Produits contrôlés
microbiologiquement.
Matériaux non fournis
Milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.
Types d'échantillons
Il s'agit d'un milieu différentiel qui ne doit pas être utilisé pour l'isolement primaire de pathogènes
à partir d'échantillons cliniques. Il est utilisé pour la différenciation de cultures pures issues de
milieux d'isolement et peut aussi être utilisé en tant que milieu de repiquage à partir de bouillon
d'enrichissement de Salmonella (voir aussi CARACTERISTIQUES DES PERFORMANCES ET
LIMITES DE LA PROCEDURE).
Mode opératoire du test
Ensemencer la BD Triple Sugar Iron Agar avec une colonie suspecte prélevée dans une
boîte de Pétri d'isolement primaire ou avec une pleine anse de milieu prélevée à partir de
bouillon d'enrichissement de Salmonella (p. ex. un Selenite broth - bouillon de sélénite).
Incuber en atmosphère aérobie entre 35 et 37 °C pendant 18 à 24 h. Ne pas incuber en
atmosphère enrichie au dioxyde de carbone, et ne pas dépasser 24 h d'incubation car cela
risquerait de produire des résultats erronés.
Résultats
Généralement, les réactions constatées sur les boîtes de Pétri de BD Triple Sugar Iron Agar sont
telles qu'indiquées ci-dessous :
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Microorganismes
Escherichia coli
Klebsiella/Enterobacter
Croissance
Colonies jaunes, milieu de couleur jaune
Colonies jaunes, à l'aspect muqueux, milieu de couleur
jaune
Colonies dans les tons de rouge à marron, essaimage ;
Proteus
milieu rouge ; les souches positives pour le saccharose sont
susceptibles de produire des colonies jaunes auréolées de
jaune
Salmonella (souches positives au Colonies roses à centre noir ; milieu de couleur rouge
H2S)
Shigella et Salmonella négatives Colonies roses ; milieu de couleur rouge
au H2S
Petites colonies jaunes ; le milieu autour des colonies est
Enterococcus
rouge
Pour obtenir une identification complète de la croissance issue de ce milieu, les souches isolées
doivent faire l'objet d'une différenciation supplémentaire, réalisée au moyen de tests biochimiques
et/ou sérologiques.
CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE
La BD Triple Sugar Iron Agar est un milieu non sélectif utilisé pour la différenciation de
colonies présumées de Salmonella à partir des autres Enterobacteriaceae obtenues à partir de
milieux d'isolement, ou comme milieu de repiquage à partir d'un bouillon d'enrichissement de
Salmonella. Dans ce milieu, la plupart des souches de Salmonella produisent des colonies roses
à centre noir, tandis que les colonies d'autres microorganismes sont soit rouges, soit jaunes et
ne présentent pas de centre noir. Cependant, certaines souches de Salmonella ne présentent
pas de centre noir et risquent donc de ne pas être décelées si des tests de différenciation
supplémentaires ne sont pas réalisés.
De plus, le milieu ne permet pas de différencier Shigella de certaines autres Enterobacteriaceae.
Par conséquent, toutes les colonies roses qui ne présentent pas de centre noir doivent faire
l'objet de dépistages visant à mettre en évidence la présence éventuelle de Salmonella et de
Shigella, p. ex. au moyen de tests d'agglutination sur lame avec les antisérums appropriés.
Des tests biochimiques ou sérologiques supplémentaires sont nécessaires pour confirmer les
résultats obtenus sur ce milieu.3
Les réactions obtenues sur BD Triple Sugar Iron Agar, fournie en tant que milieu de mise en
culture, sont susceptibles de varier par rapport à celles décrites pour une Triple Sugar Iron Agar
fournie en tant que tubes.4
La BD Triple Sugar Iron Agar n'est pas un milieu d'isolement primaire pour les Salmonella ou
d'autres pathogènes.
Evaluation des performances
Au cours d'une procédure d'évaluation interne (voir le tableau 1), trente souches
d'Enterobacteriaceae, Enterococcus spp. et de Staphylococcus aureus, et notamment dix
souches de Salmonella de sérotypes différents, ont été testées sur BD Triple Sugar Iron Agar.5
Les boîtes de Pétri ont été incubées à l'air ambiant pendant 20 h, entre 35 et 37 °C. Parmi les
dix souches de Salmonella, neuf ont produit des colonies rouges à centre noir, et une colonie n'a
pas présenté de centre noir. Toutes les autres espèces ont produit les réactions attendues. Cela
donne un pourcentage de sensibilité de 96,8 % pour l'ensemble des souches testées, et de
91 % pour les souches de Salmonella.
REFERENCES
1. Hajna, A. A. 1945. Triple-sugar iron agar medium for the identification of the intestinal group
of bacteria. J. Bacteriol. 49:516-517.
2. Kligler, I. J. 1918. Modifications of culture media used in the isolation and differentiation of
typhoid, dysentery, and allied bacilli. J. Exp. Med. 28:319-322.
3. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003.
Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A.
PA-254458.02
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Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation – cultivation – maintenance of medical
bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London
5. Data on file. BD Diagnostic Systems Europe. Heidelberg, Germany.
CONDITIONNEMENT
BD Triple Sugar Iron Agar
No réf. 254458
Milieux en boîtes de Pétri prêts à l'emploi, 20 unités par carton
Tableau 1 : Résultats des performances
Espèces (Nobre de souches)
Enterococcus faecalis (1)
Enterococcus faecium (1)
Escherichia coli, positives au
lactose (4)
Croissance sur BD Triple Sugar Iron Agar
Escherichia coli, négatives au
lactose (1)
Morganella morganii (1)
Colonies roses de taille moyenne à grande ; milieu de couleur
rouge à rose
Colonies roses de taille moyenne à grande ; milieu de couleur
rouge à rose
Colonies roses, de taille moyenne à grande, présentant des zones
d'essaimage ; milieu de couleur rouge à rose
Colonies jaunes de taille moyenne à grande, présentant des zones
d'essaimage, milieu de couleur jaune
Proteus mirabilis (2)
Proteus penneri (1)
Proteus vulgaris (1)
Providencia alcalifaciens (1)
Providencia rettgeri (1)
Providencia stuartii (1)
Salmonella Abony (1)
Salmonella Augustenborg (1)
Salmonella Bovismorbificans (1)
Salmonella Enteritidis (1)
Salmonella Gallinarum (1)
Salmonella Hadar (1)
Salmonella Saintpaul (1)
Salmonella Senftenberg (1)
Salmonella Typhimurium (1)
Salmonella Typhimurium (1)
Shigella boydii (1)
Shigella flexneri (1)
Shigella sonnei (1)
Staphylococcus aureus (2)
Petites colonies jaunes, milieu de couleur jaune
Colonies jaunes de taille moyenne à grande, milieu de couleur
jaune
Colonies roses de taille moyenne à grande ; milieu de couleur
rouge à rose
Colonies roses à centre noir, de taille moyenne à grande ; milieu
de couleur rouge à rose
Colonies roses de taille moyenne à grande ; milieu de couleur
rouge à rose
Colonies roses de taille moyenne à grande ; milieu de couleur
rouge à rose
Colonies jaunes, de taille petite à moyenne ; milieu de couleur
jaune
INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES
Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
PA-254458.02
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11 rue Aristide Bergès
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2003 Becton, Dickinson and Company
PA-254458.02
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