Oxoid Legionella Mode d'emploi

Legionella Latex Test
FR
DR0801M
DR0802M
DR0803M
Le Legionella Latex Test est un test d’agglutination au latex pour
l’identification des espèces prédominantes de Legionella à partir
de colonies sur milieu gélosé, chez des patients suspectés de
Legionellose ou à partir de l’environnement.
1.
Composition du coffret
Ce coffret contient l’un des réactifs tests suivants :
DR801 réactif test pour Legionella pneumophila serogroupe 1
Consiste en des particules de latex bleu sensibilisées par
des anticorps de lapin spécifiques réagissant avec l’antigène
Legionella pneumophila sérogroupe 1. Chaque coffret contient le
réactif en quantité suffisante pour 50 tests.
OU
DR802 réactif test pour Legionella pneumophila sérogroupes
2–14
Constitué de particules de latex bleues sensibilisées aux anticorps
de lapin spécifiques réagissant avec les antigènes de Legionella
pneumophila sérogroupes 2–14. Il est également capable de
détecter les antigènes de Legionella pneumophila sérogroupe 15
(ATCC® 35251).
Chaque coffret contient du réactif en quantité suffisante pour
effectuer 50 tests.
OU
DR803 réactif test Legionella spp.
Consiste en des particules de latex bleu sensibilisées par des
anticorps de lapin spécifiques réagissant avec les espèces et les
sérotypes suivants:
L. longbeachae 1 et 2
L. bozemanii 1 et 2
L. dumoffii
L. gormanii
L. jordanis
L. micdadei
L. anisa
Chaque coffret contient le réactif en quantité suffisante pour 50
tests.
L’azoture de sodium peut réagir avec la tuyauterie en plomb ou en
cuivre pour former des azotures metalliques hautement explosifs.
Pour prévenir une accumulation d’azoture dans la tuyauterie,
évacuer avec un grand volume d’eau.
Pour toute information sur les composants potentiellement
dangereux, veuillez-vous référer à la fiche de données de sécurité
du fabricant et à l’étiquette du produit.
3.
Conservation
Ce coffret doit être conservé à 2-8°C.
4.
Recueil et préparation des échantillons
Les souches provenant d’échantillons de l’environnement ou
d’échantillons cliniques peuvent être cultivées sur des milieux
de culture Legionella non sélectifs ou sélectifs. Les Legionella
necessitent en isolement primaire du chlorydrate de L-cystéine.
Pour s’assurer que la souche est une Legionella, il est nécessaire
de montrer qu’elle ne peut pas pousser sur un milieu ne contenant
pas de chlorydrate de L-cystéine. Cette confirmation peut être
pratiquée avant ou après le test au latex.
Les cultures peuvent être testées à n’importe quel stade de la
croissance à condition que les colonies soient de taille suffisante.
Cependant, des cultures plus anciennes peuvent produire des
réactions filamenteuses qui rendent l’interprétation plus difficile.
5.
Méthodes
Deux méthodes peuvent être utilisées. Les deux méthodes,
directe ou en tube, donnent des résultats fiables. Si une souche
a une consistance filamenteuse, il est recommandé d’utiliser la
méthode en tube.
(a) Test direct
1.
2.
3.
Ce coffret contient également :
DR806 Latex de contrôle
Consiste en des particules de latex bleu sensibilisées par des
anticorps de lapin non réactifs, pour 50 tests.
DR807 Tampon
PBS – pH 7,3.
4.
5.
Mode d’emploi
2.
Précautions
Pour usage in vitro uniquement.
Ne pas congeler.
Les réactifs contiennent 0,1% d’azoture de sodium comme agent
de conservation.
R22 - Nocif par ingestion
6.
Ramener les réactifs au latex à température ambiante.
Mélanger vigoureusement les suspensions de latex. Ajouter
une goutte du latex test dans l’un des cercles de la carte de
réaction, le plus proche possible de ses extrémités. Répéter
cette opération pour le latex contrôle.
Ajouter une goutte de tampon diluant dans chaque cercle.
S’assurer que le latex et le tampon ne se mélangent pas au
cours de cette étape.
En utilisant une anse, prélever une colonie d’au moins 1 mm
(utiliser 2 colonies ou plus si celles-ci sont plus petites) et
l’émulsionner avec soin dans la première goutte de solution
tampon. Pour des résultats optimaux, s’assurer que la
suspension est homogène.
Répéter cette opération pour les mêmes colonies dans la
seconde goutte de tampon.
Pour chaque réactif latex test et contrôle, mélanger le latex
avec les suspensions et répartir en utilisant l’anse pour
recouvrir les zones de réaction. Flamber l’anse.
Imprimer à la carte un mouvement de rotation circulaire et
observer l’agglutination. Ne pas dépasser 1 minute et ne
pas utiliser une loupe pour lire le résultat.
7.
Une fois l’opération terminée, éliminer la carte de réaction
dans un désinfectant approprié.
8.
Refermer les flacons et les placer de nouveau au
réfrigérateur.
(b) Méthode en tube
1.
Ramener les reactifs au latex à température ambiante.
Mélanger vigoureusement les suspensions de latex. Expulser
tout le latex de la pipette compte-gouttes.
2.
Identifier les tubes de façon appropriée et délivrer 0,4 ml
de solution saline à 0,85% dans chaque tube.
3.
Sélectionner à l’aide d’une oese 4 à 10 colonies d’apparence
similaire et émulsionner dans la solution saline.
4.
Mélanger â l’aide d’un Vortex pendant 5 secondes.
5.
Ajouter une goutte du latex test dans l’un des cercles de la
carte de réaction, le plus proche possible de ses extrémités.
Répéter cette opération pour le latex contrôle.
6.
Ajouter une goutte de tampon diluant dans chaque cercle.
S’assurer que le latex et le tampon ne se mélangent pas au
cours de cette étape.
7.
A l’aide d’une pipette Pasteur, ajouter 1 goutte de suspension
de cellules sur chacun des 2 cercles et les mélanger aux
réactifs au latex. Couvrir toute la zone de réaction.
8.
Imprimer à la carte un mouvement de rotation circulaire et
observer l’agglutination. Ne pas dépasser 1 minute et ne
pas utiliser une loupe pour lire le résultat.
9.
Une fois l’opération terminée, éliminer la carte de réaction
dans un désinfectant approprié.
10. Refermer les flacons et les placer de nouveau au
réfrigérateur.
6.
Lecture et interprétation des résultats
Résultat positif
Un résultat est positif si l’agglutination des particules de latex
bleu apparaît en 1 minute et s’il n’y a pas d’agglutination dans
le cercle de contrôle. Une réaction positive indique la présence
des antigènes du sérogroupe de Legionella correspondant dans
l’échantillon.
Résultat négatif
Un résultat négatif est obtenu si aucune agglutination n’apparaît
en 1 minute et si la suspension reste homogène.
Résultat non interprétable
Un test est ininterprétable si le réactif de contrôle montre
une agglutination. Cela indique que la culture entraîne une
autoagglutination.
Réaction granuleuse ou filamenteuse
Des réactions granuleuses ou filamenteuses peuvent apparaître
occasionnellement compte-tenu de la nature particulière du
matériel testé. Quand de telles réactions apparaissent, elles
doivent être interprétées selon les critères suivants:
Le résultat est positif quand il y a éclaircissement visible du fond
bleu.
Le résultat est négatif quand il n’y a pas d’éclaircissement notable
du fond bleu.
7.
1.
Limites du test
Le test d’agglutination au latex est un diagnostic présomptif.
Confirmer les résultats positifs en utilisant des tests
biochimiques.
2.
Un test d’agglutination latex négatif ne signifie pas que la
culture
n’est pas une culture de Legionella species. Il
indique seulement que la culture n’est pas une culture de
Legionella species pouvant être détectée par les réactifs
tests utilisés.
3.
Une réaction croisée peut se produire entre L. pneumophila
sérogroupe 1 et sérogroupe 9. Si une souche de Legionella
agglutine avec les 2 réactifs au latex, sérogroupe 1 et 2-14,
cette réaction croisée doît être suspectée.
4.
Des réactions croisées entre le réactif test pour Legionella sp.
et certains sérotypes d’autres legionella (e.g. L. parisiensis,
L. sainthelensi, L. steigerwaltii, L. wadsworthii, L. santicrucis,
L. tusconensis, L. gratiana, L. cincinatiensis) ont été
signalées.
5.
Le test est conçu pour séparer différentes espèces et les
sérotypes de Legionella. Il est donc nécessaire de s’assurer
que les colonies testées sont bien des bacilles Gram négatif
et qu’elles ne se développent pas sur des milieux ne
contenant pas de cystéine.
Pour de plus amples informations, vous pouvez vous référer
à la fiche technique jointe dans le coffret Legionella Latex Test
(DR0800M).
8.
Performances
Les réactifs du Legionella Test Kit Oxoid ont été testés pour détecter
d’éventuelles réactions croisées avec les micro- organismes cités
ci-dessous. Aucune réaction croisée n’a été observée.
L. cherri
L. birminghamensis
L. rubrilucens
L. maceachernii
L. oakridgensis
L. erythra
L. feelei
L. fairfieldensis
L. brunensis
L. spiritensis
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas cepacia
Pseudomonas aeruginosa
Aeromonas hydrophila
L. hackeliae
L. israeliensis
L. jamestowniensis
L. quinlivanii
L. moravica
Stenotrophomonas maltophilia
Bacillus subtilis
Citrobacter freundii
Eschericia coli
Serratia marcescens
Le Legionella Latex Test a été évalué dans un laboratoire clinique
et d’hygiène. Un total de 40 souches cliniques et 279 de souches
issues de l’environnement ont été testées, couvrant les Legionella
pneumophila sérogroupe 1–14 et les Legionella non pneumophila.
Chaque souche a été confirmée par sérologie.
La performance du coffret Oxoid a été aussi comparée à d’autres
coffrets de réactif au latex Legionella disponibles dans le
commerce. Les résultats des essais sont résumés ci-dessous.
Le sérogroupe 15 de L. pneumophila n’a, pour l’heure, pas été
isolé des échantillons cliniques ou environnementaux en Europe9
et n’a été isolé qu’une seule fois aux États-Unis.8
Le sérogroupe le plus récemment décrit ne contient qu’une
seule souche (Lansing-3 (ATCC® 35251)). À partir de l’étude
de l’isolat du Jena-110,11, un 16ème sérogroupe a été proposé,
mais des analyses complémentaires ont montré que la souche
ne constituait pas un sérogroupe unique mais faisait partie du
sérogroupe 4 de L. pneumophila (groupe monoclonal Portland
1).12,13
Des données internes supplémentaires ont été récoltées
et démontrent qu’Oxoid Legionella Latex Kit (DR0800M et
DR0802M) est capable de détecter le sérogroupe 15 de Legionella
pneumophila (ATCC® 35251) ainsi que les sérogroupes 1-14 de
L. pneumophila et d’autres souches pathogènes de Legionella,
autres que L. pneumophila. Cependant, puisque seule une
souche du sérogroupe 15 est disponible pour le test, il n’a pas été
jugé approprié de renommer le réactif de latex des sérogroupes
2-14 d’après les résultats d’un isolat unique.
Les Oxoid Legionella kits permettent aux utilisateurs de classer les
échantillons en trois groupes : sérogroupe 1 de L. pneumophila,
sérogroupes 2-15 de L. pneumophila (avec réactif 2-14) et
d’autres Legionella species grâce à une procédure d’analyse
rapide et simple.
pneumonia subsp. pneumophila subsp. nov., L. pneumophila subsp.
fraseri subsp. nov., and L. pneumophila subsp. pascullei subsp. nov.
Journal of Clinical Microbiology; 1988; 26: 1695-1703.
9.
Helbig, J. H et al. Pan-European Study on Culture Proven Legionnaires’
Disease: Distribution of Legionella pneumophila Serogroups and
Monoclonal Subgroups. European Journal of Clinical Microbiology and
Infectious Disease; 2002; 21: 710-716.
10. Lück, C et al. Isolation of a Legionella pneumophila Strain Serologically
Distinguishable from all known Serogroups. Zentralblatt fuer
Bakteriologie. 1995; 282: 35-39.
11. Fry, N. K and Harrison, T. G. An evaluation of intergenic rRNA gene
sequence length polymorphism analysis for the identification of
Legionella species. Molecular Identification and Epidemiology; 1998;
47: 667-678.
12. Lück, P. C et al. DNA Polymorphisms in Strains of Legionella
pneumophila Serogroups 3 and 4 Detected by Macrorestriction
Analysis and Their Use for Epidemiological Investigation of Nosocomial
Legionellosis. Applied and Environmental Microbiology; 1995; 61:
2000-2003.
13. Helbig, J. H. 2003. Personal Communication.
Légende des symboles
_________________________________________
Référence de catalogue
Dispositif médical de diagnostic in vitro
Consulter le mode d’emploi
Limite de température
La sensibilité globale du Legionella Latex Test OXOID est de 99%.
La spécificité globale du Legionella Latex Test OXOID est de 100%.
Code de lot
9.
A utiliser avant
Fabricant
Legionella pneumophila sérogroupe 1
Legionella pneumophila sérogroupes 2–14
Autres Legionella comprises dans le coffret
Autres Legionella non comprises dans le coffret
Autres micro-organismes
Legionella
Oxoid
Nombre
59/59
136/136
51/54
0/60
0/10
Coffret Latex/
Serologie
%
100
100
94,4
100
100
References:
1.
Sedgwick, A. K. and Tilton, R. C. (1983). J. Clin. Microbiol., 17: 365–368.
2.
Ciesielski, C. A., Blaser, M. J. and Wang, W. L. (1986). Infect. Immun.,
51: 397–404.
3.
Dennis, P. J. L. (1988). Isolation of Legionellae from Environmental
Specimens p. 31–44. In Harrison, T. G. and Taylor, A. G. (eds). A
Laboratory Manual for Legionella. John Wiley & Sons Ltd., Chichester,
UK.
4.
Dournon, E. (1988). Isolation of Legionellae from Clinical Specimen p.
13–30. In Harrison, T. G. and Taylor, A. G. (eds). A Laboratory Manual
for Legionella. John Wiley & Sons Ltd., Chichester, UK.
5.
Cowan and Steel’s Manual for the identification of Medical Bacteria
3rd Ed. Barrow, G. I. and Feltham, R. K. A. (eds) (1993) p. 161–163.
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6.
Harrison, T. G. and Taylor, A. G. (1988). Identification of Legionellae
by Serological Methods. In Harrison, T. G. and Taylor, A. G. (eds). A
Laboratory Manual for Legionella. John Wiley & Sons Ltd., Chichester,
UK.
7.
Data on file Oxoid Ltd.
8.
Brenner et al. Legionella pneumophila Serogroup Lansing 3
Isolated from a Patient with Fatal Pneumonia, and Descriptions of L.
IFU X5058C Révisé Septembre 2013
OXOID Limited, Wade Road, Basingstoke, Hampshire, RG24 8PW, UK
Pour toute information, veuillez contacter votre distributeur
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